不需分离

Postnova场流分离系统应用举例——蛋白质聚集体分离的理想解决方案 蛋白质聚集体已经成为药学发展和质检上一个重要的问题。其活性，生物利用度和可能的消极免疫响应等性能直接与不同程度的聚集态的存在有关。因此不仅FDA, 更多的官方和私人研究机构都对聚集态结构产生越来越大的兴趣。他们研究的目标是确定精确的聚集情况，即药物中的蛋白质中某个时间有多少聚集态结构形成以及如何避免这种情况。 场流分离技术是分离技术的一种，它可以与液相色谱（LC）相比。就像液相主要用来分离小分子一样，场流分离主要用来分离大分子或粒子（可称为：粒子色谱）。场流分离技术是一个独特的分离技术，所有场流分离技术都使用相同的基本分离的原则，但采用不同的分离场。根据不同分离场，场流分离技术可分为流动场流分离，沉淀场流分离，热场流分离等。 当样品注射到场流分离通道时，分离应力作用于聚合物或粒子强迫它们向通道底层移动，通道底层就被称为聚集壁。样品不能透过聚集壁，所以它们再次扩散到通道中心。扩散应力被分离应力抵消，在很短的时间（一般是30～120秒）内两种力之间就建立起一个稳定的动态平衡。大小不同的颗粒有着不同的扩散系数，所以它们在通道内由于速度梯度而被分离。注射后的粒子/聚合物由于“垂直场力”的存在，受迫向垂直于流动相流动的方向移动。小粒子由于具有较大的扩散系数将会比大粒子在通道内扩散的更深远。结果就是，小粒子在通道内被“层流”更快的定位，并因此而被洗脱出来；而大粒子则定位较慢，后洗脱出来。 上图是使用AF4非对称场流分离单克隆抗体的结果。在20分钟内，不同程度的聚集态被分开，整个分离过程由于没有固定相存在，因此蛋白质的空间结构不会被破坏。样品不需要前处理，更可以通过联用多种在线检测器（LS, UV, RI, SEM, DLS），方便迅速得到需要的数据。 场流分离技术具有以下优点： • 快速、温和的分离，可以兼容任何溶剂和缓冲液 • 超高的分辨率（±1nm） • 没有任何固定相的分离通道 • 宽分离范围：粒径1nm~100mm /分子量1000Da~1012Da • 无需前处理及过滤，直接进样复杂基质样品 • 可收集所需要的样品，方便升级至制备级 • 能够连接各种检测器，如在线串联紫外、光散射、荧光、质谱等检测器 • 可同时测定分子的分子量及粒子的粒径。 这些优点使场流分离技术在蛋白质及其聚集体分离方面可以发挥巨大的作用。 更多产品详情，敬请登陆：www.tegent.com.cn 德祥热线：4008 822 822 info@tegent.com.cn

分拣后再次粉碎并用水清洗，将沉在水里的料去掉。多使用较差的“二料”，有刺鼻的甲醛味，产品不合格，厂家也不敢印厂名和厂址　而根据“肥仔”介绍，遍布澄海大街小巷的“二料”作坊，加工出来的“二料”，基本上都是销给周边的玩具加工厂。 收来的塑料废品碎片要再次进行分拣。 分拣后再次粉碎并用水清洗，将沉在水里的料去掉。 清洗后摊在地上晾干。 　　医疗垃圾黑色链条调查 　　玩具生产 　　多使用较差的“二料”，有刺鼻的甲醛味，产品不合格，厂家也不敢印厂名和厂址 　　业内人士透露，不用出口检测的玩具，基本上都会使用“二料”，反之则用原生料 　　我国法律明令禁止医疗垃圾回流社会，必须按规定进行销毁。因为医疗垃圾中的病原微生物容易造成传染性疾病，所含致病细菌及病毒是普通生活垃圾的几十倍甚至上千倍。 　　而根据“肥仔”介绍，遍布澄海大街小巷的“二料”作坊，加工出来的“二料”，基本上都是销给周边的玩具加工厂。而那些掺合了医疗垃圾的“二料”，也随之流入到玩具加工厂。经过注塑机加工后，变成了一件件玩具配件，最终组装成三无玩具流入到儿童手中。记者对这些玩具加工作坊进行暗访时，发现其中也有使用掺合医疗垃圾的“二料”。 　　多家作坊销售掺医疗垃圾“二料” 　　除了“肥仔”的作坊外，还有没有其他作坊在制售掺杂医疗垃圾的“二料”? 　　5月14日，记者从231省道进入到莲下镇的工业区内了解，在上寨村路段的一家“二料”店，约30平方米的店铺里停放着一台破旧的塑料粉碎机，角落里堆放了十多包灰色的编织袋。店主是一名约30岁的青年男子，自称姓施。当记者表示要购买一批“二料”时，施先生从里屋拿出一把半透明的塑料颗粒，开价9600元一吨。 　　次日中午，记者再次来到施先生的“二料”批发店，见到该店多了几包白色编织袋。施先生解释说，他的货基本上都是通过仓库直接发给客商，所以店里不会存放太多的货。随后，他从白色编织袋中取出一小把“二料”给记者看。记者发现这些“二料”由白色非透明的塑料碎片组成，其中还掺杂了一些白色透明的塑料碎片。 　　“这些白色透明的料是不是输液瓶?”记者直接问施先生。他先是笑着说：“可能是输液瓶吧。”在接下来的闲聊中，他才承认，那些白色透明的料就是输液瓶，还有其他透明的塑料瓶碎片。 　　随后，记者转入到莲下镇永新工业区，一家作坊的女主人明确地告诉记者，掺合在大白桶碎片中的白色透明料，就是打碎后的针筒和输液瓶。“你不说谁知道这些就是输液瓶?现在废品站都不敢明目张胆收购针筒和输液瓶了，所以量比较少。我们都只掺合在其他料中一起卖。” 　　"二料"是否掺医疗垃圾难分辨 　　据“肥仔”透露，加工出来的“二料”，基本上都是销给周边的玩具加工厂。5月16日，记者在“肥仔”的“二料”作坊，就目睹了一次出货过程。 　　当天下午，当记者赶到的时候，见到“肥仔”正在忙着将一辆车牌为粤DU0402的货车倒进仓库内。过了十来分钟，一名搬运工骑着车冒雨赶到，脱了雨衣后在“肥仔”的指挥下，将堆放在仓库内的一包包“二料”往车厢内搬。 　　“这些料是要送去哪里?下这么大的雨还能送货出去?”记者见状随口问了一句。 　　“下大雨也没事，很近的。”据“肥仔”透露，往货车上装的货正是上次给记者看过的“二料”，即掺合了输液瓶碎片做成的绿色颗粒，价格9400元的那种，共78包。 　　就在装货时，门口有辆标有“工商执法”字样的小车经过，几分钟后又转回来再次经过。对此“肥仔”并不以为然，“现在出的货是再生料，谁还看得出来?” 　　记者找借口离开后，另一组记者在“肥仔”的作坊附近蹲守，发现标有“工商执法”的小车停到了“肥仔”的作坊门口，两名穿着制服的执法人员进去后，很快又出来并将小车开走。随后，“肥仔”开着上完货的粤DU0204货车从仓库内出来，径直开往工业区的深处。那片区域集中了好几家没有招牌的玩具加工作坊。 　　工厂只管加工不管原料成分 　　那么，这些来源不同、只经过简单处理加工成的“二料”是怎样做成玩具的呢?在澄海，生产塑料玩具的小工厂一家挨着一家，而且大都没有悬挂厂名。记者随后对这些玩具加工作坊进行调查。 　　5月18日上午，记者通过电话联系到下窖村的阿元，约定到他的加工作坊“谈生意”。一台注塑机和一台吹瓶机，再加上一间一百多平方米大的厂房，这就是阿元的全部家当。他没有生产自己的产品，主要是代别人生产玩具配件。记者采访时，他的两部机器都在生产玩具配件，使用的均是原生料。 　　但是记者在阿元的作坊角落里，发现有几包“二料”，其中有一包掺合了各种白色透明的塑料碎片，其中有一些是输液瓶碎片，有的碎片上面还可以看到类似针筒的刻度。阿元坦言，他只是帮客户加工，原料由客户提供，就算是客户送来掺有医疗垃圾的“二料”，他也没办法。 　　当日下午，记者来到位于莲下的李厝宫村工业区内一家带加工玩具配件的小作坊。老板阿生在带记者参观其生产车间时，顺便让记者看了客户放在他那里的“二料”，其中一种是阿生自认为质量不错的“二料”，里面也掺合输液瓶等白色透明的塑料碎片。 　　据阿生透露，因为原生料的价格浮动比较大，而“二料”则会出现质量不稳定的情况，所以他一直都是包工不包料，自然也无法控制客户使用哪种原料。 　　据在澄海经营塑料原生料生意的林先生透露，不需要出口检测的玩具产品，基本上都会使用“二料”，反之则要用原生料或档次较高的“二料”，以便能检测过关。而掺合了针筒和输液瓶等医疗垃圾做成的“二料”，算是档次较高的，而市场上卖的那些“三无”产品玩具，有的就用医疗垃圾来做的。 　　三无玩具多用比较差的“二料” 　　之前央视曾对澄海的玩具厂家使用含有医疗垃圾的“二料”生产玩具进行报道。报道中提到，在一些玩具生产厂里，用多次回收的“二料”生产玩具，都有股刺鼻的甲醛味道。而甲醛已经被世界卫生组织确定为致癌和致畸形物质，是公认的变态反应源。有研究表明，儿童对甲醛尤为敏感，能造成慢性中毒，甚至引发白血病。 　　玩具生产厂工人也说，“有味的这种料就是有甲醛。因为甲醛料结实，甲醛料做出来的产品结实耐用。”原来，多次回收使用的“二料”牢固度很差，在黏合过程中要使用到胶黏剂，而这就会释放出甲醛等有害物质。 　　用“二料”加工生产出来的玩具，照样可以进入玩具市场销售。记者看到，部分商家仍在销售一些没有国家质检部门颁发的3C安全认证标志，甚至很多产品连厂址、厂名都没有标注的三无产品。而我国对塑料玩具的生产、销售环节有着明确规定，“必须经过最基础安全3C认证，并标注认证标志后，方可出厂、销售”。 　　有商家向记者承认，三无产品玩具，很多都是使用比较差的“二料”。因为不合格，所以大家都不敢印厂名和厂址。而且这类伪劣产品基本都是找人代加工的，“确实也没有厂家和厂名可以印上去”。 　　这类玩具的质量无人敢保证，但是，最终却流入到孩子们的手里。

一、背景介绍新冠疫情蔓延全球，急需寻找有效药物。除了瑞德西韦，氯喹与羟氯喹同时被WHO和美国总统点名加入海外抗疫候选药物单用或组合应用的多国多中心临床试验（Solidarity Clinical Trial）。美国选用氯喹/羟氯喹作为新冠治疗候选药物的原因在于这是一种上市多年的老药，因此安全性有保障。如果选用一种全新的（未上市）的药物，其安全性是未知的，也需要花费更多的时间去验证。抛开羟氯喹是否能成为治疗新冠病毒的特效药，世界卫生组织已将羟氯喹（HCQ）确定为基本医疗保健系统的必需抗疟药，但API的高制造成本阻碍了HCQ的全球普及。因此，开发具有成本效益的合成工艺来增加该药物的普及显得至关重要。如今，采用先进技术，开发低成本广谱药物和小批量孤独药是FDA一直致力推动的目标。微反应连续流技术的兴起不光给低成本药物的合成带来可能，还可以快速应对市场的需求。2018年，弗吉尼亚联邦大学化学系和化学与生命科学工程系研究小组，在Beilstein J. Org. Chem. 期刊上发表了抗疟药羟氯喹的高效连续合成报告。小编就带大家来解读，连续流技术如何来助力这场没有硝烟的病毒战！ 二、羟氯喹的逆合成分析从羟氯喹的逆合成分析中可以发现化合物(6)是关键中间体。在传统工艺中化合物(6)通常有以下两种合成路径（图2）。反应路径1a中，使用氯酮（3）进行保护-去保护反应是优化工艺的一个关键点。虽然改进路径1b去掉了此步骤，但它使用了一个复杂的过渡金属-催化剂系统 。考虑到这些问题，研究小组通过逆合成分析，发现可以通过α-乙酰基丁内酯（8）的脱羧开环一步生成（10），然后化合物（10）可以不经分离制备化合物（6）。 三、连续流合成研究研究小组首先开发并优化了一条快速连续合成化合物10的方法（表1）。该路线的收率显著高于之前报道的合成路线 。使用55％的氢碘酸，反应温度80°C，转化率可达98%，分离收率为89％。?四、Zaiput在线连续分离由于使用了过量的氢碘酸，在进行下一步反应之前，必须将过量的氢碘酸从反应流中除去。将含有粗品（10）的产物与甲基叔丁基醚（MTBE）和饱和NaHCO3在线混合，然后使用Zaiput连续流分离器进行在线分离。在有机相中，可以得到纯化后的化合物（10）。连续分离简化了后处理步骤，大大节省了人力和时间。Zaiput高效液液分离技术是由美国MIT孵化的一项新技术。以专利技术液液分离膜为基础，提供不互溶流体连续在线分离。分离器利用多孔膜与水相和有机相间润湿性的差异来分离油水两相，该设备设计有压力系统可以自动调节两相间的压力恒定，确保分离的稳定性，流线型的设计也提供了即插即用的快捷功能。 五、中间体(6)(11)的合成化合物（10）与化合物(7)反应可生成化合物（6），化合物（6）无需分离与羟胺反应，通过K2CO3的填充床生成肟（11）。从生成（11）的两步反应中可以看出，反应物的浓度对肟的形成有显著影响。使用1 M浓度的反应物，结果显示温度100°C，停留时间 20 min，转化率为85%，分离收率为78％。六、连续搅拌釜反应器（CSTR）工艺作者选择了连续搅拌釜反应器（CSTR）工艺进行化合物（11）的加氢还原合成化合物（12）。用HPLC泵输送至CSTR中，并通入氢气使其反应。作者优化了化合物（12）的各个步骤后，将各个步骤合为一个连续的反应过程。该过程将化合物（10）转化为化合物（6），再继续转化为化合物（12）（图4）。最终产物化合物（12）的收率达到68％。七、羟氯喹的连续釜式合成为了整个工艺流程的连续化，作者选择使用CSTR 研究最后一步羟氯喹的合成。作者考察了溶剂和碱对HCQ（1）收率的影响。实验总结：• 连续合成工艺大大缩短了反应时间• 减少了步骤并提高了单个反应的收率• 使用了更具成本效益的起始原料和试剂• 连续合成与连续分离技术的完美结合，促使了整个过程的连续化• 具有成本效益的合成工艺来增加该药物在未来的普及新工艺与目前传统的商业工艺相比，总收率提高了52％。连续方法采用连续流反应器、在线连续分离及连续搅拌釜反应器的组合，过程更加安全可靠。参考文献：Beilstein J. Org. Chem. 2018, 14, 583–592. doi:10.3762/bjoc.14.45康宁在中国独家代理：Zaiput 高效液液分离器以专利技术液液分离膜为基础，提供不互溶流体连续在线分离。分离器有一个混合流体入口和两个出口，分别为有机相出口和水相出口，分离器使用过程中不需要任何准备或校准。分离器利用多孔膜与水相和有机相间润湿性的差异来分离油水两相，该设备设计有压力系统可以自动调节两相间的压力恒定，确保分离的稳定性，流线型的设计也提供了即插即用的快捷功能。产品特性:• 分离液体不依赖密度差，可分离乳液• 在连续流动过程中，分离器可实现连续在线分离• 非常低的死体积，优异的化学耐受性，可在压力下运行• 可实现实验室规模放大至工业化生产规模• 高效分离降低萃取溶剂消耗• 非常适合活性或不稳定中间体的分离