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[color=#00008B][B]该帖为楼主自己整理,帖中所有楼主撰写的内容未经授权不得转载,否则属侵权违法行为![/B][/color]看到很多版友发帖求助讨论准确性的问题,我特意整理了一个关于定量分析误差问题的帖子,希望对大家有所帮助。高效液相色谱定量分析过程可分为样品的前处理、标准品的配制、进样、色谱分离、检测及数据处理等七个步骤。[B]一 误差的主要来源[/B]随着现在市场销售仪器自动化程度的提高,进样、色谱分离、检测及数据处理等实验环节对实验结果产生的误差越来越小,尤其在高效液相色谱定量分析中,实验结果的误差可能主要来源于样品的前处理及标准品的配制。[B]1、样品的前处理 [/B]样品的萃取率是样品前处理时存在的主要问题。当固-液萃取(含柱分离的前处理方法),液-液萃取时,存在萃取率不高且不稳定的问题。尤其在除去蛋白质时,存在变性蛋白质会吸附一些被测组分,导致萃取率降低的情况。通常,萃取率是通过在式样中添加被测成分在萃取的方法评价的。也就是说,被测成分的增加量和液相色谱中的峰面增大成比例关系,通过这种方法可以确定溶液中被测成分的变化趋势。 如果存在萃取率不稳定的问题,就有必要改变萃取的方法,要预先添加内标,然后萃取。这种情况采用的内标,必须与被测物质的化学结构类似,萃取的萃取率才可能相近。如果回收率不但接近100%而且较为稳定,可以证明这种前处理方法较为可靠。在分析中如果能充分考虑以上误差产生的各种原因,才有可能得到精确的分析结果。 [B]2、标准品的配制[/B]本帖中讨论的问题带有普遍性,影响高效液相色谱分析结果准确性的因素较多,仅在标准溶液的配置过程中,可以分为标准物质的称量,溶液的配制和溶液的储存三个环节。 作为标准溶液使用的标准物质其纯度要求很高,应避免使用纯度不符合要求的试剂,作为标准溶液使用的标准物质具有不可替代性,现在市场有销售的HPLC专用的溶剂及各种标准试剂可供实验选择;其次选择与样品浓度要求相适应的天平,应该尽可能使用高精度的天平,这样才能把由于天平使用带来的称量操作误差降至最低。[B]二 消除误差的方法[/B] 要提高分析结果的准确度,必须考虑在分析过程中可能产生的各种误差,采取有效措施,将这些误差减到最小。[B]1、选择合适的分析方法[/B] 各种分析方法的准确度是不同的。化学分析法对高含量组分的测定能获得准确和较满意的结果,相对误差一般在千分之几。而对低含量组分的测定,化学分析法就达不到这个要求。仪器分析法虽然误差较大,但是由于灵敏度高,可以测出低含量组分。在选择分析方法时,一定要根据组分含量及对准确度的要求,在可能条件下选最佳分析方法。[B]2、增加平行测定的次数[/B] 如前所述增加测定次数可以减少随机误差。在一般分析工作中,测定次数为2—4次。如果没有意外误差发生,基本上可以得到比较准确的分析结果。[B]3、消除测定中的系统误差[/B] 消除测定中系统误差可采取以下措施:其一是做空白实验,即在不加试样的情况下,按试样分析规程在同样操作条件下进行的分析。所得结果的数值称为空白值。然后从试样结果中扣除空白值就得到比较可靠的分析结果。其二是注意仪器校正,具有准确体积的和质量的仪器,如滴定管、移液管、容量瓶和分析天平,都应进行校正,以消除仪器不准所引起的系统误差。因为这些测量数据都是参加分析结果计算的。其三是作对照试验,对照试验就是用同样的分析方法在同样的条件下,用标样代替试样进行的平行测定。将对照试验的测定结果与标样的已知含量相比,其比值称为校正系数。 校正系数=标准试样组分的标准含量/标准试样测定的含量 被测试样的组分含量=测得含量×校正系数 综上所述,在分析过程中检查有无系统误差存在,作对照试验是最有效的办法。通过对照试验可以校正测试结果,消除系统误差。[B]4、样品定量分析过程中的误差[/B]样品处理要尽量减少操作者的技术问题带来的误差,样品的稀释次数、稀释工具都是误差的祸根,应尽量减少稀释次数,稀释工具用高准确度的。样品中的干扰组分会直接影响分析的准确度,而且有些组分会损坏柱子。纯化样品的过程尽量少用蒸发至干的步骤(在色谱分析中这一步又是不可少的),正确操作固相柱萃取、纯化小柱使用的步骤,注意提高每一步的回收率,使用内标法也是一个能准确定量的方法。 在手动进样中进样体积至少是样品定量环管体积的3倍,色谱分离程序要使色谱峰的分离度大于1.5,控制流动相、流量、温度等的平稳。流动相的污染都会抬高基线或减少信噪比,分辨率下降,试验条件的变化,如柱退化、不好的流动相等都能引起保留时间变化,引起一个峰或更多的峰不能被鉴别。正确设定仪器参数,选用合理的数据处理参数,用峰面积计算结果比峰高更精确。[B]三 结论 [/B]以上的分析的是我们能尽量控制的误差,还有一些不是操作者所能控制的误差,如被测定组分易分解、组分的含量高低、介质效应等。我们把能控制的误差减小到最低,那你的结果准确度将更高。
在液相色谱分析过程中,我们经常遇到的问题主要有二种,一种与液相色谱仪器本身因素有关,如液相色谱的阀门、混合器、检测器的光源以及其它的一些硬件设备。出现这类问题后,如果能找出问题根源,解决起来一般很简单,而且这类问题可以通过对仪器的精心维护来避免;而另一类问题则是分析方法本身造成的问题,如出现色谱峰形状不好、峰与峰之间不能分开、基线飘移等等。不幸的是,如果出现这类问题,看起来似乎很明显,但是要找出原因并解决这类问题却非常困难。为了减少出现这一类型的问题,就必须在分析之前,仔细研究并选择一个好的分析方法,有了一个好的分析方法,就很容易获得理想的分离效果,而且在出现问题是也很便于找出原因。要选择一个好的分析方法,就必须对液相色谱分析的一些基本原则要有一个很深的了解。下面是我们实验室对色谱分析人员进行技能培训的一些基本知识。 一:分析方法选择的基本原则 假如你想做一顿丰盛的晚餐,首先必须看一下食谱,然后检查一下你所需的东西是否齐全,如果少了配料还必须去商店购买,这样你才可能做出一顿可口的晚餐。同样进行液相色谱分析时,也必须按照一定的程序进行,首先你必须要有专门的仪器和试剂,然后有目的地选择分析方法,这样你才可能得到好的分析结果,避免走一些弯路。http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09510.gif
各位兄弟姐妹,大家好。实验中遇到不顺,真诚的请教大家。我做的是苯酚羟基化反应,产物中有苯酚,苯二酚(邻,对),苯醌,焦油,用安捷伦1100液相色谱分析,外标法计算选择性和转化率。但一直以来,计算出的结果老是差强人意。偶尔算出一个好的结果,但是一重复又不行了,有时候重复做几次都不一样,很是郁闷。最近又老算出来选择性超过100%。开始怀疑稀释误差的问题(样品是稀释以后去测的),但现在操作的时候非常小心了,怀疑标准曲线的问题,但是重新做了好几条了。但结果就是很奇怪,自己想了想:1.因为液相色谱仪是公用的,所以特意买了专用的色谱柱。但经常测的时候发现柱压不一样,是不是因为这个影响了峰面积,进而影响了结果?柱压的影响这么大么?2.是不是外标法就不准确?该用单点校正法?之前觉得每次测样前都配一个标样有点麻烦,所以没用。3.还是别的什么原因?我用的柱子是ZORBAX SB-C18, 用的甲醇:水=3:7,每个峰都分的很开。取样后离心去掉催化剂,再定量稀释然后去测的。因为分析的问题有时候做实验都怕是白做,很着急,希望好心人和懂的高手给予指点,不胜感激,谢谢了,祝你们学业事业有成。