定量标准

导语古语云“阿胶一碗，芝麻一盏，白米红馅蜜饯。粉腮似羞，杏花春雨带笑看。润了青春，保了天年，有了本钱”。阿胶能补血滋阴、润燥止血，自古为滋补上品。阿胶系驴皮经煎煮浓缩成的固体胶。近年来，随着驴皮货源紧缺，市面上存在不法商贩弄虚作假，以次充好，以牛皮、马皮等下脚料冒充驴皮制作假冒伪劣阿胶的行径，严重扰乱了阿胶市场。其他兽畜皮熬胶，也有补血止血的功能，但阿胶伪品的蛋白质成分及其含量和阿胶真品存在明显不同，与驴皮胶使用效果相差甚远。因此，掌握阿胶的真伪鉴别方法至关重要。 为了进一步规范阿胶产业发展，提升阿胶品质保障能力，国家药典委在2019年发布关于“关于阿胶、海龙、海马等国家药品标准修订草案的公示”和“关于阿胶国家药品标准修订草案的公示（第二次）”两项公示稿，分别对阿胶【含量测定】和阿胶【鉴别】项下内容进行了修订。其中阿胶【含量测定】项修订幅度最大，新增了“特征多肽”含量要求： 驴源多肽A1特征离子对：m/z469.25712.30和m/z z469.25783.40，驴源多肽A2特征离子对：m/z618.35 779.40和m/z618.35 850.40，按干燥品计算，“含特征多肽以驴源多肽A1（C41H68N12O13）和驴源多肽A2（C51H82N18O18）的总量计应不得少于0.17%”。 此外，在2012年药典委颁布了《阿胶中牛皮源质量的补充检验方法》。2015版《中国药典》中，明确规定使用液相色谱-串联质谱法用于阿胶、龟甲胶、鹿角胶的鉴别。最近，国家药监局还颁布了《阿胶中猪皮源的补充检验方法》，在阿胶产品中应不得检出猪皮源（新阿胶）成分。 岛津参考以上标准和文献报道，使用胰蛋白酶对阿胶、牛皮胶和猪皮胶等不同来源的明胶类物质进行酶切处理，通过岛津LCMS-8045液相色谱质谱联用仪(图1)对特征多肽进行测定，从而实现阿胶与杂皮胶的鉴别与阿胶的定量。 图 1 岛津 LCMS-8045液相色谱质谱联用仪 主要方法参数 色谱柱：Shim-pack GIST (2.1 mm I.D.×100 mm L., 2.0 μm)MRM参数：见表1 表1 MRM优化参数对照药材分析 采用超高效液相色谱-质谱联用的方法，一次进样，同时分析8种特征多肽，实现阿胶药材的鉴别与定量。分析结果表明，阿胶、驴源多肽A1、驴源多肽A2、黄明胶、鹿角胶、龟甲胶、新阿胶、马皮源多肽信噪比均大于10：1，完全满足检测要求。如下图2（左右滑动查看全部内容）图2 阿胶等8种特征肽定性色谱图 样品测定 对阿胶样品进行测定，黄明胶、鹿角胶、龟甲胶、新阿胶、马皮源通道均未检出；阿胶、驴源多肽A1、驴源多肽A2分离良好，峰形对称，且信噪比均大于10：1。如下图3（左右滑动查看全部内容）图3 阿胶定性定量肽段测量 总结 阿胶作为滋补佳品，消费者平时关注更多的是阿胶的功效。其实，无数“实验猿”为了保证阿胶的真实与有效，默默地完成了大量阿胶药材真伪鉴别与含量测定的工作。有了本文的方法，“实验猿”可以一针进样鉴别多种肽段，节省时间。除此之外，本方法加入了定量肽段，可以实现定性定量同时分析。 “暗服阿胶不肯道，却说生来为君容”。更多关于阿胶的文章，参阅岛津推出《胶类药材定性鉴别解决方案》。

基于实时荧光定量聚合酶链式反应分析(PCR)仪的核酸检测技术是《新型冠状病毒肺炎诊疗方案》中规定的新冠病毒确诊方法。因其操作便捷、相对快速高效、特异性强和较高的准确率，尤其适用于窗口期病例的及时筛查和判定，能有效防控疫情扩散。随着实时荧光定量PCR仪的频繁使用，其温度参数或光学物理参数可能产生偏差，进而影响判定结果。因此，开展实时荧光定量PCR仪全参数的计量溯源至关重要。 　　天津出现奥密克戎变异株本土确诊病例后，天津计量院高度重视，迅速建立技术团队。建标负责人，天津计量院热工室余松林博士放弃公休日积极组织撰写材料，同时为验证计量标准的准确性获取大量实验数据，与本室专业技术人员王喆赴医院加班加点开展现场实验。经过长期努力，完成了建标材料准备，并及时向上级主管部门提交了建标申请。 　　《实时荧光定量PCR仪校准装置》计量标准将为医疗机构和第三方核酸检测机构的荧光定量PCR仪计量校准提供技术支持，为坚持“外防输入、内防反弹”总策略和“动态清零”总方针贡献力量。该标准可实现实时荧光定量PCR仪温度参数，如示值误差、均匀度和升、降温速率，以及光学物理参数，如阈值循环数Ct值，溶解温度漂移和溶解温度比等全参数的计量溯源，与基于标准物质的荧光定量PCR仪计量方法相比，避免了后者可能引入的人为误差，提高了标准装置的溯源可信度。

1983年PCR技术的诞生，打开了分子生物学研究的热潮，划开了生命科学研究的后时代，为生命科学研究和临床检测带来极大便利。在我国，PCR技术开始兴起于上世纪90年代。当时作为新兴技术的PCR曾因为假阳性事件频发，被卫生部命令禁止用于临床诊断，这一禁就是4年。2002年，卫生部医政司发布《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》，宣布对PCR技术的临床应用开始解禁，国内PCR技术迎来大解放！2005年，一批被严格掌握在外企手中的PCR核心专利大规模到期，国内厂商迎来时机。2017年，罗氏最后一批PCR核心专利到期，PCR市场为广大厂商敞开大门。20余年以来，PCR市场发展稳步进行，国内PCR仪器市场以约3%~4%的增速稳定增长。到了2020年，新冠疫情突然爆发，在国家政策要求的常态化疫情防控形势下，PCR市场迎来超级爆发。各路资本争相涌入该细分领域，仪器研发厂商也纷纷涉足PCR和核酸提取领域，市场仍在不断涌入新玩家。据仪器信息网不完全统计，当前国内PCR市场已有超过80家品牌。在当前国内疫情缓和的大背景下，PCR市场的声量和舆论似乎大发消减，后疫情时期的PCR市场是否会回归新冠前“不温不火”的状态？答案是否定的。这个细分行业是精准医疗的重要基础，上半年以来PCR产品推陈出新，荧光定量PCR国标即将发布，有企业IPO上市，还有众多优质资本加码布局PCR黄金赛道。经过2020年的野蛮生长与洗礼，2021年的PCR圈收敛了，但领域前进的脚步无疑更稳健，市场展现出更蓬勃地生命力。拒绝野蛮生长 荧光定量PCR即将迎来国标时代长期以来，实时荧光定量PCR仪被国外品牌所垄断，近年来随着我国科技不断创新，制造水平逐步提升，国产化的实时荧光定量PCR仪开始占领国内市场。现行的行标或国标缺乏一个能对实时荧光定量PCR仪评价的统一标准，不利于行业的发展以及日常检测工作的开展。根据国标委发【2019】40 号文“国家标准化管理委员会关于下达 2019 年第四批国家标准制修订项目计划的通知”，其中项目代号 20194004-T-604 的《实时荧光定量 PCR 仪性能评价通则》为国家标准制定项目。在今年1月份，全国工业过程测量控制和自动化标准化技术委员会和分析仪器分技术委员会发布成立“实时荧光定量PCR 仪性能评价通则”国家标准起草工作组的通知，正式开始荧光定量PCR国家标准的制定。为进一步有力推动国产仪器市场化规范的实施，加快国产自主研发仪器的市场推广的健康发展，全国工业过程测量控制和自动化标准委员会分析仪器分技术委员会（TC124/SC6)秘书处于2021年7月10日~14日在苏州组织召开了《实时荧光定量PCR仪性能评价通则》标准工作组第四次会议并邀请多家仪器厂商一同进行了新一轮的实时荧光定量PCR仪性能评价方法验证工作。这是我国第一个关于荧光定量PCR仪性能评价的国家标准，天隆科技、杭州博日、鲲鹏基因，苏州雅睿、上海宏石、百源基因、杭州晶格、安徽皖仪、圣湘生物、安图实验仪器、华大智造、科源电子、谱尼测试等企业参与制定。　　该标准的制定，旨在建立实时荧光定量PCR仪性能评价通则，将目前分散于行业标准、地方标准中的有关方法进行整理和验证，对目前缺乏规范的方法进行研制，最终形成针对实时荧光定量PCR仪性能评价的通用方法标准。新品推出、产品获批 医疗市场准入产品又多了几家永诺生物在仪器信息网举办的第四届基因测序网络会议上重磅发布数字PCR新品ＭicroDrop-20微滴式数字PCR系统。新品具有的优势：基因突变灵敏度0.1%，绝对定量CV永诺生物MicroDrop-20数字PCR系统鲲鹏基因科技有限责任公司自主研发的Archimed X 系列-时间分辨逐孔扫描荧光定量PCR系统成功获得欧盟CE-IVD认证，符合欧盟相关要求和市场准入资格，成功取得进入欧洲等海外市场的“护照”。 Archimed时间分辨荧光定量PCR系统致善生物全自动一体化医用PCR分析系统Sanity2.0，日前获批国家药品监督管理局三类医疗器械注册证。厦门致善一体机Sanity2.0基于实时荧光PCR检测原理，一键启动，即可全自动完成核酸提取、配制反应体系、PCR扩增检测、报告结果。国际上崭露头角的医用PCR一体机企业主要有美国赛沛、生物梅里埃、罗氏等，致善生物此次获批的PCR一体机，是中国内地罕有拥有自主知识产权的全自动一体化医用PCR分析系统，可以说打破了国际头部生物科技公司的技术垄断，填补了国内PCR检测一体机赛道的空白。老牌企业高调露出：博日IPO进行时，天隆科华资本角力近日两家国产老牌的PCR企业相继高调露面，一家是想要上市注入资本力量，另一家是陷入仲裁纷争。博日IPO进行时：6月，杭州博日科技股份有限公司向港交所递交了上市申请，计划在主板挂牌上市，由中金公司担任独家保荐人。博日科技成立于2002年，专注于分子诊断仪器、试剂等产品研发、生产和销售并拓展到分子诊断服务领域。目前博日科技已开发并量产实时荧光定量PCR分析仪、全自动核酸纯化仪、各类PCR检测试剂等多类产品，销售网络遍布全球121个国家和地区。2020年博日营收达12.337亿，国内销量以18.5%的市场份额位居中国PCR设备市场的前列，海外销量排名也非常靠前。天隆要求母公司科华支付105亿投资款：7月中旬，科华生物发布重大仲裁公告。公告涉及西安天隆和苏州天隆创始人彭年才等四位申请人，要求科华生物按照2018年收购天隆的投资协议执行约105亿人民币的剩余投资价款以及约10亿人民币违约金。天隆科技还申请，若科华生物不能支付以上价款，则请求天隆科技股东彭年才、李明等四位申请人以约4.28亿人民币回购西安天隆62%股权，以约3300万人民币回购苏州天隆62%股权。科华生物在收到仲裁通知后，包括西安天隆科技有限公司的股权等会部分财产被法院冻结，而科华生物副总裁李明职务也被董事会解除。受益于相较于其他IVD技术的显著优势、广阔的市场需求及因技术快速迭代升级带来的应用范围拓展及成本下降，以及伴随而来的政策支持，分子诊断市场规模快速增长。作为核心的分子诊断技术，PCR技术也在不断更新迭代，PCR行业迎来全新机遇。仪器信息网网络讲堂将于2021年8月2日-5日举办第四届先进体外诊断技术网络会议（iConference on In-Vitro Diagnosis，iCIVD 2021）。在8.3日的分子诊断专场，将有3位PCR专家带来最热门、前沿的话题讨论。》》》点击此处免费占座