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2014年食源性致病菌金黄色葡萄球菌风险监测分析 葡萄球菌是革兰氏阳性球菌中的一种,广泛分布于自然界,如空气、水、土壤等,同时存在于人体、动物体的皮肤及其与外界相通的腔道中。绝大部分不致病,少数可引起人类或动物致病,属于人兽共患病原菌。其中金黄色葡萄球菌致病力最强,除了常引起皮肤、组织及器官的化脓性炎症外,其产生的肠毒素也可污染食物而导致食物中毒。近年来,由金黄色葡萄球菌肠毒素引起暴发的中毒事件当首推2000年日本“雪印奶粉”事件,14000多人受感染。金黄色葡萄球菌至今仍是国内外医院获得性感染最常见的细菌之一。能产生大量的侵袭性物质,如各种酶类,多种毒素和菌体的一些成分等。其引起的疾病主要分为两类,侵袭性疾病和毒素性疾病,在我国由金葡菌肠毒素引起的食物中毒占细菌性食物中毒事件的前几位。就这种情况笔者就本地2014年食品金葡菌检验结果做如下总结。 1 材料与方法1.1试剂和仪器 使用的培养基有10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤、7.5%氯化钠肉汤、血琼脂平板、Baird-Parker 琼脂购买于北京路桥公司,兔血浆购买于碧迪公司。主要仪器包括均质器,电子天平:感量0.1g,VITEK-2 Compact 全自动微生物鉴定系统。1.2依据和方法 根据国家食品安全风险评估中心制定的“食源性致病菌监测工作手册”要求进行增菌、分离、鉴定、菌种保存及送上级实验室复核。试验程序见图1。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412051137_526003_2433088_3.jpg
一、金黄色葡萄球菌及其肠毒素 葡萄球菌属(Staphylococcus)至少包括有20个种。其中金黄色葡萄球菌是一种引起人类和动物化脓感染的重要致病菌,也是造成人类食物中毒的常见致病菌之一,可引起许多严重感染。本菌广泛分布于自然界,如空气、土壤、水及其它环境中。在人类和动物的皮肤及外界相通的腔道中也存在次菌。1.病原学特征 革兰氏阳性球菌,直径为0.8-1.0μm,成对或成短链状排列,或呈葡萄状聚集,无芽孢,无鞭毛(见图6-6)。 图6-6 金黄色葡萄球菌显微形态结构 file:///C:/DOCUME~1/ADMINI~1/LOCALS~1/Temp/ksohtml/wps_clip_image-28057.png file:///C:/DOCUME~1/ADMINI~1/LOCALS~1/Temp/ksohtml/wps_clip_image-27880.png 不能运动,一般不形成荚膜,但在少数菌株的外层可见有荚膜样的粘液物质。需氧或兼性厌氧菌,营养要求不高,于普通培养基上生长良好,37℃孵育24~48h形成直径1~2mm圆形、隆起、表面光滑、湿润、有光泽、不透明、边缘整齐的菌落。在室温下长时间培养产生脂溶性色素,使菌落呈金黄色。于血液琼脂平板上培养,金黄色葡萄菌菌落周围可形成完全透明溶血环(β溶血)。在液体培养基中呈混浊生长。生长温度在6.5-46℃之间,最适温度为30-37℃,能在冰冻环境下生存,能在质量分数为15%NaCl和40%胆汁中生长。在水分活度为0.87的条件下仍能存活。分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖,产酸不产气。分解甘露醇产酸在鉴定致病性方面有一定意义。 在不形成芽胞的细菌中金黄色葡萄球菌抵抗力最强。于干燥的脓汁或痰液中可存活2~3个月;加热60℃1h或80℃30min才能将其杀死。在2%石炭酸中15min或在0.1%升汞中10-15min死亡。耐盐,在含有10%~15%NaCl的培养基中仍能繁殖。对某些染料较敏感。如1︰10-20万倍稀释的龙胆紫溶液能抑制其生长。对青霉素、金霉素、红霉素和庆大霉素高度敏感,对链霉素中度敏感,对万古霉素也敏感;但对磺胺、氯霉素敏感性差。近年来由于抗生素的选择作用,耐药菌株逐年增多,尤其是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)已成为医院内感染最常见的致病菌。 金黄色葡萄球菌可通过化脓性炎症的病人或带菌者在接触食品后,使食品污染。金黄色葡萄球菌在20~37℃及适宜的pH和合适的食品条件下能产生肠毒素,如被金黄色葡萄球菌污染的食物,通常在21~30℃下,放置3~5h,就能产生足以引起中毒的肠毒素。50%以上的金黄色葡萄球菌可产生肠毒素,并且一个菌株能产生两种以上的肠毒素,引起食物中毒的肠毒素是一组对热稳定的低分子量可溶性蛋白质,分子量为26000-30000。 常用噬菌体分型。目前国际上将金黄色葡萄球菌分为4个噬菌体群、23个噬菌体型。噬菌体分型可用于流行病学调查按抗原性可分为A、B、C1、C2、C3、D、E、F共8个血清型且均能引起食物中毒,尤以[font=Ti
金黄色葡萄球菌及检验 一、生物学特性 典型的金黄色葡萄球菌为球型,直径0.8μm左右,显微镜下排列成葡萄串状。金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛,大多数无荚膜,革兰氏染色阳性。金黄色葡萄球菌营养要求不高,在普通培养基上生长良好,需氧或兼性厌氧,最适生长温度37°C,最适生长pH 7.4。平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起,直径1-2mm。血平板菌落周围形成透明的溶血环。金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性,可在10-15%NaCl肉汤中生长。可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖,产酸不产气。甲基红反应阳性,VP反应弱阳性。许多菌株可分解精氨酸,水解尿素,还原硝酸盐,液化明胶。金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力,对磺胺类药物敏感性低,但对青霉素、红霉素等高度敏感。二.流行病学 金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在,空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。因而,食品受其污染的机会很多。近年来,美国疾病控制中心报告,由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位,仅次于大肠杆菌。金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问题,在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的33%,加拿大则更多,占45%,我国每年发生的此类中毒事件也非常多。金黄色葡萄球菌的流行病学一般有如下特点: 季节分布,多见于春夏季;中毒食品种类多,如奶、肉、蛋、鱼及其制品。此外,剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒事件也有报道。上呼吸道感染患者鼻腔带菌率83%,所以人畜化脓性感染部位常成为污染源。一般说,金黄色葡萄球菌可通过以下途径污染食品: 食品加工人员、炊事员或销售人员带菌,造成食品污染;食品在加工前本身带菌,或在加工过程中受到了污染,产生了肠毒素,引起食物中毒;熟食制品包装不严,运输过程受到污染;奶牛患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓时,对肉体其他部位的污染。 肠毒素形成条件: 存放温度,在37°C内,温度越高,产毒时间越短; 存放地点,通风不良氧分压低易形成肠毒素; 食物种类,含蛋白质丰富,水分多,同时含一定量淀粉的食物,肠毒素易生成。三.致病性 金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌,可引起局部化脓感染,也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等,甚至败血症、脓毒症等全身感染。金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶:a.溶血毒素:外毒素,分α、β、γ、δ四种,能损伤血小板,破坏溶酶体,引起肌体局部缺血和坏死;b.杀白细胞素:可破坏人的白细胞和巨噬细胞;c.血浆凝固酶:当金黄色葡萄球菌侵入人体时,该酶使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固,阻碍吞噬细胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感染易局部化与此酶有关;d.脱氧核糖核酸酶:金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核酸酶能耐受高温,可用来作为依据鉴定金黄色葡萄球菌;e.肠毒素:金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠炎的蛋白质性肠毒素,分为A、B、C、D、E及F五种血清型。肠毒素可耐受100°C煮沸30分钟而不被破坏。它引起的食物中毒症状是呕吐和腹泻。此外,金黄色葡萄球菌还产生溶表皮素、明胶酶、蛋白酶、脂肪酶、肽酶等。