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[b][font='Times New Roman'][font=宋体]解答:[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]([/font]1[font=宋体])[/font][/font][font='Times New Roman'][font=宋体]采用亲水性固定相,疏水性流动相的为正相色谱,即体系中流动相极性小于固定相极性;采用疏水性固定相,亲水性流动相的为反相色谱,即体系中流动相极性大于固定相极性[/font][/font][font=宋体]。[/font][font=宋体]([/font][font='Times New Roman']2[/font][font=宋体])[/font][font='Times New Roman'][font=宋体]在正相色谱中,极性较[/font][/font][font=宋体]弱[/font][font='Times New Roman'][font=宋体]的组分[/font][/font][font=宋体]最先被冲出色谱柱[/font][font='Times New Roman'][font=宋体]。流动相极性增强,溶质[/font][/font][font=宋体]保留[/font][font='Times New Roman'][font=宋体]时间减少;在反相色谱中,极性较强的组分[/font][/font][font=宋体]最先被冲出色谱柱。[/font][font='Times New Roman'][font=宋体]流动相极性增强,溶质[/font][/font][font=宋体]保留[/font][font='Times New Roman'][font=宋体]时间增加。[/font][/font][font='Times New Roman'][font=宋体][img=,256,256]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/03/202103172119248544_3280_3389662_3.png!w256x256.jpg[/img][/font][/font]
1、 粒径一般认为,基质的颗粒形状和大小,主要影响流体动力学行为,影响分离效率。填料的粒径决定了填充液相色谱柱的柱效。从VanDeemter方程可知,在优化的流动相线速度下,最佳理论塔板高度为: H min=2.48 dp根据这一公式,可以计算出不同力度填料填装的柱子可获得的最大理论塔板数。例如,3um粒子可获得13.4万理论塔板/米,5um粒子可获得8万理论塔板/米。但是,小粒子填料容易造成柱压高、易堵塞、寿命较短。为保证一定的流动相线速度就得提高输液压力,虽然,大多数高效液相色谱仪的压力上限可允许达到42Mpa,但因长时间工作在高压状态下肯定会缩短输液泵及进样阀的使用寿命。为此,小粒径的柱子一般较短。2、 填料形状现在,10um以下的分析型柱多使用球形填料,而制备型的柱子则多选用无定形填料,因为无定形填料较为便宜且大粒度填料的粒间孔较大,所填装的柱子并不需太高的压力便能很好的运行。3、 孔径及孔径分布填料粒子的孔径及孔径分布,主要从三个方面影响反相色谱的色谱行为。首先,是孔径影响了粒子必表面积的大小,从而对配基的数量,即碳含量造成影响,它涉及到样品的负载量。其次,孔径的大小,从空间上必然对溶质的分子量大小有所限制。此外,孔的不均一性,及孔径分布,也会带来尺寸排阻效应。4、 比表面积 填料的多孔性,极大地增加其比表面积。对于无孔的小球,其比表面积是很小的。但是一旦具多孔性,则多孔微球的比表面积为球 外比表面积与孔内表面积之和。比表面积不同,其键合配基的量亦有所不同。所以,即使是以相同的反应条件制备的同样配基的反 相填料,也会有不同的保留行为。特定溶质的保留值随比表面积的增大而减少。 5、 基质硅胶的纯度硅胶基质上残存的硅羟基和杂质金属离子,共同造成了以硅胶为基质的反相填料的“次级保留行为”。较多的杂质金属离子,会使具有螯合作用的样品被吸附在柱子上。在生物医药体系的分离、分析中,经常会遇到强极性的溶质,他们在制造不良的反相色谱柱中,经常会因强烈的非特异性吸附而难以获得良好分离。究其原因,除孔径大小的因素外,最大的可能是硅胶表面的覆盖率低和基质含金属离子太多所致。
使用的柱子是Extend-C18,Agilent 5um,4.6*150mm. 流动相:A 含0.1%氨水的水,B含0.1%氨水的乙腈。梯度0-30min,2-90%B使用的仪器是thermo液相,正常使用酸性体系,换碱性柱前先冲体系至碱性后使用。原先化合物保留时间在16min,使用一段时间后保留时间变为14min,后面突然变成5 min,再使用时变为2.5min。请问一下,造成这种保留行为丧失的原因是什么?我应该怎么做才能让柱子恢复保留行为?谢谢~~