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[size=2][font=宋体]细菌的接种方法有很多种,如划线法、涂布法、倾注法、斜面接种法、液体培养基接种法、螺旋接种法等,其方法和应用各有不同,下面进行解释以帮助实验人员选择操作。[/font][b][font=宋体]划线法:[/font][font=宋体]此法主要用于菌种分纯,获得单菌落[/font][/b][font=宋体]由接种环沾取少许待分离的材料,在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线,微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少,并逐步分散开来,如果划线适宜的话,微生物能一一分散,经培养后,可在平板表面得到单菌落。[/font][font=宋体]优点:可以观察菌落特征,对混合菌进行分离。[/font][/size][size=3][font=宋体][size=2]缺点:不能用于菌落计数。[/size][/font][/size][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/08/201008271311_239381_1790687_3.jpg[/img][size=2][b][font=宋体]涂布法:[/font][font=宋体]此法主要用于菌落总数计数[/font][/b][color=black][font=宋体]先将培养基熔化后趁热倒入无菌平板中,然后用无菌吸管吸取[/font][/color][color=black][font='Arial','sans-serif']0.1ml[/font][/color][color=black][font=宋体]菌液接种在已凝固的琼脂平板上。再用无菌[/font][/color][color=black][font='Arial','sans-serif']L[/font][/color][color=black][font=宋体]型玻璃棒将菌液在平板上涂抹均匀,将涂抹好的平板平放于桌上[/font][/color][color=black][font='Arial','sans-serif']20~30min[/font][/color][color=black][font=宋体],使菌液渗透入培养基内,然后将平板倒转,保温培养,至长出菌落后即可计数。[/font][/color][font=宋体]优点:可以计数,可以观察菌落特征。[/font][/size][size=2][font=宋体]缺点:接种前需梯度稀释,吸收量较少,较麻烦,平板不干燥效果不好,容易蔓延。[/font][b][font=宋体]倾倒法:[/font][font=宋体]此法主要用于菌落总数的计数[/font][/b][color=black][font=宋体]吸取[/font][/color][color=black][font='Arial','sans-serif']1ml[/font][/color][color=black][font=宋体]菌液加入平板中,倒入已融化并冷却至[/font][/color][color=black]45~50[font=宋体]℃[/font][/color][color=black][font=宋体]的细菌培养基,轻轻转动平板,使菌液与培养基混合均匀,冷疑后倒置,适温培养。至长出菌落后即可计数。[/font][/color][font=宋体]优点:可以计数,较方便。[/font][/size][size=2][font=宋体]缺点:接种前需梯度稀释,不能观察菌落特征,不适用于严格好氧菌和热敏感菌。[b][font=宋体]斜面接种法:此法主要用于保存菌种,或观察细菌的某些生化特性和动力[/font][/b][/font][font=宋体]用接种环或接种针伸入菌种管内,挑取用来移种的菌落。伸入斜面培养管内,先从斜面底部到顶端拖一条接种线,再自下而上蜿蜒划线,或直接自下而上地蜿蜒划线。接种完成之后,用火焰灭菌培养管口,并塞上棉塞,置于[/font][font=Times New Roman]37[/font][font=宋体]℃[/font][/size][font=宋体][size=3][size=2]培养。[/size][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/08/201008271312_239382_1790687_3.jpg[/img][/size][font=宋体][/font][/font][b][size=2]液体培养基接种法:此法主要用于[/size][size=2]菌液比浊实验[/size][/b][font=宋体][size=2]用灭菌接种环挑取菌落或标本,在试管内壁与液面交界处轻轻研磨,使细菌均匀得散落在液体培养基中。[/size][/font][font=宋体][size=3][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/08/201008271312_239383_1790687_3.jpg[/img][/size][/font][size=2][b][font=宋体]螺旋接种法:此法主要用于菌落总数计数[/font][/b][font=Times New Roman]Spiral plater [/font][font=宋体]可以在无任何全部或中间稀释的情况下快速细菌接种。对数减少的样品容量以阿基米德螺旋线的形式被自动分注在旋转式培养基表面。培养基上每一点的容量可以被知晓和校准。菌液的浓度可以通过培养皿上一定区域的菌落数量除以同区域样品分注量来计算。[/font][font=宋体]优点:螺旋接种法菌液无需稀释(其他接种方法均需经过梯度稀释才能计菌落数),自动化接种,效率高,可节省[/font][font=Times New Roman]3/4[/font][font=宋体]的耗材和时间[/font][font=宋体]缺点:产品成本高,适用于样品量比较大的实验[/font][/size]
之前用接种胶囊,成本较高,用土壤或者废水做接种液也不太好掌控,可不可以用养鱼的硝化细菌呢?之前尝试过法国科迪的消化细菌,标样是做出来了,但是成本也高,如果尝试消化细菌可以把标样做出来,是不是就可以用硝化细菌?
一、灭菌1、 洗净两个250mL锥形瓶。(注:1提前准备好,以节约时间;2可开启培养箱37℃)2、 用滤纸称量1g蛋白胨、0.5gNaCl(也可直接加入到锥形瓶中称量,但是速度较慢,需防止过量),倒入锥形瓶中。3、 称量0.3g牛肉浸膏,用玻璃棒沾少许,滴加到锥形瓶中(因取量较少,所以玻璃棒不宜沾多,以防过量)。4、 加入100mL去离子水,稍加热溶解(注:1营养琼脂培养液需加热至沸腾使琼脂充分溶解;2此时,可开启高压灭菌锅开始预热升温,注意检查灭菌锅内水量。)5、 调pH至6.8±0.1,加入约15滴1mol*L-1 NaOH溶液(7-8滴)。6、 将营养汤锥形瓶包扎封口,放入高压灭菌锅中121摄氏度灭菌约15min,(A号控温不稳定),(注:做实验要求既好又快,合理安排时间,提前做好准备,计算好时间)。7、 灭菌结束后,迅速去除两瓶营养肉汤,放入超净台中冷却,待接种,(此时开启紫外灯灭菌。)二、接种1、 灭菌后的肉汤放入超净台中,约需1h冷却;2、 戴好口罩,用75%酒精喷洗手杀菌,坐于超净台前,点起酒精灯,从冰箱中拿出冷藏的菌种,对接种铂丝灭菌冷却接种,(提前开启培养箱,设定温度为37°C,振荡速度为100rpm)。3、 接种完毕,放入振荡培养箱中培养18-24h,(一般18h细菌活性最强,最适宜做实验,所以实验前需计算好时间。)(注:离开实验室时,注意再次查看振荡培养箱的温度,振荡是否都开启。)