皮细胞多胺含量

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皮细胞多胺含量相关的耗材

  • 托吡卡胺滴眼液中托吡卡胺含量的测定,色谱柱COSMOSIL C8-MS
    托吡卡胺滴眼液中托吡卡胺含量的测定,色谱柱COSMOSIL C8-MS 关键词:托吡卡胺滴眼液,托吡卡胺,2010年药典,辛烷基键合硅胶,北京绿百草 2010年中国药典标准:托吡卡胺测定色谱条件:照高效液相色谱法(附录Ⅴ D)测定,用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇辛烷磺酸钠溶液为流动相;检测波长为254nm。理论板数按托吡卡胺峰计算不低于3000,托吡卡胺与羟苯甲酯、羟苯乙酯的分离度应符合要求。(中国药典二部P264) 需要详细的药典标准请联系北京绿百草:010-51659766. 登录网站获得更多产品信息: www.greenherbs.com.cn
  • 异福酰胺胶囊中利福平、异烟腁和吡嗪酰胺的含量测定,推荐色谱柱:Cosmosil CN柱 各种规格
    异福酰胺胶囊中利福平、异烟腁和吡嗪酰胺的含量测定,推荐色谱柱:Cosmosil CN柱 关键词:异福酰胺胶囊,利福平,异烟腁,吡嗪酰胺,2010年药典 2010年中国药典标准:照高效液相色谱法(附录Ⅴ D)测定,用氰基键合硅胶为填充剂;以0.01mol/L庚烷磺酸钠为流动相;检测波长为254nm。理论板数按吡嗪酰胺峰计算不低于1500,各色谱峰的分离度应符合要求。(中国药典二部P300) 需要详细的药典标准请联系北京绿百草:010-51659766. 登录网站获得更多产品信息: www.greenherbs.com.cn
  • 异福酰胺片中利福平、异烟腁和吡嗪酰胺的含量测定,推荐色谱柱:Cosmosil CN柱
    异福酰胺片中利福平、异烟腁和吡嗪酰胺的含量测定,推荐色谱柱:Cosmosil CN柱 关键词:异福酰胺片,利福平,异烟腁,吡嗪酰胺,2010年药典 2010年中国药典标准:照高效液相色谱法(附录Ⅴ D)测定,用氰基键合硅胶为填充剂;以庚烷磺酸钠溶液-乙腈为流动相;检测波长为254nm。理论板数按吡嗪酰胺峰计算不低于1500,各色谱峰的分离度应符合要求。(中国药典二部P299) 需要详细的药典标准请联系北京绿百草:010-51659766. 登录网站获得更多产品信息: www.greenherbs.com.cN

皮细胞多胺含量相关的仪器

  • 聚丙烯酰胺固含量检测仪能够快速检测聚丙烯酰胺固含量,深芬仪器生产的聚丙烯酰胺固含量检测仪操作简单、测量快速、智能化操作、固含量值数据时时显示;一般3-5分钟即可完成测试。CSY系列聚丙烯酰胺固含量检测仪获得国家知识产权保护(发明专利号:201420090168.1外观专利号: ZL201430075376.X)是一种新型的快速聚丙烯酰胺固含量检测仪器;深芬仪器始终立志于为用户提供多用途,多性能的高质量的胶粘剂固含量检测仪器。传统的聚丙烯酰胺固含量测定方法采用GB/T12005.2-1989 聚丙烯酰胺固含量测定方法,测试设备采用烘箱和天平,测试步骤繁琐、测试时间长,在固含量检测领域,测量准确性和测量速度之间的矛盾一直没有解决;针对这一现状深圳市芬析仪器制造有限公司提供一种有烘干法结构的快速测定聚丙烯酰胺固含量值的仪器。聚丙烯酰胺固含量检测仪采用德国HBM称重系统,保证称重准确;环形石英钨卤红外线加热源,快速干燥样品,与国际烘箱加热法相比,环形石英钨卤红外线加热可以在高温下将样品均匀地快速干燥,样品表面不易受损,其检测结果与国标烘箱法具有良好的一致性,具有可替代性,且检测效率远远高于烘箱法,智能化操作,一般样品只需几分钟即可完成测定,是一种新型的快速白乳胶固含量检测仪器。聚丙烯酰胺固含量检测仪产品优点:(1) 体积小,重量轻,结构简单(2) 无需辅助设备(3) 操作简单,无需安装调试培训(4) 效率高、速度快,整体操作不超过10分钟(5) 多种分析方式,全自动、定时、半自动满足各种分析方式(6) 标配RS232通讯接口-方便连接打印机、电脑和其他外围设备、符合FDA/HACCP格式要求(7) 钨卤环形灯加热方式可直接从物质内部加热,大大缩短了烘干时间,而且还具有加热均匀、清洁、效率高、节约能源。CSY系列聚丙烯酰胺固含量检测仪技术参数:产品型号:CSY-G1CSY-G2CSY-G3CSY-G5固含量测定范围0.01-100%0.01-100%0.01-100%0.001-100%固含量含量可读性0.01%0.01%0.01%0.001%称重范围0-100g0-100g0-100g0-60g传感器精度0.01g0.005g0.001g0.001g称重传感器德国HBM传感器德国HBM传感器德国HBM传感器电磁力平衡传感器加热温度范围起始-205℃起始-205℃起始-205℃起始-205℃加热源钨卤红外线环形灯钨卤红外线环形灯钨卤红外线环形灯钨卤红外线环形灯显示参数%含固量、时间、温度、重量%含固量、时间、温度、重量%含固量、时间、温度、重量%含固量、时间、温度、重量分析方法全自动、定时、手动全自动、定时、手动全自动、定时、手动全自动、定时、手动核心科技:自主品牌 深芬仪器、中国制造、专利产品、 技术保障运输保证:优质EPE珍珠棉缓冲材料、牛皮瓦楞纸、免熏蒸木箱满足出口及国内运输要求。售后保证:仪器免费保修一年,终身维护 值得信赖!产品通过ISO:9001质量管理体系产品通过ISO:14001环境管理体系产品荣获国家自主知识产权专利证书产品荣获国家自主知识产权计算机软件著作权 聚丙烯酰胺固含量检测仪 聚丙烯酰胺固含量快速检测仪
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  • 可检测项目:参数包括葡萄糖、乳酸、谷氨酸、谷氨酰胺、铵根、钠、钾、钙离子等细胞谷氨酰胺分析仪(用于非临床)无论您工作在生物制药还是生物技术相关行业,生物工艺向来被认为是一门艺术,您面临时刻要评估艺术调控的安全性和可靠性的问题。由于在线、快速、准确的检测方法的缺失导致发酵、表达一直停留在经验层面,个人对产品的质量和产量至关重要。西尔曼科技作为一家拥有十五年临床诊断仪器研发、生产、应用经验的富有创造力的高科技公司,积累了大量的原始经验数据。酶电极法由于其快速、准确、稳定的特点被作为医疗诊断的金标准,西尔曼科技根据生物制药、生物技术、食品等相关行业的需求,推出新一代基于酶电极技术的,针对工业技术、科研领域的细胞谷氨酰胺分析仪! 细胞谷氨酰胺分析仪一、 产品特点1. 更快的检测速度,所有结果60秒,单一模块参数只需20秒;2. 自主研发固定化酶膜技术,更长寿命,更低成本3. 专利流路技术,拒绝堵塞4. 自动进样,自动定标,减少人为误差5. 全量程高准确度(≤2%)和精密度(≤2%)6. 性能优于酶比色技术7. 相对误差(CV)小于2%8. 一次性处理样品可达15个9. 自动预稀释功能10. 日常自动维护功能11. 多功能菜单,人机交互式操作12. 一机多用,可用于哺乳动物细胞、细菌、真菌、酵母、藻类等培养过程。支持模块拓展,同时可测10个指标13. 全自动化检测,真正实现无人值守分析14. 耗材试剂运输可长距离运输15. 满足IQ/OQ认证要求16. 低样本量,单一模块样本量只需135微升细胞谷氨酰胺分析仪二、 性能参数1. 仪器形式:台式2. 认证:CE3. 检测项目:项目名称范围(无预稀释)范围(有预稀释模块)葡萄糖0.05-6 g/L0.05-60g/L乳酸0.05-50 g/L0.05-500g/L谷氨酸15-1460 mg/L15-14600mg/L谷氨酰胺15-1460 mg/L15-14600mg/L甘油 0.05-2g/L 0.05-20g/L甲醇 0.1-1 g/L 0.1-10 g/L乙醇(酒精度)0.04-2 g/L0.04-20g/L赖氨酸0-1.5 g/L0-15 g/L木糖0.05-2 g/L0.05-20 g/L半乳糖0.1-2 g/L0.1-20 g/L铵离子0.01g-0.6 g/L0.01g-6 g/L钠离子20.0-200.0mmol/L钾离子0.5-15.0mmol/L钙离子0.1-5.0mmol/L 4. 数据储存:支持,4000组5. 通讯接口:RJ45,USB,RS2326. 工作环境温度:15-35℃7. 电源:50-60 Hz, 100-240 VAC8. 精密度: CV 2%9. 测量单位:mmol/L, %, mg/L, g/L, mg/dL可选10. 质保期:一年细胞谷氨酰胺分析仪三、 应用范围1.监测生物反应器运行进程,分析生物发酵、细胞培养、表达中的重要参数(可选在线模块);2.确定细胞培养关键代谢产物的生成和消耗3.鉴定细胞培养、生物制药过程中生长限制性基质4.优化细胞培养、生物制药、微生物发酵补料策略5.校准生物反应器传感器6.平衡细胞培养、生物制药、微生物发酵培养基电解质7.减少样品浪费8.测定冰激凌中的葡萄糖和蔗糖9.测定包装绿豆中的葡萄糖含量10.测定冷冻绿豆中葡萄糖含量11.检测奶酪中乳酸含量12.测定玉米和豌豆中葡萄糖和蔗糖含量13.检测谷物制品中的葡萄糖和蔗糖14.测定烘焙食品中葡萄糖和蔗糖含量15.检测甜型炼乳中葡萄糖和蔗糖含量16.检测玉米糖浆和其他糖浆中葡萄糖含量17.土豆及其制品中的葡萄糖和蔗糖含量18.检测糖蜜中的葡萄糖和蔗糖含量19.测定糖浆中蔗糖含量20.测定膨化谷物中的熟化度21.快速检测生物质乙醇发酵中的葡萄糖含量22.监控玉米秸秆发酵过程中葡萄糖和木糖含量23.快速检测玉米酒糟蒸馏中乙醇残留24.各行业中液体溶液中的离子浓度快速检测25.满足PAT、DoE全自动标定,保证测试结果的准确性 微量样品最小只要10uL,样本随到随测 最低15uL标配15位自动进样盘 多达15个样本位的内嵌式样本盘可视化直观的操作界面,8寸彩色触屏人机互动 测样结果实时回顾、打印、传输
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  • 实时单细胞多模态分析仪功能概述 单细胞研究对于理解细胞的组成、生理行为与功能的多样性具有重要意义,基因组、转录组、蛋白组、代谢组学等分析技术为单细胞研究提供了有力工具。实时单细胞多模态分析仪可以实时、连续、定量检测单个活细胞的小分子含量及酶活性。 核心特点 主要性能 实时单细胞多指标检测:实时检测单个活细胞内小分子含量(如葡萄糖、乳酸、ATP、胆固醇、Ca2+、K+等)及酶活性 (葡萄糖苷酶、鞘磷脂酶、乳酸脱氢酶等),可匹配160余种商品化试剂盒;实时亚细胞原位检测:在亚细胞水平(胞质、胞核、胞膜)实时连续、原位检测;超微量提取、注射:单细胞水平提取细胞器(如溶酶体、线粒体)、胞质进行质谱或其它平台的联用分析;单细胞注射药物、代谢剂等,并进行药效评估;活体水平检测:活体水平实时检测生化指标(用药前后、中医药针灸刺激前后)的变化。 技术原理 电信号检测 通过电探头对细胞释放的电活性物质进行检测,如过氧化氢、一氧化氮、多巴胺、超氧阴离子等物质。 通过试剂盒的量化级联反应产生的过氧化氢等电活性物质,实现单细胞小分子含量或酶活性的检测。 荧光信号检测 光探头传输激发光激发预染色细胞,通过光学检测系统收集细胞发射的荧光信号,荧光信号强弱反映细胞预染色指标的含量,可实现细胞整体或亚细胞激发检测。 通过单细胞超微量提取注射,向单个活细胞注射荧光检测试剂盒,光探头传输激发光激发细胞的生化反应产物而产生荧光,荧光信号强弱反映细胞内相应的小分子含量或酶活。 经典应用 肿瘤细胞代谢 肿瘤细胞异质性研究,包括糖代谢、脂代谢、蛋白代谢相关的小分子和酶活分析;结合抑制实验,研究肿瘤细胞代谢过程中关键激活酶,为抗癌药物研发提供理论基础;通过抗癌新药直接刺激细胞或配合专用探头实现细胞内送药,评估其对单细胞内代谢参数指标的影响。 代表文献1) Zheng XT, Yang HB, Li CM. Optical detection of single cell lactate release for cancer metabolic analysis. Anal Chem. 2010 Jun 15 82(12):5082-7. (DOI: 10.1021/ac100074n)2) Pan R, Xu M, Jiang D, Burgess JD, Chen HY. Nanokit for single-cell electrochemical analyses. Proc Natl Acad Sci USA. 2016 Oct 11 113(41):11436-11440. (DOI: 10.1073/pnas.1609618113)3) Zheng XT, Li CM. Single living cell detection of telomerase over-expression for cancer detection by an optical fiber nanobiosensor. Biosens Bioelectron. 2010 Feb 15 25(6):1548-52.. (DOI:10.1016/j.bios.2009.11.008)4) Zheng XT, Hu W, Wang H, Yang H, Zhou W, Li CM. Bifunctional electro-optical nanoprobe to real-time detect local biochemical processes in single cells. Biosens Bioelectron. 2011 Jul 15 26(11):4484-90.(DOI:10.1016/j.bios.2011.05.007) 新药研究 新药研究离不开细胞学实验,实时单细胞多模态分析仪在药物研究中的常见应用:药物的极性和分子量会影响其透过细胞膜的效率,如果药物的细胞膜透性较低或未知,可以单细胞内定点注射药物并实时检测药效相关指标(Ca2+和ROS等),可以反映药物发挥作用的潜在位置;为了理解药物作用机制,需要预先判断可能的转运体、药物靶点、及涉及到的关键代谢酶,然后通过实时单细胞多模态分析仪进行验证,由于是实时的,可以添加相关抑制剂或增强剂直接进行判断验证;用于单细胞亚细胞水平的定向给药及实时原位检测药物作用效果,提供亚细胞水平药物-细胞相互作用研究的重要工具,实现单细胞层面药物保护性研究和抑制性研究,可为药物载体的单细胞层面载药能力研究和亚细胞层面的定位提供选择性平台。 代表文献 1)Xin T Z , Peng C , Chang M L . Anticancer Efficacy and Subcellular Site of Action Investigated by Real‐Time Monitoring of Cellular Responses to Localized Drug Delivery in Single Cells[J]. Small, 2012, 8(17):2670-2674. (DOI: 10.1002/smll.201102636)2)Yuning Han, Bin Hu, Mingyu Wang, Yang Yang, Li Zhang, Juan Zhou*, Jinghua Chen*. pH-Sensitive Tumor-Targeted Hyperbranched System Based on Glycogen Nanoparticles for Liver Cancer Therapy, Applied Materials Today, 2020, 18, 100521.(DOI: 10.1016/j.apmt.2019.100521) 神经领域应用 单细胞胞质的超微量抽提,和质谱平台联用完成递质成分的分析;纳米级探头实现单个神经细胞或脑组织的小分子电化学检测。 代表文献 1)Molecular profiling of single axons and dendrites in living neurons using electrosyringe-assisted electrospray mass spectrometry[J]. Analyst, 2019, 144 2) Development of Au Disk Nanoelectrode Down to 3 nm in Radius for Detection of Dopamine Release from a Single Cell[J]. Analytical Chemistry, 2015, 87(11):5531.3)Electrochemically Probing Dynamics of Ascorbate during Cytotoxic Edema in Living Rat Brain[J]. Journal of the American Chemical Society, 2020, 142(45):19012-19016. 活体研究 中医药领域,可对特定穴位血清素(5-羟色胺)、一氧化氮、乙酰胆碱、抗坏血酸等关键指标的实时监测,可配合组织解剖学实验,研究不同组织类型的指标差异,辅助针灸机理研究;活体动物模型在体检测,辅助肿瘤疾病药物研究。 代表文献 1)Li, YT., Tang, LN., Ning, Y. et al. In vivo Monitoring of Serotonin by Nanomaterial Functionalized Acupuncture Needle. Sci Rep 6, 28018 (2016). 2)Tang, L., Li, Y., Xie, H. et al. A sensitive acupuncture needle microsensor for real-time monitoring of nitric oxide in acupoints of rats. Sci Rep 7, 6446 (2017). 3)Tang, L., Du, D., Yang, F. et al. Preparation of Graphene-Modified Acupuncture Needle and Its Application in Detecting Neurotransmitters. Sci Rep 5, 11627 (2015).
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皮细胞多胺含量相关的试剂

皮细胞多胺含量相关的方案

  • 利用SC-ICP-MS法测定单个细菌细胞中的铁含量
    ICP-MS 法可以分析成批培养的细菌细胞中的总金属含量,然后根据测得的细胞总数平均算出单个细菌细胞的铁含量。由于平板计数法无法计算死亡细胞或未被培养的完整细胞,导致计数出现误差。然而,由于仪器的限制,目前还未见有方法可直接分析单个细菌细胞中的铁含量。基于单细胞ICP-MS (SC-ICP-MS) 分析技术取得的重大进展,使得直接测定单个细胞内金属含量成为现实。PerkinElmer 公司专利的Asperon™ 单细胞雾室将单个完整细胞引入ICP-MS的等离子体中,结合NexION® 系列ICP-MS 质谱仪瞬时采集速度快的优势,可确定单个细菌细胞内的铁含量。在本次实验中,我们利用SC-ICP-MS 法分别测定了三种菌株的单个细胞的铁含量。这三个菌株分别是大肠杆菌B 株(Eco)、枯草芽孢杆菌168 株(BAC) 和红球菌RHA1 株(RHA)。SC-ICP-MS 技术可直接测定单个细胞的铁含量,并确定每种菌株的铁含量分布情况。铁含量与细菌的细胞大小相关,即最大菌株(RHA)单个细胞的平均铁含量最高,而最小菌株(Eco) 单个细胞的平均铁含量最低。
  • 外分泌体含非编码RNA影响内皮细胞衰老和血管生成
    内皮细胞,内皮祖细胞,基质细胞的信号联系在血管形成的时候是至关重要的。其中,外分泌体就是其中一种通信方式。有研究发现,外分泌体在免疫应答,肿瘤存活,应激反应和血管生成上的细胞间通信有着非常重要的作用。在外分泌体中有mRNA和miRNA往往会对受体细胞产生影响。荷兰的研究人员对外分泌体内的microRNA miR-214的研究发现,含有miR-214的外分泌体能够抑制受体细胞的内皮细胞的衰老,并且促进血管生成的发生。与此同时,其还会抑制毛细血管失调症突变体 ataxia telangiectasia mutated (ATM)的表达。
  • 人血管内皮细胞生长因子(VEGF)检测试剂盒
    人血管内皮细胞生长因子(VEGF)检测试剂盒人血管内皮细胞生长因子(VEGF)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围: 规格:96T/48T使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人血管内皮细胞生长因子(VEGF)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人血管内皮细胞生长因子(VEGF)水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入人血管内皮细胞生长因子(VEGF)抗原、生物素化的人血管内皮细胞生长因子(VEGF)抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人血管内皮细胞生长因子(VEGF)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。

皮细胞多胺含量相关的论坛

  • 【转帖】薄层扫描法测定黄皮酰胺的含量

    摘要 目的:建立以薄层扫描法测定黄皮酰胺含量的方法。方法:固定相系以硅胶G过240目筛)加0.5%CMC-Na(1:2.5)所制备的薄层板,展开剂为氯仿-甲醇(85:15),检测波长为λ=259 nm;扫描方式为单波长反射法锯齿扫描,光源氘灯,线性参数Sx=3,振幅为l0,背景校正:结果:此法测得黄皮酰胺含量的平均回收率为97.78% ,RSD为0.36% ;其在5.3~53μg/mL范围内浓度与峰面积线性关系良好(r=0.99l9)。结论:用薄层扫描法测定黄皮酰胺的含量,准确度高,重现性好,适合于快速检验。 关键词:黄皮酰胺;薄层扫描法;含量测定 黄皮酰胺(elausenamide,clau)是芸香科黄皮属植物黄皮Clausena Lamium(Lour.)Skeels叶水浸膏分离得到的有效成分,经不对称合成和拆合得到左旋和右旋黄皮酰胺。其中左旋黄皮酰胺为活性成分,具有多方面的药理作用。早期药理实验表明其对四氯化碳引起的小鼠谷丙转氨酶的升高有明显的降低作用。药效学研究提示,左旋黄皮酰胺可促进突触体谷氨酸释放,增加大鼠皮层厚度和海马CA1区数及NMDA受体密度,提高小鼠脑皮层和海马的胆碱乙酰转移酶活性 并对抗樟柳碱引起的乙酰胆碱含量的降低;细胞外生理研究证明,左旋黄皮酰胺可增强大鼠海马齿状回颗粒细胞层有低频刺激所诱发的群峰电位和由强刺激诱发的。这些结果表明,左旋黄皮酰胺有促智作用,有望开发成为抗老年痴呆病的新药。笔者通过文献报道的方法及黄皮酰胺的结构特点,确定了实验条件,建立了薄闵璺?TLCS法)测定黄皮酰胺的含量,为控制黄皮酰胺的质量提供了实验依据。 1 仪器和材料 仪器:CS-9000型双波长薄层扫描仪(日本岛津);939薄层铺板器(重庆南岸贝尔德仪器技术厂);定量毛细管(美国Drummonp公司)。 材料:黄皮酰胺粗品、黄皮酰胺一次甲醇提取物、黄皮酰胺二次甲醇提取物及对照品均由中国医学科学院药理研究所提供。硅胶G(青岛海洋化工厂),所用试剂均为分析纯。

  • 【求助】火焰法法测定细胞钙含量

    偶欲通过[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收光谱[/color][/url]测定细胞钙含量,门外汉,遍寻不到相关的样品前处理方法,望大虾赐教!细胞钙以磷酸钙形式存在。需要灰化么——看资料说灰化是为了分解有机物,可是细胞样实在想象不出来如何进行灰化?酸化的时候,用多大浓度的酸比较合适,酸化时间如何掌握,低浓度的酸需要驱酸么?用什么容器盛装比较合适阿?普通的聚乙烯管子可以么?试验选用什么级别的水?试验室只有三蒸水,玻璃烧出来的。

皮细胞多胺含量相关的资料

皮细胞多胺含量相关的资讯

  • 单细胞ICP-MS应用:测定单个细菌细胞的铁含量
    细菌是一种单细胞生物体,个体非常小,目前已知最小的细菌只有0.2微米长,因此大多只能在显微镜下被看到。细菌广泛分布于土壤和水中,或者与其他生物共生。人体身上也带有相当多的细菌。据估计,人体内及表皮上的细菌细胞总数约是人体细胞总数的十倍。铁是细菌细胞内部进行各种生物过程所必须的金属辅助因子。通常,铁作为一种可抑制细菌生长的营养元素,细胞中的总铁含量限额取决于细胞的生长状态和代谢需要。细菌的生长和繁殖必须有铁的供给才能得以进行。但细胞内多余的可溶性铁是有毒的。在确定细胞生长条件和应激反应的影响时,实时地测定细菌细胞中的铁含量可提供关于细菌中铁耐受限值的信息。监测单个细胞内的铁含量还可了解细胞中铁的分布情况,从而确定细胞群的同质性。在本次实验中,我们利用单细胞电感耦合等离子体质谱 SC-ICP-MS法分别测定了三种菌株的单个细胞的铁含量。这三个菌株分别是大肠杆菌B株(Eco)、枯草芽孢杆菌168株(BAC) 和红球菌RHA1株(RHA)。样品大肠杆菌B株(Eco),枯草芽孢杆菌168株(BAC) 和红球菌RHA1株(RHA),其菌株的细胞尺寸分别约为2μm、4μm和10μm±2。经过培养后,被等分成1mL样本,并储存在50%的甘油中于-20℃保存。SC-ICP-MS分析的细菌细胞样品实验将细菌细胞样品放入35℃水浴中解冻1min,然后将样品置于冰袋,使用1%磷酸盐缓冲液(PBS) 将样品稀释至含有100,000个细胞/mL的样品稀释液后立即上机SC-ICP-MS分析。NexION 2000 ICP-MS及实验条件通过采用纯氨气通入反应池的模式(反应模式),消除ArO+对56Fe+的干扰。实验结果细胞浓度为50,000个细胞/mL时,大肠杆菌B株、枯草芽孢杆菌168株和红球菌RHA1株的56Fe的信号扫描图。横坐标单位为ag,表明了单个细胞中铁含量的分布情况。其中大肠杆菌B株的单个细胞平均铁含量最低,而红球菌RHA1株的单个细胞平均铁含量最高。为测试细胞重叠现象,将细菌细胞经系列稀释后进行测定。上图表明,将细菌细胞稀释至100,000、75,000和50,000个细胞/mL浓度时,单个细胞的铁平均含量并没有发生变化,反而每次稀释后,细胞数量呈线性变化,结果表明,细胞浓度对细胞重叠无显著影响。结论单细胞ICP-MS法可以准确定量单个细菌细胞中的铁含量,可以提供细菌培养物中的单个细胞内铁分布信息。所建立的分析方法可以为严格控制细菌细胞的总铁含量提供支持。单细胞ICP-MS法还可用于在不同应激条件下生长的细菌细胞中铁含量分布的测定。了解更多应用资料,扫描下方二维码,下载利用SC-ICP-MS法测定单个细菌细胞中的铁含量相关资料。
  • BLT小课堂|水母发光蛋白检测法在细胞钙离子含量测定中的应用
    Ca2+作为普遍的第二信使在细胞信号转导过程中起着非常重要的作用,是单个细胞生存和死亡的信号。它参与了神经传导、血液凝固、肌肉收缩、心脏收缩、大脑功能、酶功能以及内分泌腺的激素分泌等各种生理机能。而人们对Ca2+在信号转导中作用的认识,则很大程度上取决于Ca2+测定技术。目前常用的Ca2+检测方法主要有:Ca2+选择性微电极测定法、同位素示踪法、核磁共振法和水母发光蛋白检测法等。01Ca2+选择性微电极测定法:Ca2+选择性微电极一种电化学敏感器。利用内充液和组织或细胞之间产生电位差,理想情况下,该电位差是Ca2+对数的线性函数,遵循Nernst方程。优点:直接、敏感地测定组织或细胞内的Ca2+,不需使用指示剂,不影响结合钙和游离钙的平衡。缺点:反应速度慢而无法测定Ca2+的快速变化,而且穿刺损伤细胞可引起渗漏,且不适用于太小的细胞。02同位素示踪法:用放射性核素45Ca2+对Ca2+进行示踪,可测量出通过细胞膜转运到细胞内Ca2+增加的速度及浓度的大小,揭示Ca2+泵的作用,目前主要用于测定跨膜Ca2+的流动。优点:测量方法简单易行,比普通化学分析法的灵敏度高。确定放射性示踪剂在组织器官内的定量分布,可以达到细胞、亚细胞乃至分子水平。缺点:静态效果差,需要特定的同位素测定仪,并且要注意示踪剂的同位素效应和放射效应问题。03核磁共振法:是一种新的、非光学技术的Ca2+检测方法。由于正常生物体内氟含量很少,为了得到足够的响应,在检测时需要使用含氟指示剂。该指示剂经过化学修饰后进入细胞,进而被水解成游离状态,然后与Ca2+结合,根据获得的波谱图计算出Ca2+的浓度。优点:具有非破坏性和无损伤性,能够在接近生物样本生理状态下连续动态地进行检测,准确反应Ca2+浓度。缺点:需要核磁共振仪,成本较高。04荧光探针法:目前常用的Ca2+荧光探针有Fluo-3、Fluo-4、Fluo-8等。这类探针本身无法进入细胞,但它的亲脂性衍生物却可以透过细胞膜进入细胞。一旦进入细胞,这类亲脂性衍生物的亲脂性封闭基团在细胞非特异性酯酶的作用下被分裂除去,在细胞内便会形成一种带负电荷的荧光染料。与胞内Ca2+结合时,其荧光强度显著增加。优点:指示剂易导入细胞,空间分辨率高,反应速度快,而且可同时检测多重离子。缺点:需要有荧光显微镜或激光共聚焦显微镜,成本较高。05水母发光蛋白检测法:最近十几年来,水母发光蛋白(Aequorin)很受人们的关注。水母发光蛋白由189个氨基酸组成,具有3个Ca2+结合的EFhand结构,所以水母发光蛋白可作为检测Ca2+的新型探针。优点:Ca2+/水母蛋白复合物能检测~0.1μm到>100μm范围内的钙离子浓度,且复合物不会从细胞内泄露出来,可检测几小时至数十天内Ca2+浓度的变化。比荧光探针法的背景低,样本本身不会发生自荧光。腔肠素的性质腔肠素(Coelenterazine)作为海洋动物体内贮存光能的分子,它广泛存在于海洋生物体内,比如海肾、海蜇、水螅等。腔肠素是天然荧光素中最普遍的,它可作为很多荧光素酶的底物。目前研究得最透彻的以腔肠素为底物的荧光素酶来源于海肾(Renilla),即海肾荧光素酶(Renilla reniformis,简称Rluc)。腔肠素的工作原理腔肠荧光素是一个分子量约400 Da 的疏水基团,它可以自由穿越细胞膜。在一个以荧光素/荧光素酶为基础的系统中,腔肠素作为以水母发光蛋白为代表的海洋发光蛋白的辅助因子,与水母发光蛋白进行稳定的结合,引起脱辅基水母发光蛋白和腔肠荧光素之间的共价键破裂,腔肠荧光素(Coelenterazine)被氧化脱羧,形成腔肠酰胺(Coelenteramide),释放出CO2,同时发出波长为469nm的蓝色生物荧光,该荧光可用博鹭腾高灵敏度管式/板式发光检测仪进行测定。图1.腔肠素/水母发光蛋白检测Ca2+机制水母发光蛋白一旦和Ca2+反应即丧失发光功能,因此当一部分水母发光蛋白与Ca2+反应时,被消耗水母发光蛋白的发光强度能反映出Ca2+浓度变化,而且被消耗的水母发光蛋白的发光强度与Ca2+浓度之间存在线形关系。如同萤火虫荧光素酶,海肾荧光素酶的活性也不需要翻译后修饰,一旦翻译完成即可行使遗传报告基因的功能。但是与萤火虫荧光素酶又有差异,即腔肠素/荧光素酶系统不需要三磷酸腺苷(ATP),因此更利于生物荧光的研究。技术小结由于Ca2+在生命活动的各种生理生化反应、疾病的发生和发展中都扮演着极其重要的角色,而游离的Ca2+浓度变化又与细胞的功能、信号转导乃至细胞的凋亡有密不可分的联系,因此,研究如何检测细胞内游离Ca2+浓度显得尤为重要。Ca2+选择性微电极测定法不需要使用指示剂,但是穿刺过程会损伤细胞,进而引起渗漏。同位素示踪法简单,但是静态效果差,还需要注意同位素效应和放射效应问题。核磁共振法和荧光探针法都需要特定的仪器,成本较高。水母发光蛋白检测法不需要激发光源,因而消除了细胞自发荧光的干扰,背景荧光远低于使用钙离子指示剂的荧光。另外腔肠素具有疏水性,易于通过细胞膜,适于全细胞的研究。 腔肠素/水母发光蛋白的生物荧光反应对Ca2+浓度的变化非常敏感,但是这种发光相对较弱,因此需要使用高灵敏度的发光检测仪进行检测。
  • 活体单细胞淀粉含量检测法问世 无需细胞纯化
    高等植物和微藻能够利用光能将水和二氧化碳转化成淀粉等高能化合物,从而生产粮食和生物燃料。因此,高产淀粉细胞工厂的选育具有重要意义。目前,定量测定细胞中淀粉含量的方法通常包括破坏性的细胞处理过程、酶(或酸)介导的水解、水解产物的定量等多个环节,不仅需要大量细胞,且操作步骤繁琐、耗时耗力、成本较高,极大地限制了淀粉含量的高通量筛选。此外,传统方法通常无法检测自然界中大量存在的难培养微生物中的淀粉含量。   近日,中国科学院青岛生物能源与过程研究所单细胞研究中心助理研究员籍月彤、硕士研究生何曰辉等利用该中心研制的活体单细胞拉曼分选仪原型机(Raman-activated Cell Sorter,RACS),通过单细胞拉曼光谱的快速采集和分析,发明了一种快速、非侵入性、不须标记、以单个活体细胞为单位的淀粉定量检测方法,为富含淀粉的种质资源选育提供了一种崭新手段。该工作发表在新一期的Biotechnology Journal上。 利用单细胞拉曼光谱技术在单个细胞精度定量监测微藻产淀粉过程   研究人员以478 cm-1拉曼峰强度作为细胞淀粉含量的定量标记对莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)以及工业常用藻株小球藻(Chlorella pyrenoidosa)进行了淀粉含量检测,证明该方法与传统试剂盒法测定结果相关系数(R2)达0.99。该方法无需破壁等繁琐预处理,信号测量时间仅需两秒,基本无耗材消耗,仅需个别细胞或纳升级样品。同时,该方法不需经过细胞纯化与培养环节,能将微藻种质淀粉含量筛选时间从几天缩短至几分钟。此外,该方法还能对难培养微生物资源进行检测并基于淀粉含量进行单细胞分选,从而极大地拓展了应用空间。   上述研究得到了科技部合成生物学&ldquo 863&rdquo 项目和中科院&ldquo 能源微藻生物炼制&rdquo 创新团队国际合作伙伴计划等支持,由徐健研究员和黄巍研究员共同主持完成,华东理工大学李元广教授团队也参与了该研究。
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