利尿剂

各相关单位： 根据《中华人民共和国食品安全法》和《中华人民共和国农产品质量安全法》有关要求，我办组织起草了《动物性食品中10种利尿药残留量的测定液相色谱-串联质谱法》食品安全国家标准。现公开征求意见，如有修改意见，请于2021年12月23日前反馈至全国兽药残留与耐药性控制专家委员会办公室。 联系人：张玉洁联系电话：010-62103930E-mail：syclyny@163.com地址：北京中关村南大街8号科技楼206邮编：100081附件：1. 动物性食品中10种利尿药残留量的测定液相色谱-串联质谱法（征求意见稿）2.兽药残留国家标准征求意见表 全国兽药残留与耐药性控制专家委员会办公室2021年11月23日

在奥运会这样大大小小的体育盛事中，兴奋剂检测始终是备受关注的焦点。截止到目前，巴黎奥运会出现的三例兴奋剂检测阳性事件，分别是对美雄酮和宝丹酮（属促蛋白合成类固醇）、呋塞米（属利尿剂和掩蔽剂）、类固醇司坦唑醇检测呈现阳性。本届巴黎奥运会兴奋剂检测由世界反兴奋剂机构（WADA）负责组织和监督检测工作，负责检测的实验室均需获得世界反兴奋剂机构的认可。反兴奋剂本身其实是一项专业性极强、有着复杂体系的工作。那么兴奋剂检测包括什么？兴奋剂违规的行为有哪些？反兴奋剂工作人员是如何完成整个流程的？其兴奋剂检测技术手段又有哪些？兴奋剂检测（Doping Control）的范围广泛，包括赛前、赛后及日常检测，以确保运动员未使用任何违禁物质或违禁方法。食源性兴奋剂检测是奥运赛事中最关注的部分，其主要指来自于食品的兴奋剂，包括两大类，一类是天然存在的，即内源性兴奋剂；一类是人为添加而残留在食品中的，即外源性兴奋剂。禁用方法及禁用物质：按照联合国教科文组织《反对在体育运动中使用兴奋剂国际公约》和国务院《反兴奋剂条例》的有关规定，在2023年12月29日国家体育总局发布了2024年兴奋剂目录。（目录清单见链接：https://www.sport.gov.cn/kjs/n5084/c27260605/part/27262172.pdf）1. 禁用方法：篡改血液/血液成分：包括血液回输或增加红细胞；人为提高氧气摄入输送或释放的方法等；化学/物理方法：包括置换/变更样本；12小时内静脉输液和/或静脉注射剂量不得超过100mL等；基因/细胞兴奋剂：包括使用核酸或核酸类似物（基因编辑、基因沉默和基因转移技术）；使用常规或经基因修饰的细胞。2. 禁用物质：蛋白同化制剂品种、肽类激素品种、麻醉药品品种、刺激剂（含精神药品）品种、药品类易制毒化学品品种、医疗用毒性药品品种以及其他品种共391种兴奋剂。在公布的兴奋剂目录中还有其他多种特殊品类的补充说明，比如有常见的：合成类固醇等：具有促进蛋白质合成的作用，可以使肌肉增大和力量增强，同时严重干扰体内激素平衡；玉米赤霉醇类：可促进蛋白质合成，有助于运动员提高肌肉力量；β激动剂类：可减少脂肪囤积，增加肌肉含量，短期效应会使得心率变快、血压升高、发热。运动员可借助此类药物获得热量和抗代谢效应，提高肌肉练力量；刺激剂：刺激中枢神经；生长激素：促进红细胞生成；利尿、遮掩剂：稀释、降体重等。并且在目录最后，提到该目录中尚未涉及的、且未经任何政府健康管理部门批准用于人体治疗的药物（例如尚在临床前或正在临床试验阶段或已经终止临床试验的药物、策划药物、仅批准作兽药的物质），在所有情况下禁用。检测手段：自国际奥委会在1964年奥运会上首次试行兴奋剂检测以来，国际上一直采用的是尿检。直到1989年，国际滑雪联合会才在世界化学锦标赛上首次进行血检。血检只是作为尿检的一种辅助手段，用来检测一些尿检中难于检测的违禁物质和违禁方法，主要针对异体输血等。尿样通过A、B瓶检查获取，两只瓶子上只有一串6位数的编码用于识别运动员身份，整个检测过程中，无人得知瓶子主人的真正身份。兴奋剂检测中心保存b瓶，a瓶送到兴奋剂检测实验室检查，兴奋剂检测实验室收到尿样后应尽快完成检测分析，样品分析严格采用经国际奥委会医学委员会批准的技术方法。检测技术：兴奋剂的检测难度在于检测品种广、项目多、时效性强。尤其是对于食源性兴奋剂，其在食物中含量很低属于ppb级甚至ppt级，比药物中的兴奋剂更难甄别。要准确检测这些痕量物质，需要低检测限的高端精密分析设备和先进的检验方法。通常的食源性兴奋剂检测的常用方法有酶联免疫法、高效液相色谱（HPLC）法、LC-MS法、GC-MS法等。奥运赛事对食源性兴奋剂检测的要求更加严格，《大型赛事食源性兴奋剂防控工作指南》推荐使用LC-MS、LC-MS/MS法，测定不同食品基质中的低浓度药物和兴奋剂及代谢物的残留，主要是因其灵敏度、选择性和特异性较好，同时部分样品前处理及净化工作较为简便，多被应用于尿液、血浆、肝脏以及动物肌肉等样品中β2-受体激动剂的检测。（*以下列出的仪器厂商及检测仪器设备等为仪器信息网收录行业应用方案以及发布在仪器信息网资讯栏目的部分产品，不具全面性，如有遗漏，欢迎大家留言补充。联系邮箱:wugq@instrument.com.cn）方法兴奋剂类型检测技术/仪器仪器厂商色谱＋质谱外源性类固醇稳定同位素技术德国元素AnthrovisION曲马多 (tramadol) 及其代谢物 O-去甲基曲马多干血斑 (点) 技术+LC-MS/MS（DBS-MS 500 HCT系统）瑞士 CAMAG公司 蜕皮甾酮、各类禁用物质及方法类兴奋剂检测Agilent 7000D 三重四极杆气质联用系统安捷伦（Agilent)Agilent 6470 三重四极杆液质联用系统动物源性食品中克伦特罗等48种兴奋剂QSight220三重四极杆液质联用系统珀金埃尔默类固醇LC-FAIMS-MS/MS赛默飞尿检中微量代谢物DFS高分辨质谱检测分辨内源性和外源性激素DELTA同位素质谱仪各类禁用物质及方法类兴奋剂检测超高效液相色谱-四极杆串联质谱联用系统沃特世动物性食品中糖皮质类激素兴奋剂Oasis® HLB 固相提取技术和ACQUITY UPLC® 超高效液相色谱/TQD 串联四极杆质谱系统多种高极性兴奋剂（包括米屈肼和如辛弗林、去甲苯福林、依替福林、奥洛福林及奥克巴胺等肾上腺素能药物）二维液相三重四极杆质谱联用法岛津麻醉类：海洛因、吗啡、美沙酮等；刺激类：咖啡因、可卡因、麻黄碱GCMS-QP2020麻醉类：海洛因、吗啡、美沙酮、、氯胺酮等；刺激类：安非他明、肾上腺素等；类固醇：β-激动剂、睾丸激素等；利尿剂：甘露醇、Dexa-trim等；其他：β-阻断剂、局部麻醉药等LCMS-8045LCMS-8050LCMS-8060肽类激素：人类生长激素（HGH）、促红细胞生长素（EPO）等LCMS-IT-TOF其他促红细胞生成素(EPOs)蛋白印迹杂交（Western Blotting）美国Precision Biosystems公司的Blotcycler肽类兴奋剂检测多功能水平电泳仪Multiphor II北京德泉尿检自动比重、酸碱度计鲁道夫（RUDOLPH）血检自动血液分析仪希森美康（SYSMEX）\（辅助设备）干血点检测专用摇床（THERMOMIER F1.5）艾本德（EPPENDORF）真空干燥离心机总之，兴奋剂检测不仅是科技与体育的结合，更是维护体育公平与正义的最后一道防线。虽然兴奋剂的使用手段在不断翻新，但反兴奋剂工作依然面临着巨大的挑战。需要各方共同努力，加强反兴奋剂宣传教育，完善反兴奋剂法规制度，提升检测技术水平，才能有效遏制兴奋剂的使用，维护体育竞赛的公平公正，保障运动员的健康权益。

在3层楼高的中国反兴奋剂中心大楼中，二三两层楼实验室的检测仪器几乎都来自于同一家公司——安捷伦科技有限公司。　　乍一看，这个名字多少有些陌生。其实在1999年以前，它一直是美国惠普公司的一部分。当年惠普经历战略重组，将测试测量业务从原公司剥离，之后安捷伦应运而生。　　安捷伦的前身，就与中国反兴奋剂事业颇有渊源。1988年，为了服务于1990年北京亚运会，中国首个专门的反兴奋剂机构——国家体育总局运动医学研究所在挂牌成立之初，就从当时的惠普公司购置了首批检测仪器。　　今天，在即将进行创纪录的4500例兴奋剂检测的中国反兴奋剂中心(以下称中心)里，安捷伦提供了45台监测设备。据该公司生命科学与化学分析事业部大中华区总经理牟一萍估测，他们的仪器占到中心设备大型仪器设备总量的90%。　　揭秘反兴奋剂“雷达”　　牟一萍介绍说，本着“节俭办奥运”的原则，在筹备之初，中心领导设定了2008北京夏季奥运会和残奥会检测设备的三分制：即三分之一采用已有仪器设备；三分之一为最新采购仪器设备；另外三分之一采用社会征集方式。　　而最后的这三分之一在实施过程中遇到问题：从社会征集的机器型号各异，状态参差不齐，难以保证准确的检测结果。中心对这部分仪器来源进行修订，一部分改为增加购置新仪器，另一部分寻求厂商支持，提供备用仪器。　　中国反兴奋剂中心90%左右的检测设备都由安捷伦生产，数量达到45台，占据大楼2层和3层的空间。到今年4月份为止，安捷伦的设备全部顺利到位，是所有仪器供货商中最早完成验收的。　　著名运动员，尤其是在世界著名体育大赛获得过冠军的运动员，会接受更频繁的检测。　　在这45台检测仪器中，27台是气相色谱和气质联用仪，其余的则是液相色谱和液质联用仪。这些仪器中有一部分是在老实验室服役多年，在经过了奥组委的认证后，直接搬入新家；而另一部分则是为了满足奥运会的需求，新近购置的“新兵”。　　在检测中心的采购清单中，液相色谱和液质联用仪是最大的一个添加种类。这也显现了2008年奥运会与往届奥运会兴奋剂测试仪器需求的差异。　　从悉尼奥运会开始，对于气相色谱和气质联用仪的需求都维持在20台左右；而对于液相色谱和液质联用仪，在悉尼奥运会上才开始崭露头角，雅典奥运会也仅采用4台。　　这项技术具有更全面的检测功能，在整个检测程序中，色谱起到了分离和检测的作用；质谱检测器与之连用，对可疑物质进行确认。而对于肽类激素这种无法汽化的物质，就是用液相色谱或液质联用仪进行筛查。　　液-质联用技术将大量被应用于如糖皮质醇激素和合成类固醇类激素等兴奋剂检测中，它的优点是快速灵敏，可以进行高通量的样品筛查，快速发现阳性样品。　　预留后备仪器 迎接奥运大考　　分析速度快、灵敏度高、易操作性，以及可靠性都是兴奋剂检测仪器选择过程中十分重要的考量指标。　　牟一萍告诉记者，在给中国反兴奋剂中心提供的检测仪器中11台6410型液质(LC/MS/MS)联用仪是于2006年才推向市场的，是首次运用于奥运会。“我们的新产品一出，他们既有放心也有担忧。放心是基于长时期合作使然，但对于从没有接触过的设备，他们始终持有保留态度。”　　例如，客户会比较关心，检测仪器对于实验室环境的要求是否特别苛刻？因此，据牟一萍介绍，从2001年北京获得奥运会的主办权开始，安捷伦推出的每一款可用于兴奋剂检测的新产品，都与中心共同测试以满足奥运会分析的需要，确认仪器的效果之后，双方才会进入仪器购置商讨阶段。　　在这45台仪器中，还有一部分算是“板凳队员”。除了承担检测任务量的“现役”仪器，每一个类型也都有两三台备用仪器，主要是为了应对机器在体育赛事期间不可预测的故障，以及实验室电力等出现故障后对于机器的损害。　　除此之外，安捷伦还派遣了11名工作人员作为志愿者支持2008年奥运会，实行24小时轮流值班，全力保障45台设备正常运行.　　在1990年亚运会时，首次与中国反兴奋剂组织进行合作的安捷伦(当时的惠普)要求员工实行24小时轮流驻守。而在之后，即使是该实验室接受世界反兴奋剂机构的年度检查时，安捷伦都会提供类似的仪器保障方案　　在北京奥运会上，将有创纪录的4500例样品需要进行检测。样品量最多会达到每天300例。　　但是这并不意味着仅仅进行300次检测。国际反兴奋剂机构把目前的违禁药品名录分为6大类，即刺激剂药物、麻醉剂、合成代谢/类固醇、利尿剂、肽类激素和相关的化合物，以及其它的禁用药物。　　而每一个样品都有可能蕴含着任何一类违禁药品。而针对每一类违禁药品，需要使用的仪器设备不尽相同。　　例如，用气质联用仪和气相色谱仪没有检测出麻醉剂类药品，并不代表这个样品中没有含有利尿剂，因为这种物质的检测需要使用液相色谱仪和液质联用仪。　　因此，只有确保一个样品中未含有任何一类违禁药品，才可以下判断说，这个样品是“干净”的。