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苦杏仁中苦杏仁苷检测 杏大家应该都见过,也应该都吃过,杏仁大家可能也见过,也可能吃过,甚至还可能喝过用杏仁做的杏仁露。杏仁是蔷薇科植物山杏或杏的干燥成熟种子,是除去杏外层果肉和核壳最核心的部分。大家吃杏仁或喝杏仁露都能感觉到它有一股特异的香气,味微苦。一般的杏仁吃时需炒熟,味微苦,微毒,不宜多吃。生杏仁味较苦,而且有较强的毒性,需注意。 作为中药材,苦杏仁具有降气、止咳、抗炎、镇痛、平喘、润肠、通便、抗癌、降血糖、降血脂、美容等药物功效,可用于治疗咳嗽、气喘、胸满痰多、肠燥便秘、消化系统疾病、消解病人疼痛痛苦等。 很普通的东西具有很了不起的药用价值,其中重要成分严格检测是必不可少的,药典中也有很严格的要求。下面就介绍下高效液相色谱检测苦杏仁中苦杏仁苷过程及结果。【实验部分】【原理】 取适量苦杏仁粉碎后经甲醇超声提取,注入色谱系统,经C18色谱柱分离,紫外检测器检测,外标法(保留时间定性,峰面积定量)分析计算,得出结果。【仪器及试剂】 仪器:高效液相色谱仪(紫外检测器+等度泵+柱温箱+在线脱气机等),超声波清洗仪,溶剂过滤器,电子天平(0.0001),药典筛二号筛等。 试剂:甲醇(色谱纯),乙腈(色谱纯),磷酸(分析纯),超纯水等。【样品制备】 对照品溶液制备:精密称取苦杏仁苷对照品2mg于50ml容量瓶中,加甲醇溶解、定容,制成40μg/ml苦杏仁苷对照品溶液,备用。 供试品溶液制备:取苦杏仁样品适量,充分粉碎后过药典筛二号筛,准确称取过筛粉末0.25g于具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25ml,密塞,称定重量,超声处理30分钟,放冷,再次称定重量,用甲醇补足减少的重量,摇匀。 精密量取以上溶液5ml于50ml容量瓶中,加50%甲醇稀释至刻度,摇匀,0.45um有机相微膜滤过,待测。【色谱条件】检测器:紫外检测器检测波长:207nm色谱柱:Promosil C18 ( 250 mm X 4.6mm,5μm )流动相:乙腈:0.1%磷酸溶液=8:92(V:V)流速:1.0ml/min柱温:30℃进样量:20μl【色谱图】对照品色谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508221948_562173_2536753_3.png供试品色谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508221948_562174_2536753_3.png【计算】计算公式:样品中被测物含量计算公式:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508221948_562175_2536753_3.pngD----供试品中被测物含量,以(%)表示V----供试品稀释的总体积,单位(mL)P3----供试品被测物峰面积值P4-----对照品被测物峰面积值ρ2----对照品被测物浓度。单位为mg/mlm2----样品质量,单位(mg)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508221948_562176_2536753_3.png【结果】 通过计算,苦杏仁中苦杏仁苷的含量近似为3.54%,高于药典要求的3.0%,该苦杏仁中苦杏仁苷含量满足药典要求,该检测项目合格。【结论】 以上方法检测苦杏仁中苦杏仁苷含量结果准确、可靠,方法简便易操作,该方法适合该类样品检测。
[b][color=#425085]1[/color][color=#425085]摘要[/color][color=#425085] [/color][/b]本文根据《中国药典》2015版要求,测定中药饮片苦杏仁中苦杏仁苷含量的高效液相色谱方法,按中国药典条件,适当调整柱温,苦杏仁苷保留时间RSD%在0.31%,峰面积RSD%为1.40%。[b][color=#425085]关键词:[/color][/b]中药饮片苦杏仁苦杏仁苷高效液相色谱苦杏仁苷主要存在于苦杏、苦扁桃、桃、油桃(nectarines)、枇杷、李子、苹果、黑樱桃等果仁和叶子中。由龙胆二糖和苦杏仁睛组成的β-型糖苷。可特异性地抑制阿脲所致血糖升高和抗凝血作用。苦杏仁苷中毒非常严重.大都在食入果仁后1~2小时内发作。早期表现为精神不振、烦躁不安、头痛、头晕、流口水、恶心呕吐。症状会逐渐加重.出现呼吸抑制、意识丧失、牙关紧闭、抽搐以及体温.血压下降.常常危及生命。因此检测苦杏仁具体含量,意义重大[align=center][img=,247,151]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/04/201804111702267552_822_3358634_3.jpg!w247x151.jpg[/img][/align][align=center]图1 苦杏仁苷结构式[/align][b][color=#425085]2[/color][color=#425085]检测部分[/color][color=#425085]2.1[/color][color=#425085]仪器[/color][/b]本实验使用赛那尔H6000高效液相色谱仪系统。具体配置为H6000系列的两台输液泵、一台紫外可见光检测器、一台柱温箱溶剂管理器和spark Alias自动进样器;sainaer色谱工作站。[b][color=#425085] [/color][color=#425085]2.2 [/color][color=#425085]分析条件[/color][/b]色谱柱:岛津WondaSilC18 Superb 5um流动相:乙腈:0.1%磷酸=8:92(V/V)流速:1ml/min柱温:35℃检测波长:207nm进样量:10μL等度洗脱[b][color=#425085]2.3 [/color][color=#425085]标准品溶液的配制和样品处理[/color]标准品品溶液的制备[/b] 取苦杏仁苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含40μg的溶液,即得。[b]样品溶液的制备[/b] 取干燥好的山杏种子,粉碎,粉末过二号筛,称取约0.25g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25ml,密塞,称定重量,超声处理(功率250W,频率50kHz)30分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,过滤,精密量取续滤液5ml,置50ml量瓶中,加50%甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,制备好样品溶液。[b][color=#425085] [/color][color=#425085]3[/color][color=#425085]结果[/color][color=#425085]3.1 [/color][color=#425085]标样的色谱图[/color][/b][align=center][img=,559,278]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/04/201804111702396081_5945_3358634_3.jpg!w559x278.jpg[/img][/align][align=center]图2 40μg/ml标准品色谱图[/align][b][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085]3.2 [/color][color=#425085]线性关系[/color][/b]将配制浓度为40μg/ml的标准溶液,分别稀释成5μg/ml, 10μg/ml,20μg/ml, 30μg/ml和40μg/ml进样采集数据,以峰面积为横坐标,浓度为纵坐标绘制工作曲线,所得曲线良好,R达到0.999以上。标准品的浓度及峰面积的结果见表1。 [table][tr][td]级别[/td][td]浓度(μg/ml)[/td][td]峰面积[/td][/tr][tr][td]1[/td][td]5[/td][td]112587[/td][/tr][tr][td]2[/td][td]10[/td][td]212458[/td][/tr][tr][td]3[/td][td]20[/td][td]321247[/td][/tr][tr][td]4[/td][td]30[/td][td]433587[/td][/tr][tr][td]5[/td][td]40[/td][td]554228[/td][/tr][/table]表1 苦杏仁苷浓度及峰面积[img=,260,220]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/04/201804111703132501_3119_3358634_3.jpg!w260x220.jpg[/img]图3 苦杏仁苷的标准曲线 [b][color=#425085]3.3 [/color][color=#425085]精密度试验[/color][/b]40μg/ml的苦杏仁苷标准品连续测定6次,考察方法的精密度,保留时间和峰面积的RSD%结果如表2所示:[table][tr][td] [align=center]序号[/align] [/td][td] [align=center]保留[/align] [/td][td] [align=center]峰面积[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]29.291[/align] [/td][td] [align=center]542152[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]29.542[/align] [/td][td] [align=center]555212[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]3[/align] [/td][td] [align=center]29.458[/align] [/td][td] [align=center]534879[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]4[/align] [/td][td] [align=center]29.423[/align] [/td][td] [align=center]548721[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]5[/align] [/td][td] [align=center]29.542[/align] [/td][td] [align=center]548524[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]6[/align] [/td][td] [align=center]29.354[/align] [/td][td] [align=center]554258[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]平均[/align] [/td][td] [align=center]29.435[/align] [/td][td] [align=center]547291[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]RSD%[/align] [/td][td] [align=center]0.343[/align] [/td][td] [align=center]1.40[/align] [/td][/tr][/table][align=left]表2 苦杏仁苷重复性数据(n=6)[/align][align=center][/align][b][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085]3.4 [/color][color=#425085]样品测试[/color][/b]使用2.3配制好的苦杏仁苷样品溶液得出图4图谱:[align=center][img=,574,207]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/04/201804111704328122_8645_3358634_3.jpg!w574x207.jpg[/img][/align][align=center]图4 苦杏仁样品图谱[/align][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color] [table][tr][td] [align=center]组份名[/align] [/td][td] [align=center]保留时间(min)[/align] [/td][td] [align=center]面积[/align] [/td][td] [align=center]含量(%)[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]苦杏仁苷[/align] [/td][td] [align=center]29.630[/align] [/td][td] [align=center]576392[/align] [/td][td] [align=center]1.6[/align] [/td][/tr][/table][align=left]表3 苦杏仁中苦杏仁苷测定结果[/align][color=#425085] [/color][b][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085]4[/color][color=#425085]结论[/color][/b]经测试,本方法的工作曲线好R=0.999以上。数据重现性好,保留时间RSD%=0.34%(n=6),小于国家要求0.5%以内,峰面积RSD%=1.40%(n=6),小于国家要求2.0%以内。并且峰形完好,拖尾因子为1.02。说明此方法适用于检测苦杏仁中苦杏仁苷的含量。[color=#425085][/color]
【作者】 刘涛; 刘利国; 高晓霞; 赵云丽; 于治国;【机构】 沈阳药科大学药学院; 辽宁省医药工业研究院; 沈阳药科大学药学院 辽宁沈阳110016; 辽宁沈阳110015; 辽宁沈阳110016;【摘要】 目的:建立测定麻杏石甘汤中苦杏仁苷含量的高效液相方法。方法:采用Diamonsil ODS色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-水(22∶78),检测波长215nm,流速为1.0mL·min-1,采用外标法进行计算。结果:苦杏仁苷在0.10~3.0g·L-1范围内呈良好的线性关系,r=0.9998,平均回收率为98.8%,RSD为1.9%。结论:本法操作简便、快速,可作为麻杏石甘汤中苦杏仁苷的含量测定方法。 更多还原【谱图】http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/08/201208142234_383917_1609970_3.jpg