荧光定量计

qPCR扩增曲线一般分成四个阶段：基线期、指数期、线性期和平台期。那么每个阶段PCR产物量的变化都有什么区别呢？哪个阶段最重要呢？小编这就一一道来。基线期PCR起始时，刚开始前几个循环的荧光信号还没有发生变化，接近一条直线，将其称之为基线，一般是3-15个循环。在基线期内，扩增的荧光信号被背景荧光信号所掩盖，无法判断PCR产物量的变化。指数期扩增的荧光信号高于背景荧光信号，扩增曲线起峰，开始进入指数期。在指数期内，每个循环积聚的产物准确加倍（假定100%反应效率）。该阶段的PCR反应具有高度特异性和精确度。因为所有试剂均充足，反应的动力学推动反应有利于扩增子加倍，所以产物出现指数级扩增。只有在这个阶段，Cq值与初始模板量的对数之间存在线性关系，所以在此阶段进行定量分析最合适。线性期（高变异性）随着PCR反应体系各成分的消耗，其中的一种或者多种成分限制反应，导致反应开始减缓，并且每个循环的PCR产物不再加倍，该阶段不再是指数级扩增。平台期反应停止，不再产生更多产物，并且如果放置时间够长，PCR产物将开始降解。因为每个样品具有不同的反应动力学，所以每支试管或每个反应将在不同的时间点进入平台期，最终的产物含量也各不相同。由于线性期和平台期的扩增产物已不再呈指数级的增加，PCR的产物量与初始模板量之间没有线性关系，所以也不能通过这两个阶段的PCR产物量计算出初始模板量。想要知道初始模板量的多少，还要依赖指数期的Cq值进行计算。▲ 图1. qPCR 反应的重要阶段如图所示，标准的扩增曲线是呈现S型的。曲线是否符合标准，不仅跟样本起始量、qPCR体系配制、反应程序等相关，更依赖于一套高品质的实时荧光定量PCR系统。对于实时荧光定量PCR系统来说，高度检测灵敏度、高度重复性和高度稳定性，是每一台qPCR仪的追求。高性能的Azure Cielo™ 实时荧光定量PCR系统完全符合以上要求，该系统来自美国Azure Biosystems公司，融合了高品质的帕尔特温度模块和基于光纤传输的光学检测系统，为您的科学研究提供高精准、高灵敏可靠结果。提供Azure Cielo-3通道和Azure Cielo-6通道，可根据实验需求灵活配置。同时配有10.3”触控系统，主机本身可独立运行、连接、远程交互，让您随时随地知悉实验进程和及时获得实验结果。▲ 图2. Azure Cielo™ 实时荧光定量PCR系统高度的灵敏度使用探针法，同时在Azure Cielo™ 实时荧光定量PCR系统和其他品牌产品上检测GAPDH基因，结果表明：A）Azure Cielo™ 实时荧光定量PCR系统对单拷贝基因的检出率更高。B）Azure Cielo™ 实时荧光定量PCR系统的Cq平均值要低于2个Cq。▲ 图3. 单拷贝基因检测对比(n=96)高度的重复性源于优异的孔间均一性。105拷贝数GAPDH模板，GAPDH引物扩增，96孔重复结果。Cq平均值=19.1，变异系数（Cv）=0.002。▲ 图4. 96孔重复扩增曲线 A）线性图 B）对数图 高度的稳定性稳定可靠的温度模块和光学系统，确保仪器连续运行1000轮qPCR实验，数据依然稳定可靠，重复性高度一致。对GAPDH进行检测并连续计算Cq值得出平均值和Cq值的标准偏差。Cq值=22.4+0.01。▲ 图5. 长时间连续工作数据稳定

JJF 1070-2023《定量包装商品净含量计量检验规则》（以下简称《检验规则》）将于2024年10月12日正式实施。现将有关修订内容解读如下：问题一：《检验规则》的修订背景是什么？解答：为扎实推进民生计量工作，确保定量包装商品净含量计量准确，更好维护人民群众切身利益，营造公平有序的市场竞争环境，市场监管总局于2023年3月发布了《定量包装商品计量监督管理办法》。为使《检验规则》与《定量包装商品计量监督管理办法》保持一致，充分发挥计量技术支撑作用，保护消费者权益，引导企业规范经营，提升计量质控能力，践行企业责任，提高国际竞争力，需要对《检验规则》进行修订。问题二：《检验规则》的修订意义是什么？解答：一是维护消费者权益。首先，《检验规则》对定量包装商品净含量标注等提出更具体的要求，使消费者对商品净含量的理解更加容易、准确。其次，优化了计量检验抽样方案，采用科学的抽样和检验方法，使抽样检验置信概率达到99.5%，从而保证净含量计量检验结果能够更加真实地体现定量包装商品的实际含量。二是强化企业主体责任。《检验规则》充分考虑企业实际需求，引导企业更加规范地标注定量包装商品净含量，同时对企业定量包装技术能力和诚信经营提出了更高要求。《检验规则》的实施，可以进一步维护市场秩序，促进企业公平竞争，推动构建全国统一大市场。三是加强与国际规则接轨。积极采用国际法制计量组织（OIML）R79号国际建议《预包装商品的标签要求》（2015版）和R87号国际建议《预包装商品的量》（2016版），推动我国定量包装商品更加适应国际化市场要求。问题三：《检验规则》的主要修订内容有哪些？解答：一是《检验规则》的适用范围发生变化。《检验规则》与《定量包装商品计量监督管理办法》的适用范围一致，并修订了定量包装商品的定义。《定量包装商品计量监督管理办法》第二条第二款规定：“本办法所称定量包装商品是指以销售为目的，在一定量限范围内具有统一的质量、体积、长度、面积、计数标注等标识内容的预包装商品。药品、危险化学品除外。”对定量包装商品的范围设定了排他性条款。二是《检验规则》细化对净含量标注的构成要求。对净含量标注中的数字部分，推荐不超过3位有效数字，引导企业为消费者提供更为清晰的净含量信息。例如：某企业生产的食用油，净含量标注为5.436L，若将其标注改为不超过三位有效数字，如：5.5L，则能让消费者更简洁、清晰地理解该商品净含量。三是《检验规则》对净含量标注提出“应清晰可见”等显著性要求。《检验规则》明确规定净含量标注“应清晰可见，商品包装主展示面或商品标签的显著位置，与商品包装的背景底色有明显区别”。目的就是要求企业为消费者提供更为清晰、准确的净含量信息。四是《检验规则》细化了净含量标注计量单位的选择。净含量标注计量单位的选择与《定量包装商品计量监督管理办法》附件1要求相一致，《检验规则》修订了“表1 法定计量单位的选择及检查方法”，将体积（容积）标注商品分为容积（液体）商品和体积（固体）商品，分别进行标注。液体商品可以使用质量单位标注，也可以使用体积单位标注。五是《检验规则》净含量标注类别（方式）选择应基于消费者的使用和贸易习惯。以体积、长度、面积单位标注的商品，标注的净含量应当是在参考温度20℃时商品的量；对于冰冻商品的量，其温度应当以制造商要求的、以维持商品稳定可用的温度为准。六是增加“介质”“包装材料”概念与定义。介质是非天然地存在于商品之中，且和商品内容物一起放入包装内的液体或气体。这些液体或气体的作用是用来容纳、保护、保存商品内容物。天然地存在于商品内容物之中的液体不属于介质。包装材料是在商品内容物使用（或食用）后，预期被抛弃的所有包装物。天然地与商品内容物生长在一起的皮、核或壳不属于包装材料。例如：核桃的壳、西梅的核等，不属于包装材料。明确“介质”“包装材料”的定义，可使检验人员、企业和消费者清晰地理解皮重的概念（皮重是指除去商品内容物后的所有包装材料的重量），有利于统一对《检验规则》检验方法的理解，减少误解。七是优化计量检验抽样方案。通过合理增加检验样本量，减少由于抽样数量较少造成的检验误判，有效降低企业风险。例如：检验批量为60件时，《检验规则》要求抽取的样本量为35件，而原《检验规则》抽取的样本量仅为13件。八是引入有限群体修正因子。通过引入有限群体修正因子，使净含量计量检验结果能够更加真实地体现实际含量，在更大程度上维护消费者权益。例如：检验批量为60件时，《检验规则》要求样本平均实际含量的修正因子为0.30，而原《检验规则》样本平均实际含量的修正因子为0.848。九是增加禁止误导性包装商品的附录。《检验规则》附录R“误导性定量包装商品的禁止”采纳R87号国际建议附录E的内容，对误导性定量包装商品进行了原则性要求，定量包装商品不应当以误导或欺骗消费者的方式进行构造或填充。问题四：《检验规则》的适用范围是什么？解答：《检验规则》的实施，可以在商品的生产、销售等全领域对定量包装商品进行科学的抽样和检验，确保消费者购买的定量包装商品净含量计量准确。《检验规则》适用于对定量包装商品净含量的计量监督检验和仲裁检验，委托检验可参考进行。生产和销售定量包装商品的单位亦可参照《检验规则》进行自控检验。接受计量检验的定量包装商品应是生产者自检合格的产品，或者是销售者进口、经销的商品。问题五：《检验规则》中对多件组合商品的标注有何要求？解答：《定量包装商品计量监督管理办法》第七条规定：“同一包装内含有多件同种定量包装商品的，应当标注单件定量包装商品的净含量和总件数，或者标注总净含量。同一包装内含有多件不同种定量包装商品的，应当标注各种不同种定量包装商品的单件净含量和各种不同种定量包装商品的件数，或者分别标注各种不同种定量包装商品的总净含量。”多件组合商品的标注应当遵守《定量包装商品计量监督管理办法》的规定，且符合《检验规则》的要求。对于同一包装内含有多件不同种定量包装商品的，强调的是“分别标注”各种不同种定量包装商品的净含量。例如：某包装内含有多件不同种定量包装商品，其净含量标注为：“净含量：200克（A产品40克×3，B产品40克×2）”，是合格的；如果其净含量标注为：“净含量：200g（5件）”，未按照《检验规则》对不同内含商品的净含量信息进行更明确标注，其标注为不合格。问题六：如何在线查阅《检验规则》全文？解答：登录http://jjg.spc.org.cn/，进入“国家计量技术规范全文公开系统”，输入“JJF 1070-2023”或“定量包装商品”等关键字查询，点击“在线预览”，即可查阅《检验规则》文本。

1、光学系统：最高六通道的配置，可灵活配置成1-6通道中的任意一种通道数，而且使用过程中可以随时进行通道数升级，以满足未来更多的检测需求2、滤光片组：有12 种激发/检测滤光片组可供自由组合，包括滤光片错配的FRET检测组合和专用于蛋白熔解曲线分析的滤光片组3、光源：采用蓝色、绿色、红色、白色（RGBW）四个高强度长寿命LED固态光源，确保在整个光谱检测范围内都有很强的光强，提高检测灵敏度，而且不发热，使用寿命长，终身免维护4、检测器：高灵敏度的通道式光电倍增管，有效降低背景噪音信号，检测灵敏度高5、检测方式：高性能的16道光纤扫描系统，16孔同时检测，检测快速，而且收集信号准确，无需ROX校正，但也可选择使用内参校正6、检测灵敏度：能检测到单拷贝DNA模板，能清晰区分1000拷贝和2000拷贝的质粒DNA7、检测线性范围：10个数量级8、检测样品量：384个样品，可使用标准的384孔PCR板9、样品反应体系：推荐最适反应体积2-30μl10、升温速率：最大4 ℃/s 11、温度均一性：±0.15 ℃12、温度准确性：±0.1 ℃ 13、线性温度梯度：独特的24列线性温度梯度功能，能帮助用户快速找到最精准的退火温度14、热模块： Peltier加热控温，热传导性好，耐腐蚀抗氧化15、检测速度：十六道光纤扫描，快速检测16、热盖：最高温度可达110℃，自动调节接触压力和高度，最大可达30kg/板17、仪器是专为定量PCR仪的一体化设计，不是从普通PCR仪上升级而来18、控制系统：通过电脑软件控制19、软件功能：具有绝对定量、双标准曲线法相对定量、双Delta Ct法相对定量（结合扩增效率分析）、熔解曲线、等位基因分型/SNP分析、终点法分析、扩增效率计算等分析方法 20、具有中文软件界面，方便中国用户的使用21、软件免费提供，可以无限制安装在多台电脑上，无需付费购买使用权限，终身可免费升级22、软件可以提供符合MIQE标准的实验报告，实现实验报告信息化管理和溯源23、静音技术：运行时最大的工作噪音不超过45 dB24、电脑连接：USB，可与LIMS系统连接 创新点：德国耶拿新品UVP GelSolo的最大创新点在于可以进行不同波长的选择。根据客户的应用需求，可以选择单波长（302nm）、双波长（302nm和365nm）、三波长（254nm、302nm和365nm）。302nm满足客户核酸的快速成像，365nm适用于胶回收，254nm可用于灭菌。独有的三开门设计，仪器前面和两侧都设有窗口，可直接观察凝胶，也可非常方便安全地进行切胶等操作，操作者不会直接暴露在紫外光照射下。 耶拿荧光定量PCR qTOWER384G