无花果含片中绿原酸的含量检测方案

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Chin JMAP，2001 February，Val.18 No. 1·65 · 高效液相色谱测定无花果含片中绿原酸的含量 唐仁茂 陈志清(姜堰225500 江苏苏中制药厂) 无花果含片由无花果、土牛膝、金银花、牡丹皮等八味药材组成的复方制剂，具有清热解毒，清肿利咽的功效。主药成份复杂，定量困难。绿原酸是金银花抑菌作用的有效成份已有公认，在本品制备过程中金银花是与君药无花果等其它药材同法提取的，测定其有效成份具有代表性。文献报道绿原酸的含量测定方法有紫外分光光度法11、薄层扫描法21、高效液相色谱法L3]等。本文采用 HPLC 测定无花果含片中绿原酸的含量，取得了满意的效果。 1仪器与试药 1.1 岛津 LC-10A 高效液相色谱仪；SPD-10A紫外检测器；JS-3030色谱工作站。 1.2 绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号：753-9406)；甲醇为普谱纯；其它试剂均为分析纯。 1.3 无花果含片(片苏苏中制药厂，批号：990205，990207 和990209)。 2 色谱分析条件 色谱柱：天津特纳Kromasil Cg(150mm×4.6mm，5pm)；流动相：甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(15：85：1：0.3)；在此条件下样品中的绿原酸与其它相关峰均能达到基线分离，特征峰保留时间在 5min 之内。理论塔板数为3160。该条件下对照品、样品及阴性样品的色谱图见图1. 图1 色谱图 A-对照品；B-样品；C-阴性样品；a-绿原酸 3 方法及结果 3.1 绿原酸对照品的纯度测定 取干燥至恒重的绿原酸对照品约4mg，置 100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，依上述条件进样 10pl，色谱出峰时间为 30min，以峰面积归一化法计算，绿原酸的含量为99.84%，符合含量测定要求。 3.2 对照品溶液的制备 取干燥至恒重的绿原酸对照品约14mg，精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。 3.3 标准曲线的制备 分别精密吸取对照品溶液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0和6.0ml 置10ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，在上述色谱条件下，分别进样10pl进行分析，以绿原酸对照品浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐坐，绘制标准曲线，得回归方程：A=14337c+1.6032×10，r=0.9999，结果表明，绿原酸的进样量在70~840ng范围内峰面积只分值与浓度呈良好的线性关系。 中国现代应用药孳志2001年2月第18卷第1期 3.4 精密度试验 精密吸取3.3项中4号对照品溶液，进样10pl，测定峰面积值，连续进样5次，结果 RSD=0.49%。 3.5 样品含量测定取样品约0.4g，精密称定，置50ml量瓶中，加水适量，超声振荡15min，放冷至室温，加水至刻度，摇匀，滤过，取滤液作为供试品溶液，按上述条件取供试品溶液10pl行行分析，结果见表1. 表1 无花果含片中绿原酸的含量/n=3 批号 含量(mg/片) RSD/% 990205 3.1978 0.79 990207 3.5660 0.53 990209 3.2256 1.42 3.6)稳定性试验取同一样品，按本法制成供试液，每间隔1h测定一次含量，在12h内溶液稳定， RSD=1.56%。如果置冰箱冷藏，溶液在 24h 内仍能保持稳定。 3.7重现性试验取同一批号样品，精密称定5份，分别按样品含量测定方法处理后分析，结果见表2。 表2重现性试验结果 编号 含量(mg/片) 平均含量(mg/片) RSD/% 1 3.4809 2 3.4329 3 3.5092 3.4551 1.10 4 3.4305 5 3.4219 3.8 阴性对照试验 取不含有金银花药材的样品，按样品含量测定方法处理后试验，结果表明，本品处方中的其它药材不含有绿原酸成分，色谱图见图1. 3.9 回收率试验 采用加样回收法，取已测含量的无花果含片适量，精密称定，精密加入一定量的绿原酸对照品溶液，按样品含量测定方法制备供试品溶液并进行测定，计算回收率，结果见表3. 表3 回收率试验/n=6 样品中含绿 加入绿原酸 测得量 回收率 元/% RSD/% 原酸量/mg 量/mg /mg /% 0.679 1.244 101.62 0.612 1.171 100.54 0.725 0.556 1.270 98.02 99.62 1.6 0.575 1.128 99.46 0.773 1.315 97.48 0.625 1.184 100.54 4 论 4.1 无花果含片系由八味药材组成的中药复方制剂，成份复杂。作者曾试图运用已报导的文献资料中所载条件，对该 品种中绿原酸的含量进行测定，结果都未能得到满意的效果。运用该法测定无花果含片中绿原酸的含量，方法简单，测定成份与其它组分能达到很好的基线分离，重现性好，回收率高，检测时间短(每份样品只需10min)。 4.2 实验中曾对超声声荡时间进行了考察，结果7，15和30min的含量测定结果基本一致，故选定超声振荡时间为15min。 ( 参考文献 ) 中国药典.一部.1995：189. ( 2 王宝.中成药质量标准与标准物质研究.北京：中国医药科技 出版社，1994：375. ) ( 3 刘健，刘晨江，赵志鸿.高效液相色谱法测定清肝利胆冲剂中绿原酸的含量.药物分析杂志，1996，16(2)：124. )