拟南芥中培养检测方案(培养箱)

　　拟南芥又名阿拉伯芥，属十字花科，为二年生草本植物。具有植株形态小，平铺直径5cm，高30cm；生长区域小，易于培养；基因组小，只有5条染色体，15700万个碱基对，27000个基因；生长速度快，周期短，一个世代大约只需要6周的时间；可自花授粉，也可以在不同种质系间杂交，种子多，每株每世代可产数千粒种子等特点。因此，拟南芥是植物科学，包括遗传学和植物发育研究中的模式植物之一（图1）。在2000年，拟南芥成为了第一个基因组被完整测序的植物。 　　尽管拟南芥生长周期短，且易于培养，但根据不同的实验需求，在培养过程中，对光照、水分及湿度等各种条件的控制有所差别，利用PERCIVAL AR系列拟南芥培养箱可设置不同的生长环境，满足不同的实验需求。 　　一、正常培养 　　简单的拟南芥培养，可用于基因表达、器官发育、基因突变等研究。 　　1、首先把拟南芥种子放到滤纸上，用70%酒精进行消毒处理，再用无水酒精进行处理（也可选择20%漂白剂以及0.05% Triton X-100 非离子表面活性剂做杀菌处理20分钟）。用无菌水冲洗5遍，然后将种子点到MS培养基上，pH5.9，另加0.9%琼脂以及2%蔗糖。 　　2、把种子放到4℃黑暗条件下进行春化48h-72h左右，在长日照或短日照条件下催芽，然后转到PERCIVAL AR系列培养箱中（图2）。利用Intellus控制器，编辑简单的昼夜模式，设定光照时间16小时（黑暗8小时）或者光照14小时（黑暗10小时）；选配Q23+连续光强调节装置，设定光照强度为100-150umol/m2.s;设定箱体内温度为光照条件下20-22℃，黑暗条件下18-20℃；选配湿度控制系统，设定箱体内相对湿度70%。 　　3、出苗大约7~10天，然后移入土中培养，采用底部灌溉方式浇水（利用土壤的毛细作用）。在第一次浇水前，可使土壤完全干燥，以后每隔7~10天浇一次水。 　　4、土壤可用营养土、蛭石以及珍珠岩比例10:1:1的比例配置，也可直接用堆肥、蛭石以及草炭等进行混合。在生长过程中，可用普通的花肥施肥一次或者不施肥。 　　5、当植株长到一定高度时，可剪断茎杆，以产生更多的花序，可用于转化研究或者获得更多的种子（图3）。 　　二、特殊培养 　　为了加快拟南芥生长速度，在移入土壤培养后，可设定长日照，利用Intellus控制器，编辑程序设定24h光照，光强100-250umol/m2.s，温度持续22-23℃。 　　拟南芥根系处理培养，可减少光照时间为8-12h，提高光照强度为100-350umol/m2.s，温度为光照条件下22-23℃，黑暗条件下18-20℃，其余培养条件同正常培养。