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那位测过植物组织中的磷脂含量,用什么方法?我查到有用三氯醋酸沉淀法的,但在期刊网和实验指导书中都没查到,请知道的告诉一下,谢谢!!!
[align=center][font='times new roman'][size=16px]磷脂分离分析[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]方法[/size][/font][/align] 2003年,Han等正式提出了脂质组学的概念,即对生物样品中脂质进行全面的系统分析,并以此为依据推测其他与脂质作用的生物分子的变化,进而阐明脂质在各种生命现象中的作用机制。脂质尤其是磷脂,是细胞膜的关键组分,磷脂代谢的改变对细胞膜结构有深远的影响,尤其是癌细胞需要更多的膜来实现快速增殖。因此,膜磷脂的含量、磷脂代谢物水平和磷脂谱的变化[font='times new roman'][sup][size=16px][99][/size][/sup][/font]通常被确定为癌症发展进程的标志,此外,磷脂代谢的改变也与糖尿病、人体衰老与肥胖有关。基于磷脂重要的生理与病理功能,需要快速、准确的分离分析手段实现对其的定性与定量分析,进而阐明其组分变化对机体的影响,为临床诊断和治疗提供重要依据。 磷脂分子是由亲水性头基和亲脂性/疏水性尾基组成,根据亲水性头基的取代基团的不同又可分为PC、PE、磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰肌醇(PI)和磷脂酰甘油(PG)等。目前,磷脂分离分析面临的主要挑战包括两方面,一方面是磷脂本身复杂和多样的结构信息,包括类别、脂肪酰基种类、脂肪酰基sn-位置和脂肪酰基中的C=C位置/几何形状(即顺式/反式)等,导致其识别与鉴定的难度很大。另一方面是分离分析工具与技术的限制。最初用于脂质组学的分析方法是基于质谱的鸟枪法,即直接将样品注入到质谱仪中,尽管该方法具有简便高效的优点,但是会导致样品中的杂质包括盐、极性代谢物和蛋白质等对脂质的电离造成影响,影响信号的稳定,最终会影响质谱的检测结果。此外,这些杂质也会污染质谱仪。近年来,高灵敏度和特异性的高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]-质谱(HP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url])法成功弥补了鸟枪法的缺陷。由于在质谱分析之前增加了色谱分离过程,一方面可以有效减少样品中杂质的影响,另一方面基于其分离能力,可以将磷脂按照类别与种类进行初步的分离,减少了后续质谱分析的基质效应和离子抑制效应,大大改善了磷脂的分离分析效果。 色谱固定相作为HPLC的核心组成,发挥着至关重要作用。开发新型色谱固定相是脂质组学的重要研究方向之一。例如,Liang等以半胱氨酸为衍生化试剂,合成了苯乙烯马来酸共聚物色谱固定相Sil-SMA-amino acid,填充Sil-SMA-amino acid色谱柱对于亲疏水性的小分子具有良好的分离性能,同时该色谱柱具有RPLC/HILIC/IEC的混合模式保留机制,成功实现了部分PC和PE标准品的种类分离,并成功应用于胃癌细胞脂质提取物的分离分析,表现出了一定的应用潜力。Liu等以三辛基膦和烯丙基溴为原料合成了膦基离子液体三辛基(烯丙基)溴化膦([P[font='times new roman'][sub][size=16px]888Allyl[/size][/sub][/font]]Br)。以[P[font='times new roman'][sub][size=16px]888Allyl[/size][/sub][/font]]Br为聚合单体,通过点击化学反应合成了聚膦离子液体功能化二氧化硅球(PIL@SiO[font='times new roman'][sub][size=16px]2[/size][/sub][/font])。PIL@SiO[font='times new roman'][sub][size=16px]2[/size][/sub][/font]填充色谱柱表现出RPLC/HILIC混合模式分离特点,可在较短的时间内实现核酸碱基与核苷类、磺胺类、酰胺类和苯胺类物质的快速分离,具有良好的分离选择性。其对于磷脂标准品的分离效果优于商业化的氨基柱,并可用于磷脂类别与种类的同时分离分析。此外,也实现了大豆卵磷脂的快速分离分析。
[align=left][font='times new roman'][size=18px]磷脂的结构与[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]功能[/size][/font][/align][font='times new roman'][size=16px]磷脂是一[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]种[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]脂类[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]物质[/size][/font][font='times new roman'][size=16px],是植物和动物细胞中生物膜[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]组织的基本成分。它们同时是具有亲水性和亲脂性的两亲[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]性分子[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。如图所示,[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]磷脂[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的分子结构[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]中[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]包含一个极性[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]“[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]头[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]”[/size][/font][font='times new roman'][size=16px],[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]同时[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]连接着两个[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]([/size][/font][font='times new roman'][size=16px]有时只有一个[/size][/font][font='times new roman'][size=16px])[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]不同长度和不同饱和度的非极性链。一般对于极[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]性[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]头,磷酸基[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]([/size][/font][font='times new roman'][size=16px]酸性[/size][/font][font='times new roman'][size=16px])[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]pKa≈0[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]~[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][font='times new roman'][size=16px],胺基[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]([/size][/font][font='times new roman'][size=16px]胆碱、乙醇胺和丝氨酸的基本官能团[/size][/font][font='times new roman'][size=16px])[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]pKa≈9[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]~[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]11[/size][/font][font='times new roman'][size=16px],羧基[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]([/size][/font][font='times new roman'][size=16px]如[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]R[/size][/font][font='times new roman'][sub][size=16px]1[/size][/sub][/font][font='times new roman'][size=16px]或[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]R[/size][/font][font='times new roman'][sub][size=16px]2[/size][/sub][/font][font='times new roman'][size=16px]=H[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的甘油磷脂[/size][/font][font='times new roman'][size=16px])[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]pKa≈3[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]~[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。从图[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]中[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]可以看出,磷脂有许多亚类,根据[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]骨架[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的不同可分为两个亚群,鞘磷脂和甘油磷脂[/size][/font][font='times new roman'][size=16px];[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]其他亚[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]类[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]可以根据脂肪链的数量进行分类[/size][/font][font='宋体'][size=16px],例如溶血卵磷脂是一类只含有一个非极性尾部的磷脂,[/size][/font][font='宋体'][size=16px]要么在[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]sn-1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]位置[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]([/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1-[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]溶血[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]卵[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]磷脂[/size][/font][font='times new roman'][size=16px])[/size][/font][font='times new roman'][size=16px],要么在[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]sn-2[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]位置[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]([/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2-[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]溶[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]血卵[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]磷脂[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]);[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]还可以根据[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]修饰[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]在磷酸基上的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]R[/size][/font][font='times new roman'][sub][size=16px]3[/size][/sub][/font][font='times new roman'][size=16px]基团来分类,最常见的磷脂是磷脂酰胆碱[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]([/size][/font][font='times new roman'][size=16px]PC[/size][/font][font='times new roman'][size=16px])[/size][/font][font='times new roman'][size=16px],占血浆磷脂总量的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]60[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]%[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]-70%[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。几种[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]常见磷脂及其亚类的分子结构[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]如图[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]所示。[/size][/font][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/08/202308012156432272_6764_5389809_3.png[/img][/align][align=center][font='times new roman']图[/font][font='times new roman']1 [/font][font='times new roman']磷脂分子的结构图[/font][/align][align=center][font='times new roman']Fig.1 Structural diagram of phospholipid molecules[/font][/align][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/08/202308012156435665_2656_5389809_3.png[/img][/align][align=center][font='times new roman']图[/font][font='times new roman']2[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']常见磷脂及其亚类的分子结构[/font][font='times new roman'][sup][size=13px][4][/size][/sup][/font][/align][align=center][font='times new roman']Fig[/font][font='times new roman'].2 Molecular structure of common phospholipids and their subclasses[/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=18px]2 [/size][/font][font='times new roman'][size=18px] [/size][/font][font='times new roman'][size=18px]磷脂[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]的[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]生理[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]功能[/size][/font][/align][font='times new roman'][size=16px]磷脂是生命[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]基础物质,细胞膜中脂质含量高达[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]50%[/size][/font][font='times new roman'][size=16px],其中大部分为磷脂。磷脂[/size][/font][font='times new roman'][size=16px],如[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]卵磷脂、脑磷脂和肌醇磷脂等,分别对人体的不同器官起着[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]不同[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的生理作用。磷脂的三种主要生理功能分别是乳化作用、增殖作用和活化细胞作用。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]磷脂的乳化作用主要体现在对心脑血管疾病的防治上,例如[/size][/font][font='times new roman'][size=16px],[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]糖尿病和肥胖代谢综合征[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]研究表明[/size][/font][font='times new roman'][size=16px],[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]磷脂可以分解体内过高的血脂和胆固醇,使血管通畅,有[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]“[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]血管清道夫[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]”[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]之称。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]磷脂具有活化细胞的作用[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]——[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]线粒体存在于大多数细胞中,是由两层磷脂双分子膜包被的细胞器,它是哺乳动物细胞的动力源[/size][/font][font='times new roman'][size=16px],[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]在细胞代谢、细胞凋亡、类固醇合成、信号转导等生理活动中发挥着关键作用[/size][/font][font='times new roman'][size=16px],磷脂作为线粒体膜的主要成分,肩负着重要使命。[/size][/font][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/08/202308012156436790_9940_5389809_3.png[/img][/align][align=center][font='times new roman']图[/font][font='times new roman']3 [/font][font='times new roman']哺乳动物细胞线粒体(大鼠肝脏)膜的磷脂[/font][font='times new roman'][sup][size=13px][25][/size][/sup][/font][/align][align=center][font='times new roman']Fig[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']3[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']Phospholipids of the mitochondrial membranes in mammalian cells (rat liver)[/font][/align][font='times new roman'][size=16px]合理利用磷脂可以[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]防治疾病[/size][/font][font='times new roman'][size=16px],而体内磷脂代谢失衡也会[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]导[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]致[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]疾病的发生[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。值得注意的是,有研究表明,人体内磷脂[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]代谢[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]与[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]多种[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]癌症密切相关。除此之外,磷脂[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]复合物[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]还被用于药物递送,包括经皮药物递送、细胞内药物递送、透皮贴片给药、眼部给药和中枢神经系统靶向给药[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]等[/size][/font][font='times new roman'][size=16px],图[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]4[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]为鼻给药[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]之[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]后,脂质纳米颗粒复合药物对中枢神经系统进行靶向治疗的可能途径。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]由于磷脂在生化和临床方面的重要性,需要快速和可靠的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]分离[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]分析方法来识别和定量生物样本中的磷脂。[/size][/font][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/08/202308012156437338_2831_5389809_3.png[/img][/align][align=center][font='times new roman']图[/font][font='times new roman']4 [/font][font='times new roman']鼻给药后药物转运的可能途径示意图[/font][font='times new roman'][sup][size=13px][34][/size][/sup][/font][/align][align=center][font='times new roman']Fig.4 Possible routes of drug transport after nasal administration[/font][/align]