悬浮液中病毒和噬菌体含量检测方案(其它光学测量)

智能文字提取功能测试中

应用指南 直接观测和计算悬浮液中的病毒和噬菌体 简述 运用激光技术的纳米微粒跟踪分析新系统可以用于液体中实时的直接或单独观察到纳米颗粒物如病毒和病毒聚集体，还可以观察到高分辨率颗粒物大小的分布轮廓。该技术具有快速、可靠、准确并且成本低，正因为这些特点使之成为现存纳米颗粒分析方法(如动态光散射(DLS)电子相关光谱(PCS)、以及电子显微镜(EM)方法)的很好的替代或者补足。 该仪器可以同时、直接测量单个粒子扩散系数，并且用户只能用专用的纳米粒子跟踪分析 (NTA) 软件套件自动对样品中的病毒和聚集体计数和测量尺寸。图像显示结果表示为颗粒大小/颗粒数(或者颗粒大小/相对亮度)。这种单个颗粒的分析方法克服了那种只能给出平均颗粒大小分布的数据的颗粒分析系统所存在的固有的局限性。 图图11.NanoSight成生成的典型病毒图像。 疫苗生产/生长 病毒疫苗制剂必须已被认证(验证)，既要稳定，并包含已知的有效成分的比例。NanoSight可以立即、直接的评价产品的纯度和浓度。同样地，使用NanoSight可以简单地评价病毒制剂中的聚集体的形成度和形成率。NanoSight纳米颗粒分析仪允许厂商进一步改进产品的制造过程和优化产品的保质期。 NanoSight 可以用比常规生物50%组织细胞感染量 (TCid50) 或斑块检测方法更少的时间来实现制剂中所有颗粒的可视化和尺寸测量以及更多关于纳米颗粒量的相关信息。例如，存在的较大的粒子(NanoSight 可以测定大小和计数)代表另一种从细胞培养过程脱落的非病毒细胞碎片或者包含许多病毒的聚集体。 图2.颗粒大小/相对颗粒强度/颗粒数的三维空间图像 在一些情况下，这种聚合/污染物对厂商来说表示某些潜在的问题的，但是NanoSight 系统会立即对其识别。 病毒清除研究 病毒清除根据病毒最大滴定量的峰值来确定(根据实际应用来选取病毒类型)。病毒清除过程的步骤曾经被质疑，所以清除步骤需要认证。纯病毒和非聚集体病毒的峰值的相关数据必须在最高滴定量之前准备，并且在将它作为峰峰之前进行存储。NanoSight完美地建立了当有聚集体存在前后的储存状态。 病毒提纯 NanoSight可以快速的建立含有污染物或者聚集体的病毒制剂和量化开发者感兴趣的优化提纯方法却被认为无用的病毒制剂的相关情况。例如，图4显示的是对同一样品部分提纯(白线)和完全提纯(有效地去除所有污染物和聚集体，红线)之间的区别。注：垂直轴表示颗粒物浓度 (病毒颗粒/毫升)。 基于噬菌体的MRSA保护-噬菌体疗法 NTA仪器给Strathclyde大学的药学和生物医学研究所(IPBS) 的研究人员提供了关于检测和计数病毒颗粒的重要信息。这个团队采用自然生长的细菌来对抗耐甲氧西林金葡菌 (MRSA)。MRSA(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)是一变种金色葡萄球菌，它对大多数的抗生素产生了耐药性，很难治疗，并且可能致命。虽然“超级细菌”可以被洗涤剂杀死，但是稀释洗涤剂往往与实际应用不同并且达不到效果。正因为如此抗生素方法是很有吸引力的选择。 NanoSight的表征抗生素培养方法已被Mike Mattey博士(IPBS的荣誉讲师)领导的团队所应用。在考虑抗生素像干漆那样来保护高危细菌入侵的地方(缝合线、仪器和伤口)之前，我们需要知道培养的特殊说明以及其浓度的估计。NanoSight同意该团队观察和测量病毒实时快速地生长，并且成本低廉。Mattey 博士说：“病毒数量的特性说明需要对在20 nm-1，000 nm 范围的聚集体进行评价。”NanoSight与其他方法相比，具有获得定量样品报告快速、简便，并且成本低的优势。 Measurement Parameters测量参数 样品前处理：最少稀释到10-1010每毫升。 只需30秒就可准确、可复现分析。 大小分布就是数量分布，即可获得样品浓度。 实时视频剪辑允许时间与现象相关如聚合或溶解遵循定性和定量关系。在这过程中，可以计算大小和浓度的变化。 可测得的最低检出大小取决于粒子类型，但大多数病毒和噬菌体类型都可以看到、测量大小和计数。该技术的绝对极限为10 nm但仅限于高度伸缩材料。 该技术是不受限制的，且无需标定。 图3：病毒制剂覆盖颗粒大小分布图(最后一步分离提纯前为白线，后为红线) 到目前为止，已成功分析大量的病毒类型，其中包括： 腺病毒 . 细胞巨化病毒 (MCMV) 猪乳头瘤病毒 LLambda噬菌体 . 禽流感刺激物 (TMV . 鼠科白血病毒 (MULV) ● 日本脑炎病毒 (JEV) · CCyanovirus 单纯疱疹 流行性感冒 棒状病毒 M13 Nanosight Ltd， Minton Park， London Road， Amesbury， Wiltshire， SP RT， UK第页T：(+() F：(+ () E： enquines@nanosight.co.ukwww.nanosight.com