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本人遇到了很难的一个问题,不知有没有人做过这方面的,急求赐教。仪器为ICS-5000,柱子为CarboPac MA1,检测器脉冲安培检测。待测物质为某表达蛋白里的卡那霉素残余!目前标准曲线建立好了,但是样品处理遇到困难。蛋白不能进柱子,会对柱子造成不可逆转的损坏(柱效降低),为了除去蛋白使用了下列方法,但无效。方法一 3K的膜过滤以除去分子量为6oooo多的蛋白,但是Lowry法检测发现流穿里蛋白浓度仍有十几ug/ml,这个浓度仍不适合上样。方法二,水解蛋白为氨基酸后,分析柱前加氨基酸捕获柱。但发现卡那霉素在我们的水解条件下会降解。这样检测就没有意义了,还是舍弃。注:卡那霉素在0.5N HCl 100度 1h即水解,我们的条件比这还要激烈,否则不能完全水解蛋白为氨基酸。请大家讨论讨论,给些建议。谢谢。http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09511.gif
请大家讨论一下水产加工中庆大霉素、卡那霉素、链霉素的检测。是否必须检测?出口哪些国家需要检测?采用什么方法检测?是否有快速筛选方法?是否采用金标法检测?
(一)食品中氯霉素的限量1999年9月我国农业部发布了《动物性食品中兽药最高残留限量》,规定了氯霉素在所有食品动物的可食用组织中不得检出。2002年3月被我国农业部关于发布《食品动物禁用的兽药及其化合物清单》列为禁止使用的抗生素。欧盟、美国等国家规定动物源性食品中氯霉素的残留限量标准为“零容许量”,即不得检出。(二)测定氯霉素残留的方法①酶联免疫法。采用间接竞争ELISA筛选法,在酶标板微孔条上包被偶联抗原,样本中残留的氯霉素和微孑L条上包被的偶联抗原竞争抗氯霉素抗体,加入酶标二抗后,加入底物显色,样本吸光度值与其残留物氯霉素的含量成负相关,与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数,即可得出样品中氯霉素的含量。该方法测定低限为氯霉素0.05/g/kg。⑦GB/T 22338--2008动物源性食品中氯霉素类药物残留量测定——气相色谱一质谱法和液相色谱一质谱法测定水产品、畜禽产品和畜禽副产品中氯霉素、氟甲砜霉素和甲砜霉素残留量。气相色谱一质谱法是样品用乙酸乙酯提取,4%氯化钠溶液和正己烷溶液液分配净化,再经弗罗里硅土(Florisil)柱净化后,以甲苯为反应介质,用N,O-I双(三甲基硅烷)三氟乙酰胺一三甲基氯硅烷(BSTFA+TMCS,99+1)于70℃硅烷化,用气相色谱/负化学电离源质谱测定,内标工作曲线法定量。该方法测定低限为氯霉素0.1/μg/kg,氟甲砜霉素和甲砜霉素0.5μg/kg。液相色谱一质谱法是针对不同动物源性食品中氯霉素、氟甲砜霉素和甲砜霉素残留量,分别采用乙腈、乙酸乙酯一乙醚或乙酸乙酯提取,提取液用固相萃取柱进行净化,液相色谱一质谱/质谱仪进行测定,氯霉素采用内标法定量,氟甲砜霉素和甲砜霉素采用外标法定量。该方法对氯霉素的测定低限为0.1μg/kg;氟甲砜霉素和甲砜霉素为O.1/μg/kg。