液相色素分析仪

CNW液相色谱柱对大闸蟹色素的提取研究1、实验背景中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)（以下简称河蟹）又称毛蟹、螃蟹，属甲壳纲、十足目、方蟹科、绒螯蟹属。主要分布在中国东部海域沿岸及通海的河流、湖泊中，具有很高的经济价值，是我国主要的养殖蟹类。在过去的几十年中，中华绒螯蟹迅速成为我国重要农业产品，目前我国的河蟹人工养殖发展较快，技术趋于成熟，由于其高营养价值受到广大民众的喜爱，故市场需求越来越大。河蟹品质评价主要从“靓肥绿大鲜腥甜”七个方面进行评判，因此，河蟹外观的美丑对河蟹的价值有很大的影响，但我国有关色素对中华绒螯蟹体色的影响研究还未见报道。故该实验主要从河蟹蟹壳色素出发，弄清河蟹色素含量与体色的关系。2、实验目的本实验采用丙酮提取组织色素，高效液相色谱法检测色素种类及含量，弄清河蟹组织成色与色素种类和含量的关系。3、实验方法3.1样品前处理采集样品并冷冻干燥，将壳与性腺碾碎，肝胰腺可以不用碾碎。3.2色素提取（1）一般称取0.2-0.5g冷冻样品，（2）将蟹组织转移至20ml安培瓶中，加4ml丙酮浸提，盖上瓶盖，50℃水浴震荡5h（用摇摆恒温温床200r/min）,取出安培瓶，吸出浸提液-20度保存，如此再浸提一次，最后将两次浸提液合并，并转移至15ml离心管中。（3）离心：将总浸提液进行离心，-4℃离心机离心，4000r/min , 5分钟。（4）定容：定容至25ml，用漩涡振荡器震荡均匀。3.3色素检测（1）用移液枪取1ml丙酮浸提液于小烧杯中，真空干燥箱蒸发丙酮。（2）再溶解：将小烧杯取出放于冰盒上（注意避光），加入1ml正己烷（HPLC）再溶解。（3）过滤：0.45um有机针式滤膜过滤，并将滤液转移至液相进样瓶中，盖好盖子。若不马上进行实验，则保存于-20℃。（4）液相检测:流动相：A:甲醇：水=75：25 和B :乙酸乙酯，流动相速度：0.5ml/min，进样量：20ul，温度：30 ℃ ，检测波长：470nm 。洗脱程序：B流动相 0.01----5min为30%，5- 15 min为30%-55%，15-20 min 为55% ，20-28min为55%-75%，28-35为75%，35-39 min为75%-30%，39- 50 min为30%。4、标准曲线绘制 分别精确称取虾青素和β-胡萝卜素标准品各5mg，用正己烷定容至100ml，则4种标准品的浓度均为100ug/ml，分别取0.5、1、1.5、2、2.5ml标准品溶液定容至25ml，摇匀，取2ml标准溶液于进样瓶，以备HPLC检测，绘制标准曲线，如表1，图1所示。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/03/201403181022_493537_2563834_3.jpg5、讨论5.1组织色素图谱分析通过实验得到了河蟹各组织色素图谱如图2所示，其中蟹壳中主要是虾青素，而肝胰腺中主要是叶黄素及少量虾青素，卵巢中则主要有虾青素、角黄素、叶黄素、β-胡萝卜素。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/03/201403181024_493538_2563834_3.jpg从图2可以看出三种标准品峰峰型对称、尖锐，表明组分谱带宽，检测灵敏度高。另外，该图谱基线平，除肝胰腺之外无毛刺，基线无漂移。整体效果还可以，但也存在一些问题，比如该实验中色素出峰时间延后，20min时才出第一个峰。另外，在20min左右时出现三个峰，而且三个峰未能完全分开，当然这对蟹壳和肝胰腺影响不大，但对于卵巢还是有点影响的。5.2 液相色谱柱使用评论及改进方法在上文提到出峰时间延后，这主要是与流动相及柱子的极性相关，并非液相色谱柱单方面的原因。一方面可以对柱子的极性进行改进，使出峰的时间提前。因为在使用安谱液相色谱柱（CNW: Athena C18-wp 4.6mm*250mm *5um）之前，该实验使用的是岛津（[