凝胶过滤

北京德泉兴业商贸有限公司作为Cytiva 思拓凡品牌的代理商将继续秉承公司及品牌理念，以客户为中心，为您提供优质的实验室解决方案。凝胶过滤层析 (GF)，也称为尺寸排阻层析 (SEC)，基本原理是根据样品分子大小和形状进行分离的一种常用的纯化方法，属于非吸附性层析。图1: Cytiva全新一代Increase系列分子筛预装柱，专门为小规格制备纯化及分析而设计根据应用目的的不同，凝胶过滤层析主要可以分为以下三种方法：1分析型凝胶过滤层析：对于分辨率有很高的要求，上样体积一般在柱体积的0.3% - 0.5%；使用柱子的高度一般为30cm。而在快速纯度检测和筛选的实验中，常用的是15cm柱高的柱子，可以在提供足够分辨率的前提下，缩短运行时间，节省样品和缓冲液。2制备级凝胶过滤层析：对于分辨率有较高的要求，上样体积一般在柱体积的0.5% - 4%。同时，运行时流速较低，使用的柱子高度也比较高 (一般≥ 60cm)。经过纯化后的样品将被直接置换到合适的缓冲液条件中，用于后续的实验或储存。3脱盐与缓冲液置换：与上述精细分离不同，脱盐或缓冲液置换属于组分分离，即，将大分子样品与小分子或离子进行分离的过程，因此对于分辨率的要求相对不高。上样体积可达柱体积的30%。SephadexSephadex填料是早期发现的一种填料，按照交联度的不同，用Sephadex G加数字来区别，数字越小交联度越大，形成的孔径越小，对应的分离范围越小。Sephadex G系列填料目前一般主要用于脱盐与缓冲液置换，且有多种分离范围、颗粒大小可以选择。粗颗粒 (Coarse)流速较快，细颗粒 (Fine)流速较慢，分辨率较高。图2.不同上样量对于脱盐实验结果的影响SepharoseSepharose填料是高流速大分子分离。作为琼脂糖基质的填料，具有非特异性吸附低、回收率高等特点，分离范围宽阔，从10kD – 2×104kD，适合分子量大小差异大而对分辨率要求不高的样本。Sepharose和2,3二溴丙醇反应而成的Sepharose CL系列填料，增强了Sepharose的物理和化学稳定性。特别适合含有机溶剂的分离，能承受较强的在位清洗，并可以高温消毒，同时在流速方面也比传统的Sepharose填料有了明显的提升。Sepharose Fast Flow填料为粒径90μm的高度交联的琼脂糖填料，大大加强了机械性能，流速特快，适合工业规模生产。该填料经去电荷处理，非特异性吸附特低，回收率也得到了了提高。极高的化学稳定性，可用多种促溶剂、有机溶剂工作及1-2M NaOH进行在位清洗。SephacrylSephacryl填料是葡聚糖与N,N-亚甲基二乙酰胺交联而成的一种新型葡聚糖填料。目前Cytiva提供5种不同分离范围的Sephacryl填料：Sephacryl S-100 HR、Sephacryl S-200 HR、Sephacryl S-300 HR、Sephacryl S-400 HR、Sephacryl S-500 HR，选择性广阔。排阻极限甚至可以达到108，不仅可以用于分离一般的蛋白，也可以用于分离蛋白多糖、质粒、甚至较大的病毒颗粒。同时经济型HiPrep 16/60、26/60 Sephacryl S-100，200，300，400，500HR预装柱提高了分辨率和重复性，具有较好的分离特性。SuperoseSuperose填料是分离范围广的填料，同时宽广的分离范围配合高分辨率，能一次性分离生物分子大小差异大的混合物。刚性相比传统填料有了极大的提升，在高粘性液体如8M尿素下也能保持流速，适合糖类、核酸、病毒，特别是包涵体蛋白在促溶剂中的纯化。Superose填料的颗粒细小，大小分布集中，允许高流速纯化，所以适合中、高压层析系统使用。图3.用于精细分离的凝胶过滤层析产品的分离范围SuperdexIncrease平台系列预装柱：进一步缩小了填料粒径，提高了填料的耐压性能，提升了分辨率的同时有效缩短了分离纯化所需的时间。

葡聚糖凝胶简介月旭科技的交联葡聚糖产品名是Tandex，Tandex不溶于水，但有较强的亲水性，能迅速在水和电解质溶液中吸水膨胀，而且在碱性环境中比较稳定，所以用适当浓度的碱液（一般为0.2mol/L）可除去吸附在凝胶上的污染物。Tandex G是由葡聚糖和3-氯-1,2-环氧丙烷（交联剂）以醚键交联形成的具有三维多孔网状结构的高聚物，其交联度由交联剂的百分比决定。Tandex G的种类主要有：G10、G15、G25。G后面的阿拉伯数字表示每克干胶吸水量（g水/g干胶）的10倍。例如：Tandex G25表示该凝胶在吸水膨胀时每克干胶能吸水2.5g。G反映凝胶的洗水量、排阻极限及分离范围。例如：Tandex G10的网孔结构紧密，孔径小，吸水率低，排阻极限小，只能分离分子量较小的物质；而Tandex G25的孔径大，吸水率高，可分离分子量较大的物质。因强氧化剂和强酸可使Tandex中起交联作用的糖苷键水解断裂，所以在使用时要防止其与强氧化剂和强酸接触。在中性条件下，Tandex悬浮液可进行高温煮沸溶胀和消毒，其性质不受影响。在Tandex G25中加入亲脂性的羟丙基基团，形成烷基化葡聚糖凝胶Tandex LH型。它是一种同时具备吸附性和分子筛功能的独特凝胶介质，型号是Tandex LH-20，适用于有机溶剂洗脱，分离脂溶性物质，具有高处理量，可分离结构非常相近的分子，而且分离效果好。Tandex G系列葡聚糖凝胶产品性能Tandex LH-20产品性能

全球独有的技术---蓝光/绿光LED凝胶成像仪专利技术通过创新性地引入波长组合而不使用单一波长，从而产生470nm至520nm的蓝光/绿光光谱，这样能够激发470nm单一波长不能激发的染料，例如溴化乙锭等。并且可以通过染料的累积能量吸收来实现检测。最终实现所有DNA染料的信号强度可达到使用强紫外线仪的强度，但使用的光源却是更安全的。专利技术简介　　核酸的检测目前仍然主要是使用溴化乙锭这类核酸染色剂及紫外光照射。然而，紫外线对核酸的降解已有很多文献报道，因此可以认为它本身就是一种核酸破坏剂。此外，紫外线对使用者来说也具有危险性。因此总的来说，目前的这类核酸检测技术会由于DNA分子的破坏，而导致如测序、克隆等多种下游应用的效率大大降低。无害化的可见光已经被用于检测核酸，其主要局限性是只能激发绿色染料。以其开发的全新安全核酸染料MIDORIGreen而闻名的NIPPON Genetics EUROPE公司，针对目前的核酸检测技术开发了一种全新的核酸染料检测方法，它能够激发所有商用核酸染料。紫外灯的危害性DNA能够吸收紫外光谱中的光。其结果是形成嘧啶二聚体；单链DNA和双链DNA断裂，DNA与DNA发生链间交联和DNA与蛋白质发生交联。虽然生物体能够修复这些DNA损伤并承受上述后果，但琼脂糖凝胶中的DNA缺乏这些修复机制。此外，与整个生物体相比，凝胶中的DNA量要少得多。下面是对短期紫外线照射引起的DNA降解的研究结果：电泳后，凝胶暴露在紫外线下长达60秒。PCR产物随后被分离并克隆到一个对照载体中，之前用NdeI和HindIII进行双酶切，然后被克隆并转染到大肠杆菌DH5α(BL21)细胞中。结果如下:暴露在紫外线下的DNA受损严重，克隆效率明显降低。紫外照射60s后，DNA含量比空对照组要少得多。因此，我们确认了紫外线照射引起的DNA降解并且完全破坏DNA。一代技术---蓝色LED2009年，引入了蓝光发光二极管（LED）透射器。LED是能将电转化为光的半导体。其优点是有较为精确的波长，效率极高，平均寿命高达50000小时。它们发射出比紫外线波长更长的470nm波长的光。重复上述实验，并将DNA暴露在蓝色LED灯下相同时间：正如理论所预期的那样，暴露后每板CFU的数量没有任何显著变化。因此，防止DNA损伤大大提高了克隆效率。蓝色LED的问题尽管使用了更为安全的光源，但使用蓝色LED也有一个主要缺点。溴化乙锭是常见的DNA染色法，在蓝光激发下其结果往往比紫外要差很多。溴化乙锭与DNA结合的激发峰在480～525nm之间。如结果所示，溴化乙锭与DNA结合的信号非常微弱，几乎无法使用。绿色DNA染料，如MIDORIGreen染料，通过蓝色LED可以提供更好的信号。技术革新NIPPON Genetics EUROPE公司为解决这个问题提供了检测核酸染料的全新策略：通过创新性地引入波长组合而不使用单一波长，从而产生470nm至520nm的蓝光/绿光光谱，这样能够激发470nm单一波长不能激发的染料，例如溴化乙锭等。并且可以通过染料的累积能量吸收来实现检测。FastGene® 蓝/绿LED透射台（FG-08）产品正是基于这一原理发展而来：所有DNA染料的信号强度最终都有可能达到使用强紫外线透照仪的信号强度，但使用的光源却是更安全的。溴化乙锭和更安全的替代品通过这种独特的技术得到了一个更好的信号，并在下游应用中取得了更好的效果，并创造了一个更安全的实验室环境。NIPPON Genetics EUROPE公司使用这一技术而研发了独立成像系统和照明系统。“我只使用蓝/绿LED成像系统和MIDORIGreen Direct染料，它从来就没有让我失望过！”Jean Emly博士, Geneflow Ltd.公司创始人 , 英国• 混合LED波长可产生最 佳光谱，激发多种染料。• 无DNA/RNA降解• 溴化乙锭产生更强的信号• 也能激发荧光蛋白，如GFP、RFP等成像系统产品-1　----蓝/绿 LED GelPicBoxFastGene® 蓝/绿LED GelPicBox 将紧凑的占机身与蓝/绿LED技术的优势结合在一起。这可能是世界上小 巧的成像系统。FastGene® 蓝/绿LED GelPicBox配有蓝/绿和白色LED，用于记录核酸、蛋白质凝胶和膜。主要特点• 最小的成像系统• 2.7” LCD显示屏• 16 cm x 11.5 cm 观察区域• 蓝色/绿色 LED透射台• USB 2.0 接口FastGene® 蓝/绿LED GelPicBox 将紧凑的占机身与蓝/绿LED技术的优势结合在一起。这可能是世界上最 小的成像系统。FastGene® 蓝/绿LED GelPicBox配有蓝/绿和白色LED，用于记录核酸、蛋白质凝胶和膜。应用• 红色和绿色 DNA/RNA染料的检测• GFP, eGFP, YFP等荧光蛋白的检测• 蛋白质凝胶记录• 培养皿和膜记录• 琼脂糖凝胶中DNA的切取图像格式• Jpeg• TIFF• BMP照明---蓝色/绿色 LED透射台独 有的激发技术• 能够检测红色和绿色 DNA染料• 成像面积 16 cm x 11 cm• 超均匀透射• 每侧12个LED阵列---白色LED• 蛋白检测• 白色LED置于盖上---白色LED暗室灯• 膜和培养培养皿记录• 两个白色LED阵列照亮成像箱选配---CMOS传感器• 固定焦距• 9 M像素• 图像可以以TIFF、JPEG和BMP格式记录• 外接U盘成像系统产品-2　----FAS-DigiFastGene® FAS Digi是第 一 个采用蓝/绿LED成像技术的成像系统，并采用了模块化系统设计。它由FastGene® 蓝/绿 LED 透射台(FG-08) 和高端相机组成，拥有我们所有成像系统中超高的分辨率和令人难以置信的16M像素。摄像头支持Wi-Fi，可以使用智能设备进行控制。主要特点• 超 高分辨率 - 16 MPixel LiveMOS 传感器• 3” 可翻转触摸屏• 20 cm x 16 cm 蓝色/绿色 LED 透射台• 兼容白色LED透射台• 可由智能手机和平板电脑控制应用• 红色和绿色 DNA/RNA染料的检测• GFP, eGFP, YFP等荧光蛋白的检测• 蛋白质凝胶记录• 培养皿和膜记录• 琼脂糖凝胶中DNA的切取图像格式• Jpeg• RAW照明---蓝色/绿色 LED透射台独 有的激发技术• 能够检测红色和绿色的DNA染料• 成像面积20 cm x 16 cm• 超均匀透射• 每侧均有6个大型LED阵列选配---LiveMOS传感器• 24 mm - 64 mm 焦距(256 mm 数码变焦)• 16 MPixel• 触摸屏对焦• 图像可以用JPEG和RAW格式记录成像系统产品-3　----FAS-VFastGene® FAS-V是我们配置先进的成像系统。它是一个独立的成像系统，内置一台电脑和一个10.4英寸的触摸屏。它包含了我们迄今为止超 大的成像区域，用于DNA和蛋白质成像。它可选超灵敏的CCD传感器与高端的齐焦透镜，这种相结合的方式通常只有在高端的显微镜中才能看到。我们在这个易于使用的系统中将独特的激发技术与高端部件相结合以提供最 佳检测结果。主要特点• 超灵敏2MPixel CCD相机 (0.13 Lux)• 10.4” 触摸屏• 26 cm x 21 cm 蓝色/绿色 LED透射台• 26 cm x 21 cm 白色LED 透射台应用• DNA/RNA 染料的检测和记录• GFP, eGFP, YFP等荧光蛋白的检测• 蛋白质凝胶记录• 培养皿和膜记录• 第三方图像编辑图像格式• Jpeg• TIFF• BMP• PNG照明---蓝色/绿色 LED透射台独有的激发技术• 能检测红色和绿色DNA染料• 超大的26 cm x 21 cm 成像区域• 超均匀透射• 每侧12个大型LED阵列---白色LED透射台• 蛋白检测• 超大LED白光板 (26 cm x 21 cm)• 触摸屏直接控制---白色LED暗室灯• 膜及培养皿记录• 两个白色LED阵列照亮成像箱选配---CCD传感器• CCD传感器尺寸1/1.8“• 像素尺寸4.4 μm• 极弱信号（0.13Lux*）检测• 图像可以以 TIFF, JPEG, BMP 和PNG格式保存• 16 GB内部固态硬盘存储或外部USB存储• 曝光时间0.001秒至30秒• 日本制造*正常一天的清晰度在20000到100000Lux之间---超亮齐焦镜头- 无需对焦FastGene® FAS-V的镜头为齐焦镜头（放大或缩小时不必重新调整预先设置的焦距）• f/1.2大孔径• 无级调节光圈• 6倍变焦• 焦距12.5 mm 至75 mm*镜头光圈打开创新点：核酸的检测目前仍然主要是使用溴化乙锭这类核酸染色剂及紫外光照射。然而，紫外线对核酸的降解已有很多文献报道，因此可以认为它本身就是一种核酸破坏剂。此外，紫外线对使用者来说也具有危险性。因此总的来说，目前的这类核酸检测技术会由于DNA分子的破坏，而导致如测序、克隆等多种下游应用的效率大大降低。无害化的可见光已经被用于检测核酸，其主要局限性是只能激发绿色染料 第一代技术-蓝色LED 2009年，引入了蓝光发光二极管（LED）透射器。尽管使用了更为安全的光源，但使用蓝色LED也有一个主要缺点。溴化乙锭，最常见的DNA染色法，在蓝光激发下其结果往往比紫外要差很多。溴化乙锭与DNA结合的激发峰在480～525nm之间溴化乙锭与DNA结合的信号非常微弱，几乎无法使用。绿色DNA染料，如MIDORIGreen染料，通过蓝色LED可以提供更好的信号。 技术革新 NIPPON Genetics EUROPE公司为解决这个问题提供了检测核酸染料的全新策略：通过创新性地引入波长组合而不使用单一波长，从而产生470nm至520nm的蓝光/绿光光谱，这样能够激发470nm单一波长不能激发的染料，例如溴化乙锭等。并且可以通过染料的累积能量吸收来实现检测。 FastGene® 蓝/绿LED透射台（FG-08）产品正是基于这一原理发展而来：所有DNA染料的信号强度最终都有可能达到使用强紫外线透照仪的信号强度，但使用的光源却是更安全的。溴化乙锭和更安全的替代品通过这种独特的技术得到了一个更好的信号，并在下游应用中取得了更好的效果，并创造了一个更安全的实验室环境。 蓝绿LED凝胶成像系统