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DHI测定设备主要由三部分组成,乳成分测定仪,体细胞测定仪和自动进样器,其中乳成分测定仪和体细胞测定仪则用同一个自动进样器。本文主要从体细胞测定仪的结构和工作原理分析阐述维修该设备的一些步骤。1、流式细胞仪的结构体细胞测定仪主要采用流式细胞仪OR术的原理。流式细胞术(flow cytometery, FCM)是20世纪70年代发展起来的一种可以快速、准确、客观,可同时检测单个微粒(通常是细胞)的多项特性,并加以定量的技术。流式细胞仪是一种集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、电子计算机以及细胞荧光化学技术为一体的新型高科技仪器设备。一般其结构分为3部分:样品室及液流驱动系统;激光光源及光学系统;信号检测、储存、数据处理系统。仪器内部光学结构见图1。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/08/201308071351_456588_1644065_3.jpg从图1可以清晰的看出仪器的内部结构。其中样品室(也称为观察室)是仪器的核心部件之一,在样品室中被检测样品与激光相交,而样品室由石英玻璃制成,其形状为细孔,只供单列细胞流过,检测区在该孔的中心,这种结构的样品室的光学特性良好,流速较慢,因而细胞受照射时间长,可收集的细胞信号光通量大,配上广角收集透镜,可获得很高的检测灵敏度和测量精度。图2为流式细胞仪的模拟图,从图2更能直观的看到仪器的构造。通过仪器的构造了解仪器的工作原理,为仪器的维修打下坚实的基础。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/08/201308071353_456590_1644065_3.jpg图2 流式细胞仪的模拟图1.1激光光源和光学系统目前流式细胞仪的光源采用激光(laser)光源。激光是一种相干光源,它能提供单波长、高强度及稳定性高的光照,是细胞微弱荧光快速分析的理想光源。由于细胞快速流动,每个细胞经过光照区的时间仅为1μs左右,每个细胞所携带荧光物质被激发出的荧光信号的强弱,与被照射的时间和激发光的强度有关,因此细胞需要足够的光照强度。1.2流式细胞仪的分析原理经过染色液染色的样品溶液通过样品管被压进喷嘴的中央,同时无细胞的鞘液也被压入喷嘴,形成包绕细胞的鞘液流,使细胞以单列进入样品室,与水平方向的激光光束(波长488nm)垂直相交。稳定的液流推进装置,使染色的样品呈单列,每个细胞以均等的时间依次通过激光照射区。被荧光染色的细胞受照射后,产生两种信号,一种是散射光信号,其又分为前向散射光(Forward scatter,FSC)和侧向散射光(Side scatter,SSC),前者一般与细胞体积的大小呈正比,而后者与细胞的颗粒度和复杂性有关。2、故障分析2.1光源散射当用离子液或标样对体细胞进行测定时,如果测定结果偏低,其原因很有可能是激光聚焦的问题,发生激光的散射,导致结果偏低。其现象见图3。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/08/201308071357_456602_1644065_3.jpg[/
流式细胞仪的前向角FSC和侧向角SSC原理是什么?
4.1 流式细胞仪基本原理1. 生物学颗粒分析原理① 流式细胞技术是在单细胞水平上,对于处在快速直线流动状态中的大量细胞或生物颗粒进行多参数、快速的定量分析和分选的技术,现已成为现代医学研究最先进的分析技术之一。应用流式细胞仪对于处在快速直线流动状态中的细胞或生物颗粒进行快速的、多参数的定量分析和分选的技术称为流式细胞术。② 生物学颗粒包括大的免疫复合物、DNA、RNA、蛋白质、病毒颗粒、脂质体、细胞器、细菌、霉菌、染色体、真核细胞、杂交细胞、聚集细胞等,所检测的生物颗粒的理化性质包括细胞大小、细胞形态、胞浆颗粒化程度、DNA含量、总蛋白质含量、细胞膜完整性和酶活性等。③ 流式细胞仪是以激光为光源,集流体力学技术、电子物理技术、光电测量技术、计算机技术以及细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的新型高科技仪器。 ④ 流式细胞仪是在荧光显微镜技术、血细胞计数仪和喷墨技术的基础上发展起来的。⑤ 鞘液和样品流在喷嘴附近组成一个圆柱流束,与水平方向的激光束垂直相交,染色的细胞受激光照射后发出荧光,这些信号分别被光电倍增管荧光检测器和光电二极管散射光检测器接收,经过计算机储存、计算、分析这些数字化信息,就可得到细胞的大小、活性、核酸含量、酶和抗原的性质等物理和生化指标。2. 流式细胞仪细胞分选原理在压电晶体上加上频率为30kHz的信号,使液柱断裂成一连串均匀的液滴。当某类细胞的特性与要分选的细胞相同时,流式细胞仪就会在这类细胞形成液滴时给含有这类细胞的液滴充以特定的电荷,带有电荷的液滴向下落入偏转板间的静电场时,依所带电荷的符号分别向左偏转或向右偏转,落入指定的收集器内,从而达到细胞分类收集的目的。4.2 流式细胞仪的分类和基本结构1. 流式细胞仪的分类流式细胞仪根据功能不同可分为临床型(亦称台式机)和科研型(亦称大型机)。流式细胞仪根据其结构不同又可分为一般流式细胞仪和狭缝扫描流式细胞仪。http://www.care100.com/yqxjpkc/images/112.gif