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苦杏仁中苦杏仁苷检测 杏大家应该都见过,也应该都吃过,杏仁大家可能也见过,也可能吃过,甚至还可能喝过用杏仁做的杏仁露。杏仁是蔷薇科植物山杏或杏的干燥成熟种子,是除去杏外层果肉和核壳最核心的部分。大家吃杏仁或喝杏仁露都能感觉到它有一股特异的香气,味微苦。一般的杏仁吃时需炒熟,味微苦,微毒,不宜多吃。生杏仁味较苦,而且有较强的毒性,需注意。 作为中药材,苦杏仁具有降气、止咳、抗炎、镇痛、平喘、润肠、通便、抗癌、降血糖、降血脂、美容等药物功效,可用于治疗咳嗽、气喘、胸满痰多、肠燥便秘、消化系统疾病、消解病人疼痛痛苦等。 很普通的东西具有很了不起的药用价值,其中重要成分严格检测是必不可少的,药典中也有很严格的要求。下面就介绍下高效液相色谱检测苦杏仁中苦杏仁苷过程及结果。【实验部分】【原理】 取适量苦杏仁粉碎后经甲醇超声提取,注入色谱系统,经C18色谱柱分离,紫外检测器检测,外标法(保留时间定性,峰面积定量)分析计算,得出结果。【仪器及试剂】 仪器:高效液相色谱仪(紫外检测器+等度泵+柱温箱+在线脱气机等),超声波清洗仪,溶剂过滤器,电子天平(0.0001),药典筛二号筛等。 试剂:甲醇(色谱纯),乙腈(色谱纯),磷酸(分析纯),超纯水等。【样品制备】 对照品溶液制备:精密称取苦杏仁苷对照品2mg于50ml容量瓶中,加甲醇溶解、定容,制成40μg/ml苦杏仁苷对照品溶液,备用。 供试品溶液制备:取苦杏仁样品适量,充分粉碎后过药典筛二号筛,准确称取过筛粉末0.25g于具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25ml,密塞,称定重量,超声处理30分钟,放冷,再次称定重量,用甲醇补足减少的重量,摇匀。 精密量取以上溶液5ml于50ml容量瓶中,加50%甲醇稀释至刻度,摇匀,0.45um有机相微膜滤过,待测。【色谱条件】检测器:紫外检测器检测波长:207nm色谱柱:Promosil C18 ( 250 mm X 4.6mm,5μm )流动相:乙腈:0.1%磷酸溶液=8:92(V:V)流速:1.0ml/min柱温:30℃进样量:20μl【色谱图】对照品色谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508221948_562173_2536753_3.png供试品色谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508221948_562174_2536753_3.png【计算】计算公式:样品中被测物含量计算公式:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508221948_562175_2536753_3.pngD----供试品中被测物含量,以(%)表示V----供试品稀释的总体积,单位(mL)P3----供试品被测物峰面积值P4-----对照品被测物峰面积值ρ2----对照品被测物浓度。单位为mg/mlm2----样品质量,单位(mg)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508221948_562176_2536753_3.png【结果】 通过计算,苦杏仁中苦杏仁苷的含量近似为3.54%,高于药典要求的3.0%,该苦杏仁中苦杏仁苷含量满足药典要求,该检测项目合格。【结论】 以上方法检测苦杏仁中苦杏仁苷含量结果准确、可靠,方法简便易操作,该方法适合该类样品检测。
[size=20px][color=#93c6bc][b]鉴别[/b][/color][/size][size=16px][color=#e2a4a4]|[/color][/size] [font=宋体][/font] [b][font=宋体][/font][/b][font=宋体][/font][b][font=宋体][/font][/b] [font=宋体][/font] [font=宋体][/font] [font=宋体][color=black][/color][/font] [font=宋体][/font][font=宋体] [/font] [font=宋体][/font][font=宋体][/font] [font=宋体][/font] [font=宋体](1)种皮表面观:种皮[color=var(--weui-LINK)]石细胞[i][/i][/color]单个散在或数个相连,黄棕色至棕色,表面观类多角形、类长圆形或贝壳形,直径25~150μm。种皮外表皮细胞浅橙黄色至棕黄色,常与种皮石细胞相连,类圆形或多边形,壁常皱缩。[/font] [font=宋体](2)取本品粉末2g,置[color=var(--weui-LINK)]索氏提取器[i][/i][/color]中,加二氯甲烷适量,加热回流2小时,弃去二氯甲烷液,药渣挥干,加甲醇30ml,加热回流30分钟,放冷,滤过,滤液作为供试品溶液。另取苦杏仁苷对照品,加甲醇制成每1ml含2mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验,吸取上述两种溶液各3μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15:40:22:10)5~10℃放置12小时的下层溶液为展开剂,展开,取出,立即用0.8%磷钼酸的15%硫酸乙醇溶液浸板,在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。[/font] [font=宋体][/font] [font=宋体][/font] [font=宋体][/font][font=宋体][/font] [font=宋体][/font] [size=20px][color=#93c6bc][b]检查[/b][/color][/size][size=16px][color=#e2a4a4]|[/color][/size][b][font=宋体][/font][/b] [font=宋体][/font] [font=宋体][/font] [font=宋体][/font] [font=宋体][/font] [font=宋体][/font] [b][font=宋体]水分 [/font][/b][font=宋体]不得过7.0%(通则0832第四法)。[/font] [b][font=宋体]过氧化值[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]不得过0.11(通则2303)。[/font] [b][font=宋体]【含量测定】[/font][/b][font=宋体] 照高效液相色谱法(通则0512)测定。[/font] [b][font=宋体]色谱条件与系统适用性试验[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]以[color=var(--weui-LINK)]十八烷基硅烷键合硅胶[i][/i][/color]为填充剂;以乙腈-0.1%磷酸溶液(8:92)为[color=var(--weui-LINK)]流动相[i][/i][/color];检测波长为207nm。理论板数按苦杏仁苷峰计算应不低于7000。[/font] [b][font=宋体]对照品溶液的制备[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]取苦杏仁苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含40μg的溶液,即得。[/font] [b][font=宋体]供试品溶液的制备[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]取本品粉末(过二号筛)约0.25g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25ml,密塞,称定重量,超声处理(功率250W,频率50kHz)30分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,过滤,精密量取续滤液5ml,置50ml量瓶中,加50%甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。[/font] [b][font=宋体]测定法[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10~20μl,注入液相色谱仪,测定,即得。[/font] [font=宋体]本品含苦杏仁苷(C[sub]20[/sub]H[sub]27[/sub]NO[sub]11[/sub])不得少于3.0%。[/font]
最近实验室发现使用岛津hplc检测中药材苦杏仁的时候,主峰苦杏仁苷会分裂为两个峰,已确认色谱柱流动相溶液制备均无异常。同时流动相色谱柱测试溶液立即转移到waters仪器检测,主峰分裂的异常消失。岛津仪器检测时候参照的岛津2020版中国药典中药应用文集使用相同的仪器,色谱柱,仪器方法参数,然而实验室中就是发生主峰分裂的现象同是伴随明显的基线漂移。请问各位老师有遇到过这种情况吗?或者这种情况应该如何解释。[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/06/202206200919420853_3550_3902921_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/06/202206200919421879_3633_3902921_3.png[/img]