博科酶标仪

在用酶联免疫法测定抗原或抗体时，不论是定量试验还是定性试验都要求使用酶标仪进行测定。一般的酶标仪在测定中均有单波长和双波长的模式，并且采用的都是垂直光路。但在日常工作中有时会不太重视单波长和双波长的选择，对使用单、双波长给测定结果带来的较大差异也不很了解，并且实际工作中也出现了使用单波长检测导致抗HCV部分弱阳性的漏检。因此，本人就酶标仪在选择单、双波长使用方面谈谈个人的体会，供同道参考。一 材料和方法1.材料 由上海科华公司提供的乙肝表面抗原测定试剂盒；eppendorf 20-20ul的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url][/color][/url]。2.仪器 上海科华公司的ST-360酶标仪和BIO-RAD 550酶标仪。3.方法 底物液配制：底物液A、B各5ml混合，加入微量酶标记物，再加入5ml终止液，呈微黄色，混匀待用；利用上海科华公司提供的乙肝表面抗原试剂盒的酶标板，用94孔中准确加入150ul配制好的上述底物液，另2孔中加入150ul已终止的空白底物液作空白。在BIO-RAD 550酶标仪上分别进行450nm单波长和450nm及655nm（无630nm）的双波长检测，在ST-360上分别进行450nm单波长和450nm及630nm的双波长检测吸光度各两次。二　结果　　1.分别对所得结果进行统计，发现单、双波长测定结果有较大的差异，双波长测定结果的CV值远小于单波长测定，结果见表1。2.对ST-360两次重复测定结果进行分析，结果基本一致，见表2。表1酶标板吸光度在两台酶标仪上的测定统计结果酶标仪 BIO-RAD550 ST-360 波长 450nm 450nm+655nm 450nm 450nm+630nm 最小值 0.125 0.126 0.130 0.131 最大值 0.154 0.139 0.153 0.141 均值 0.1356 0.1329 0.1399 0.1361 标准差 0.00671 0.00267 0.00467 0.00247 CV（%） 4.94 2.01 3.34 1.82 最大值/最小值 1.232 1.103 1.177 1.076 表2 ST-360酶标仪两次吸光度测定统计结果波长 450mnm 450nm+630nm 1 2 1 2 最小值 0.130 0.129 0.131 0.131 最大值 0.153 0.152 0.141 0.141 均值 0.1399 0.1391 0.1361 0.13711 标准差 0.00467 0.00495 0.00247 0.00229 CV（%） 3.34 3.56 1.82 1.67 三　讨论　　1.酶标仪与分光光度计、自动生化分析仪等的吸光度测定有所不同，一般分光光度计是水平光路，而酶标仪则是垂直光路，但测定原理相同，都是使用朗伯-比耳定律，测定的都是样本的吸光度。垂直光的特点是标本吸光度受液体浓缩或稀释的影响小，不足之处是受被测样本液面是否水平、酶标板透光性、孔底是否平整等的影响较大。2.酶标仪在用单波长测定吸光度时，除受到测定干扰（样本的浊度、干扰色等）和电路干扰（包括噪音、漂移、电压等）等因素外，受液体表面张力的影响也很大。在检测过程中，由于液体表面张力的作用，液体的表面不是一个平面，而是形成一个凹面，从侧面看似凹透镜，这样不可避免会影响光路的正常通过。由于凹液面的影响，光线在通过液体时，除正常被液体吸收一部分外，尚有部分被折射和反射（如光线通过凹透镜那样），影响吸光度的检测。而酶标仪使用的又是通过光导纤维传播的点光源，如果每次能在同一部位检测，吸光度的重复性将得到保证，但由于机械运动等造成的误差，不可能保证每孔都在相同部位被检测，因此造成了孔与孔之间有一定的差异。结果见表1，整块板单波长检测的CV在3%以上，吸光度最高值和最低值的相对误差达17%以上。3.在双波长测定中，减少了测定干扰和电路干扰，因此测定结果明显好转，结果见表1，整块板样本的CV在2%以下。ST-360在进行稳定性观察中，如表2所示，两次检测结果基本一致，这表明ST-360的稳定性较好。同时，从表1也可以看到，科华公司生产的ST-360与BIO-RAD 550的检测结果一致，两者的检测性能基本相同。4.由于液体表面张力的不同，导致单波长测定时的误差较大。并且用不同的洗涤剂会影响到最后加入底物和终止液后的液面情况，用加入表面活性剂的洗涤液清洗后，形成的液面更凹，对单波长检测的影响更大，并且与表面活性剂的浓度成正比。而且中性蒸馏水洗涤后，单、双波长检测的结果基本一致。5.在酶联免疫法测定抗原抗体中，由于所使用的底物不论是邻苯二胺（OPD）-H2O2，还是四甲基联苯胺（TMB）-H2O2，显色终止后，在630nm和655nm处的吸光度值都只有吸收峰处（492nm/450nm）吸光度值的1%以下，因此，利用双波长检测，不会影响检测灵敏度。建立在进行酶联免疫检测时，酶标仪比色应该首选双波长。这样可以提高临界值处标本的分析正确度，减少实验误差。

我是黑龙江省药品检验所的一名药师。2004年我所买了一台雷勃酶标仪(labsystems Multiskan Ascent)，所长签字购买的(他从未咨询我们使用者的意见，就直接购买了，这也是事业单位的一个缺陷：购买者与使用者没有充足的沟通与交流。如果咨询我们的意见，我们也不会买这样一台仪器。不过，还是不提这些吧)。从此，我的痛苦经历就开始了。 这种酶标仪使用滤光片，而不是全波长测定。随机只配4个固定波长滤光片，如果没有实验所需的，只能另外购买。我做的一个检品，需要的是550nm的滤光片，询问雷勃中国总代理，回答没有此波长之滤光片，最接近的只有540nm。没办法，只能对付着用吧。总不能没有合适的滤光片，一买来就报废吧。 使用时，又出现问题了。酶标仪现在由计算机来操控，我在操作时遇到些困难，反复询问雷勃公司的工程师，结果，他也没有跟我说明清楚，我于是就自己按说明书研究起来，结果，由于我的误操作，电路板烧掉了。询问厂家，他说，只能返厂维修。那就填单子维修吧，今年5月中旬(具体日期记不清了)寄到厂家，他说换上电路板就可以了，结果，到6月份上旬才修好。修好以后，说维修费加配件费共3000元。我们所财务科说可以，但你们应该先把发票寄回来，我们才能把款汇过去；维修方呢，说只有你们把款汇过来，我们才能把发票寄过去。财务科说，事业单位的财务政策就是见发票才能汇款，维修方又说，公司的政策是只有先汇款才能寄发票，又举例说沈药有一台酶标仪，维修后也是遇到这种情况，结果维修方就这么坚持，最后沈药妥协了，而那时沈药那台酶标仪已经在维修方那躺半年了。最后双方又扯了一个月的皮，终于，我们妥协了----没办法，谁让仪器在他们手里呢？先把款汇过去，结果又等了一段时间，直到八月初才回到我们手里。这时，距离我们发出仪器已经三个多月了。 仪器回来后，我试了一下仪器，运行起来一切正常，就是，操作时，总是出一个对话框，说什么背景信号太高，不进行检验操作。就这个问题，我又询问了厂家，维护工程师说，他从未遇到过这种问题，若想解决问题，只能返厂维修。我说这又不是什么大问题，你们上门应该就可以解决；再说，刚维修完，又要返厂维修，是不是你们维修不彻底造成的。他说维修后都是经过试验合格后才能出厂的，另外，雷勃公司从来没有上门维修这一项服务，若想解决问题，只能返厂维修。我又问，如果路上出现问题怎么办，他回答说，这就是你们的问题了。 [em16] 我们所买了很多仪器，有安捷伦、迪马、岛津、沃特斯、伊利特、梅特勒等国内外许多厂家的仪器，每个厂家的售后服务都是可圈可点，还有定期回访等等个性化服务。但我从来没见见过这么牛叉的厂家，从未为客户着想，售后又如此得一塌糊涂。建议大家以后不要卖他们家的仪器了。

根据酶标仪国家检定规程中，有一项是测酶标仪波长准确度的，请问酶标仪能测波长吗？