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一、目的要求 通过对分离真菌用的马丁氏(Martin)培养基配制,掌握对选择培养基的配制方法,并明确选择的原理。 二、基本原理 马丁氏培养基是一种用来分离真菌的选择性培养基。此培养基是由葡萄糖、蛋白胨、KH2PO4、MgSO4•7H2O、孟加拉红(玫瑰红,Rose Bengal)和链霉素等组成。其中葡萄糖主要作为碳源,蛋白胨主要作为氮源,KH2PO4和MgSO4•7H2O作为无机盐,为微生物提供钾、磷和镁离子。而孟加拉红和链霉素主要是细菌和放线菌的抑制剂,对真菌无抑制作用,因而真菌在这种培养基上可以得到优势生长,从而达到分离真菌的目的。 马丁氏培养基配方如下: KH2PO4 1g MgSO4•7H2O 0.5g 蛋白胨 5g 葡萄糖 10g 琼脂 15—20g 水 1000ml pH 自然 此培养液1000ml加1%孟加拉红水溶液3.3ml。临用时每100ml培养基中加1%链霉素液0.3ml。 三、器材 KH2PO4,MgSO4•7H2O,蛋白胨,葡萄糖,琼脂,孟加拉红,链霉素; 试管,三角烧瓶,量筒,玻棒,培养基分装器,扭力天平,牛角匙,高压蒸汽灭菌锅等。 四、操作步骤 1.称量和溶化 按培养基配方,准确称取各成分,并将各成分依次溶化在少于所需要的水量中。待各成分完全溶化后,补足水分到所需体积。再将孟加拉红配成1%的溶液,在1000ml培养液中加入1%的孟加拉红溶液3.3ml,混匀后,加入琼脂加热溶化(方法同实验十九)。 2.分装、加塞、包扎、灭菌,无菌检查与实验十九相同。 3.链霉素的加入 由于链霉素受热容易分解,所以临用时,将培养基溶化后待温度降至45℃左右时才能加入。可先将链霉素配成1%的溶液,在100ml培养基中加1%链霉素液0.3ml,使每毫升培养基中含链霉素30μg。
问:常用菌种及培养基英文对照答:Bacillus subtilis 枯草芽孢杆菌 Bacillus pumilus 短小芽胞杆菌 Staphylococcus aureus 金黄色葡萄球菌 Micrococcus luteus藤黄微球菌 Escherichia coli 大肠埃希杆菌 Saccharomyces cerevisiae啤酒酵母菌 Candida albicans 白色念珠菌 Aspergillus niger黑曲霉 Salmonella paratyphi B 乙型副伤寒沙门(氏)菌 Pseudomonas aeruginosa铜绿假单胞菌 Coliform 大肠菌群 Clostridium 梭菌 Nutrient agar 营养琼脂培养基 Rose Bengal agar Sodium 玫瑰红钠琼脂培养基 Nutrient broth medium营养肉汤培养基 Thioglycollate medium 硫乙醇酸盐流体培养基 Martin medium modified 改良马丁培养基 Bile salt lactose enrichment 胆盐乳糖培养基 0.1% peptone water medium 0.1% 蛋白胨水 pH 7.0 sodium chloride peptone buffer pH 7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 Lactose bile salt fermentation medium 乳糖胆盐发酵培养基[
沙氏琼脂培养基(SDA)用途:用于医药工业洁净室(区)沉降菌的测试(GB/T 16294—2010)用法:取上述成分除琼脂,混合,微热溶解,调节ph值使灭菌后为5.6 ±0.2,假如琼脂,加热融化后,分装,灭菌,冷却至约60℃,在无菌操作要求下倾注约20ml至无菌平皿(¢90mm3 )中。加盖后在室温放至凝固。平皿培养及保存:制备好的培养基平皿宜在2℃-8℃保存,一般以一周为宜或按厂商提供的标准执行。采用适宜方法在平皿上做好培养基的名称、制备日期记录的标记。