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实验室和生物安全柜的火焰安全用火焰消毒是古典的微生物学方法，由于会产生气溶胶，并使柜内气流紊乱，尽量不要使用。在不得不使用火焰消毒法时，建议使用电子式火焰灭菌器。下面就实验室中常用到的火焰加热或灼烧灭菌装置安全使用进行详细介绍。 一、酒精灯酒精灯是目前实验室常用的低中温加热及灼烧灭菌工具。正确安全使用酒精灯，应注意以下几点：1、正常情况下，酒精灯是酒精的气体在燃烧，故灯蕊通常不会消耗太快，若是发现灯蕊消耗太快就要调整灯蕊裸露在外的长度，使它缩短；因燃烧时热焰会往上升，灯蕊过长时，在顶端的棉线因受到位于其下方的棉线蒸发出的蒸气燃烧的火焰高温的影响而被点燃；另外酒精灯的灯蕊过长时燃烧的火焰会产生黄火的状况，易在被灼烧物的外壁沉积黑色的碳灰，且焰温也会降低。2、熄灭灯焰时要将盖子由火焰的侧面盖上，以免由上方盖上时被灼伤，同时也可避免在盖内累积太多的热量。盖子盖上后要尽量密合，以防止灯内的酒精在灯头处尚有余温的情形下挥发太快。酒精灯在长时间不用时也应将灯内的酒精倒出，储存在密闭的玻璃容器中。3、酒精灯不用时切记盖子一定要盖上，只有在欲点火时盖子才应打开。因为任何时候移去盖子酒精就持续挥发，若是酒精灯周围通风不良，挥发的气体会累积在酒精灯的周围，点火时很容易产生气爆现象而遭火焰灼伤。4、酒精灯的玻璃部分有任何的裂痕时都不可继续使用，应立即更换。5、酒精灯不小心打翻时，只需以湿抹布由火的侧方滑上掩盖住泼洒的范围即可灭火。或是以自身为准，由内往外从火的侧方盖下，切莫由正上方往下盖，以免灼伤自己。火焰扑灭后，应立即将门窗打开，尽快使空气中的酒精蒸气吹散，勿在其周围点火。二、本生灯(煤气灯)本生灯是实验室中高温加热与灼烧灭菌工具。因其火焰温度较高，故灯具的材质必须使用耐热金属，其使用可以燃气混合空气进行燃烧。本生灯在使用时要特别注意安全：1、 本生灯所使用的燃料在室温时是气态，应特别注意管线的安全。2、 使用前必须检查所有开关是否在关闭的状态。确定所有的开关都在关闭的状态时，才能打开燃气的总开关。3、 本生灯不可先开气后才点火，应于无漏气情况下，点火后逐渐开气，遇燃气漏气时，须实时检修。使用时，先以火柴或点火枪等点火工具放在本生灯的顶端燃烧口处点火，接着打开本生灯的燃气开关至适当大小送出燃气，此时燃气即被点燃，若在3 到5秒内未见燃气被点燃应立即关闭燃气开关，待十秒后再重复前述点火的动作，若仍未能点燃，可再重复点火程序。4、 通常燃气输送的管线过长时，初次点火较不易被点燃，因为此时燃气可能尚未送达本生灯处。燃气点燃时焰色应为黄红色，此时若火焰过大或过小都应立即调至适宜的程度。若在多次重复点火的动作后仍未能点燃，此时应仔细观察，若未闻到燃气味，代表燃气的供应有问题，应检查燃气开关是否正常或燃气是否用完。若闻到燃气味，则应检查是否空气开关未关闭、点火枪不正常或本生灯的出气口有堵塞的情形。待情况排除并且燃气味排除后才可再次点火。5、 燃气点燃后应接着打开空气开关。空气的送入可使燃烧变得较完全，此时火焰会渐呈蓝色。本生灯在使用时要注意火焰的调整，当空气量不够时，火焰会呈黄色，有时甚至会产生黑烟，此种黄色火焰不仅温度较低，而且因燃烧不完全，黄色焰区中的细小碳粒会附着在被加热物外壁上，要改善此现象只要增加空气的进入量，即可将火焰的焰色调到淡蓝色完全燃烧的状态，此时火焰温度在约焰高二分之一到三分之二的高度处温度最高，当空气的输入量适宜时，火焰的颜色会呈现完全的蓝色，而且燃烧的温度也会增高。6、 燃气不用时应立即关火。关闭燃气时宜先关闭空气开关再将燃气关上。7、 本生灯有火时，应随时都有人在旁边，不可任由本生灯燃烧而无人看管。实验结束时应先将总开关关上，再将管线内的燃气以本生灯点火烧光，以保证安全。8、 使用本生灯时，若不小心失火，应立即关闭燃气开关，再做其它抢救措施。9、 在使用本生灯时，遇风大或天冷时，不可将门窗紧闭，以免空气不足产生一氧化碳中毒。10、在生物安全操作柜内禁止长时间使用酒精灯和火焰式的本生灯，因为持续燃烧所产生的热效应会干扰生物安全操作柜内的气体层流，且火焰热气会大大缩短HEPA高效滤层的寿命。三、 电子式火焰灭菌器电子式火焰灭菌器在欧、美等发达国家的实验室已被普遍使用，以UniFire自动点火灭菌器为例，其采用功能强大的微处理器控制，并通选微功耗新型元器件使仪器功耗极低，使用可充电电池供电，采用红外感应器或脚踏点火开关，当微处理器收到点火请求，即发出指令打开电磁阀，并在燃烧器顶部发出高压火花点燃经混合后的燃气，随之灭焰检测、超温保护进入检测状态，一旦火焰熄灭，微处理器即刻关闭电磁阀，灭菌器停止工作。电子式火焰灭菌器的面世，令长期以来实验室常规火焰灭菌或灼烧用装置所带来的安全问题基本得以改善。电子式火焰灭菌器非常适于实验室及野外便携点火与火焰灭菌用火，功能方面不但可替代传统的酒精灯、本生灯等，而且有着传统火焰灭菌工具所无法比拟的优点。电子式火焰灭菌器体积小巧，无需外接电源，可接驳使用各种燃气，火焰即用即自动点燃，火焰大小可随意调节，燃烧充分，火焰温度最高可达1300℃，并备有完善的安全保护装置，操作极其方便。电子式火焰灭菌器使用时应注意：1、 保持工作环境通风良好。2、 仪器工作时勿将易燃物品放于附近。3、 燃烧器工作时温度很高，不要触摸燃烧器以免灼伤，用完后也不要马上触摸燃烧器。4、 如仪器工作时有回火现象，可调节空气旋钮，减小空气进入直至回火消除为止。5、 仪器用完后切记关好燃气瓶的开关，并把仪器电源开关拔至Off位。6、 在微生物实验操作中，利用火焰灼烧灭菌接种针及接种环，可能会造成微生物的空气污染。为减少空气污染，建议使用有罩式的脚踏式电子灭菌器。7、 在超净工作台及生物安全操作柜内如有需要使用火焰燃烧器，则建议选择红外及脚踏双点火模式电子火焰灭菌器，以便于实验操作。总之，实验室火焰燃烧器的正确使用是一个实验室安全操作规范的重要组成部分，无论采用传统的酒精灯和本生灯，还是采用脚踏式电子灭菌器，都必须严格按照有关装置的操作规程，才能充分有效地发挥其在常规实验操作中的作用。
实验室常规灭菌一般使用百分之75酒精灭菌但是有的接种按照我们国家的规定是接种环火焰灭菌的这两种灭菌原理分别是病菌细胞核蛋白质凝固灭菌和干燥灭菌法但是达到的效力有没有具体区别谁知道啊？我查相关资料也没用找到具体有力证据。谁做过？可否提供一下？
培养基的高压灭菌及效果验证消毒灭菌在医学实践上有着重要意义。它可切断传播途径、控制感染扩散造成的危害；也可杀灭物品或器皿上的细菌，防止医院感染；在微生物检验的领域中，消毒灭菌是保正感染的病原学检验不受外来微生物污染的前提。（一）术语消毒( disinfection)、灭菌(sterilization)、抑菌(bacteriostasis)、防腐（antisepsis）和无菌( asepsis)是常用术语。下面就术语概念加以叙述。(1)灭菌：是用适当的物理或化学手段将物品中活的微生物杀灭或除去的方法。本法适用于制剂、原料、辅料及医疗器械等物品的灭菌。（如外科器械、注射器、基础培养基灭菌等。）(2)消毒：是破坏物体上活的病原微生物的方法，但不包括细菌芽胞和非病原微生物。如用酒精溶液浸泡体温计、新洁尔灭液擦拭检查台等。用于消毒的化学物品称消毒剂( dis-infectant)。一般而言，消毒对象是指物体而不是机体。(3)防腐：直接使用防腐剂(antiseptics)破坏或抑制活的病原微牛物的方法。如外科手术前碘液擦洗皮肤、双氧水清创伤口或杀菌肥皂清冼双手等。(4)无菌：防止感染病原体进入灭菌组织或物品的操作技术称无菌操作。无菌即为不存在活的微生物。用于消毒灭菌的物理方法有热力、电离辐射、超声波、过滤等。这里介绍热力消毒灭菌法。高热破坏微生物蛋白质、核酸、细胞壁和细胞膜，从而导致微生物死亡。受高热作用后，蛋白质分子运动加快，肽链连接键断裂，蛋白变性凝固；细胞膜功能受损使胞内物质漏出，细菌内外环境平衡失调。不同种类微生物对热的耐受力不同，多数无芽胞细菌经55-60℃作用30-60分钟后死亡，100℃时迅速死亡。有芽胞细菌则对高温有强的抵抗力，如肉毒芽胞梭菌煮沸需3—5小时才死亡。热力灭菌分干热灭菌法和湿热灭菌法两大类，相同温度下后者较前告效力大，其原因是：①湿热环境中菌体蛋白易凝固；②湿热穿透力比干热大；③湿热蒸气变为液态时可释放潜热，迅速提高被灭菌物体的温度。1．干热（dry heat）灭菌法(1)焚烧。直接点燃或在焚烧炉内进行，仅适用于废弃物品或动物尸体。(2)烧灼。直接以火焰灭菌，适用于微生物学实验室接种环、针和试管口等灭菌。(3)干烤。在干烤箱内进行，加热至150-180℃ 2-4小时达到灭菌效果，适用于高温下不变质、不被破坏和不蒸发的物品，如玻璃器皿、瓷器，不能用于塑料、棉、纸制品。2．湿热( moist heat)消毒灭菌法(1)巴氏消毒法。巴氏消毒法(pasteurization)是用较低温度杀灭液体中的病原微生物或特定微生物而保持物品中所需的不耐热成分的方法。此法由巴斯德创立，用于酒类消毒而得名。目前用于牛乳消毒。方法有两种：一种为71.6℃加热15秒，另一种为63-66℃加热30分钟。大多采用第一种方法。(2)煮沸法。在1个大气压下，水煮沸后温度达100℃，煮沸5分钟后可杀死一般细菌繁殖体。如于水中加入2%碳酸钠，可将其沸点提高至105℃，既可促进芽胞的杀灭，又可防止金属器皿生锈。(3)流通蒸气消毒法。又称常压蒸气消毒法，常用附诺(Amold)流通蒸气灭菌器，利用1个大气压下100℃水蒸气进行消毒，10-30分钟后细菌繁殖体被杀死，但对芽孢作用不大。(4)间歇灭菌法（fractional sterilization）。采用间歇方式达到灭菌目的。将灭菌物品置于阿诺流通蒸气灭菌器内，100℃加热15-30分钟，每日1次，连续3次。每次灭菌后取出物品置37℃孵育箱过夜，致残存的芽胞发育成繁殖体，次日再通过流通蒸气灭菌器加热而被杀灭。如此反复，既可杀灭芽胞，又可使不耐高温的物质免受影响。若某些物质不耐100摄氏度，则可将温度下降至75-80℃，每次加热时间延长到30-60分钟，常用血清凝固器对吕氏血清培养基和L-J培养基的灭菌属此方法。(5)高压蒸气火菌法。利用密闭的耐高压蒸气灭菌器(autoclave)，在蒸气不外溢的条件下，使锅内压力增高，随之蒸气温度也增高。通常在103.4kPa压力下蒸气温度达到121.3℃，维持15-20分钟，可杀灭所有的繁殖体和芽胞。本法适用于耐高温、耐湿物品的灭菌，如普通培养基、生理盐水、手术敷料等。（二）下向主要介绍高压蒸气灭菌器灭菌效果的验证方法高压蒸气灭菌器使物品灭菌后达到无菌要求，这是药品实验中的基本保证。高压灭菌器灭菌效果是否合格足实验成败的最基础最关键的首要步骤。除少数培养基只需加热溶解，不需高压灭菌外，大部分培养基均需121℃高压灭菌15-30分钟。尤其是对无菌试验培养基灭菌不彻底，直接关系到对药品的无菌试验结果。因此必须认真对高压灭菌器进行灭菌效果的验证。为此我们提供了进行灭菌效果验证的一个简易可行的方法。1．试验材料(1)嗜热脂肪芽胞杆菌纸片。嗜热脂肪芽胞杆菌(Bacillus stearothermophilus)ATCC7053是本法常用的生物指示菌，含芽胞量5-lO5 CFU/片。(2) 121℃压力蒸气灭菌化学指示卡。(3)溴甲酚紫胨水培养基116℃高压灭菌20分钟后备用。(4)O—150℃留点温度计2．方法与结果将嗜热脂肪芽胞杆菌纸片（以下简称菌片）用无菌镊子放人密封试管中。化学指示卡和留点温度计放入敞口试管中。以上两种试管各准备5-10份。分别放置在高压灭菌器蒸气口处、底部排气口处及底部出水口处或上下左右中间5处。如灭菌器为二层，则需放10处。留点温度计标化合格后方可用于验证试验。检测前，需将温度计的水银柱甩至40℃以下。每次监测后留点温度计的温差应存l℃之间，则说明灭菌器内的温度分布是均匀的。灭菌后的菌片应在严格无菌操作条件下放入灭菌后的溴甲酚紫胨水培养基内56-60℃培养24-48小时，观察颜色变化。如培养基变为黄色，说明菌片中的嗜热脂肪芽胞杆菌尚未完全灭活，细菌仍可在培养基中生长，分解葡萄糖产酸变为黄色。如培养基颜色不变化仍为紫色，则说明芽胞已灭活。同时要用未经灭菌的纸片放入培养基内作为阳性对照，不加纸片的空白培养基作为阴性对照。化学指示卡上的指示色块，在高压蒸气灭菌时，由淡黄色变为黑色。随着颜色变化的深浅，并与对照色相比，可判断灭菌效果是否达到要求。化学指示卡应在干燥处保存。遇潮会变色，影响灭菌效果的观测。高压蒸气灭菌必须使蒸气顺利进入灭菌器内，与灭菌物品接触，并将原有的冷空气排出方可达到灭菌的效果。要进行空载热分布和满载热穿透力验证(满载时不超过总体积的2/3)。二种验证各重复三次，共做六次。5个点六次试验表明温度均在121℃，化学指示卡变黑；程度与对照色一致；培养基均未改变颜色，说明高压蒸气灭菌效果合格。高压灭菌器属于强检仪器，但强检只是对仪器物理参数的考核。所以做过强检的灭菌器还必须进行灭菌效果的验证。一些单位常常忽略了这个重要的问题。国内市售的手提灭菌器，往往仪器指针达到所需的温度，但灭菌物品的实际温度却未达到要求。导致灭菌物品不彻底，影响实验结果。培养基灭菌不彻底，影响培养基的使用及结果判断。因此高压蒸气灭菌器无菌效果的验证是一个必须引起重视的问题。（三）灭菌时的注意事项使用高压蒸气灭菌器时，首先应注意在开放蒸气的同时，排除灭菌器内的冷空气。必须将器内冷空气全部排除后，才可关闭排气孔。假如灭菌器内仍存留有部分空气时，刚压力表上虽已达到了某一压力值，但器内之温度仍未达到相应之度数。存留的空气越多，刚二者相差也越大。差也越大，器内温度不足，灭菌则不彻底。 转
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