质粒-脂质纳米粒：一种用于体内外操纵神经元基因的有力工具

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诺海生命科学Nuohai Life Science诺海生命科学，Nuohai Life Science诺海生物科学仪器(上海)股份有限公司Nuohai Life Science (Shanghai) Co.，LtdNanoAssemblr技术 诺海生命科学Nuohai Life Science NanoAssemblr 是可用于纳米药物研究各个阶段的唯一内在可调的方案 全球信赖 最具创新性的生物医药公司和学术研究机构利用NanoAssemb 加速了其纳米药物研究进程， Nann 加速了其纳米药药物研究进程。NanoAsse 全球20多个国家得以使用 并获得了全球应用科学家团体的支持。 >接近300台 >20个国家 >250，000种制齐 先进技 内米药物 纳米颗粒 溶溶剂，与非良溶齐剂混合后 通过纳米沉淀法自组装形成纳米颗粒。 快速均一的混合是决定粒子质量的关键， 层流微流混合，层流微流混合， 快速、均一、可控、再生 ·非湍流；定肘均一混合 快速：1ms内完成混合 ·反应体积小，减少浪费 纳米粒生产规格从uL-L无缝切换 NanoAssemblr系列包括SparkM， Benchtoipr， BBlaazze"以及Scale-Up系统 为药物研发从发现到临床各个阶段量身定制。 系统内：增加或减少制剂量无需改变粒子处方条件 ·系统间：从实验室到临床的方案转换只需少量工艺改 计算机控制精准，可重复简易软件参数控制颗粒性质计算机控制消除人与批批次差异t算机控制消除人员与[相隔离 诺海生命科学Nuohai Life Scienncce 诺海生命科学简介》 RRESSION 3i 美国3i晶格层光显微镜，转盘共聚焦显微镜，双光子显微镜 oetaluma 美国 etaluma 全自动活细胞成像系统 美国Lifecanvas technologies 全自动组织透明化处理系统及荧光免疫标记系统英国 phasefocus Livecyte 非标记活细胞定量成像及分析系统 NaNoLive 瑞士Nanolive 3D迷胞断层扫描系统 YOKOGAWA◆ 日本 YOKOGAWA 3D活细胞激光共聚焦高内涵筛选系统 saua SlM纳米标尺、SHED纳标以及定制款纳米标尺，用手检测显微镜分辨率 regenHU 瑞士RegenHU 生物3D打印机 德国Magnettech 电子顺磁共振波谱仪， ESR/EPR 比利时MOLECUBES 小动物临床前成像PET/CT，SPECT/CT 法国 Vilber小动物活体成像、化学发光成像、凝胶成像 PST 美国 Photosound 小动物3D光声/荧光成像系统 品hion一 希腊Bestsolution 小动物平面型PET/SPECT成像系统 exsc TIONS 法国RXSlutions 离体CT成像系统 nanoPETPnama 德国 nanoPET MRI、CT、光学成像、超声波、SPECT/PET造影剂 NanoHYeRIDs 美国 Nanohyl s光学、光声金纳米颗粒造影剂 OChromalys 法国 Chromalys光学、多模态纳米探针(用于荧光显微成像、近红外成像、 RISyst 瑞士RISystem 小鼠植入支架 iSpe 美国 Spectradyne 全自动纳米微米颗粒分析仪 iZON 新西兰 iZON Science 外泌体分离纯化分析系统 加拿大 Precision Nanosystems纳米药物制备系统 NanoAssemblr" 从科研到临床无缝衔接Bench to bedside. Seamlessly.TM PRECISIONNANOSYSTEMSCreatee Transformatl nes 由于缺乏有效的基因递送工具，基因转染在神经科学领域受到了限制。最近，脂质纳米粒 (LNP) 作为在体内外均安全有效的核酸输送载体而引起了人们的兴趣。然而，脂质纳米粒的传统制备方法面临着许多挑战，例如操作人员差异，以及放大困难。在此，我们介绍了一种基于微流控的可放大 NanoAssemblr 平台，可重复、稳健地制备质粒-脂质纳米粒。质粒-脂质纳米粒实现了95%的转染效率，并在体内外实现了外源基因在难以转染的神经元中的高度表达。通过脂质纳米颗粒进行基因输送脂质纳米粒(LNP) 是一种可用于将核酸递送至细胞的平台。脂质纳米粒模拟通过内源性途径吸收的低密度脂蛋白(LDL)。脂质纳米颗粒对pH 值敏感，旨在将其荷载的药物释放到细胞质中。NanoAssemblr 系统NanoAssemblr 平台采用微流控技术精确控制微升至毫升级规模的纳米颗粒制备。大鼠原代神经元中的体外GFP 表达共聚焦荧光显微结果显示在5 μg/mL ApoE 的情况下，用包封GFP 编码的质粒DNA 的脂质纳米粒处理后，MAP2 阳性神经元中的GFP 表达（绿色）。大鼠大脑中的体内GFP 表达显示对10月龄FVB小鼠纹状体注射含GFP编码质粒DNA的脂质纳米粒后48小时GFP表达（绿色）的脑切片荧光显微照片。注射5 μl 3 mg/mL GFP质粒-脂质纳米粒制剂。用DAPI（蓝色）染色的细胞核、DiD（红色）染色的脂质纳米粒以及GFP表达（绿色）共定位于同一张图片内。脂质纳米粒摄取和GFP表达两者共定位于注射部位即纹状体中，并已扩散到周围其他区域，包括脑室系统和胼胝体在内的多个部位。流式细胞分析显示 GFP 表达和颗粒摄取GFP+神经元的百分比表明质粒表达取决于剂量，剂量为0.6 ug/mL时百分比最高。对 GFP MFI 也观察到了同样的剂量反应模式，每次处理 n=3，采用Dunnett多重比较检验进行单因素方差分析，**** p<0.0001, ** p<0.005。用包封GFP 编码质粒DNA 的脂质纳米粒处理过的DIV 7大鼠原代神经元中GFP表达的流式细胞分析。在最高剂量(0.6 ug/mL) 下，超过60% 的神经元表达了GFP。GFP阳性百分比和GFP表达强度（平均荧光强度；MFI）均可通过GFP质粒-脂质纳米粒的剂量进行滴定测量。在有1 μg/mL ApoE的情况下处理48 小时后，进行流式细胞分析。DiD+神经元的百分比表明脂质纳米粒摄取取决于剂量，剂量为0.6 ug/mL时百分比最高。对 DiD MFI 也观察到了这样的剂量反应模式，每次处理n=3，采用Dunnett多重比较检验进行单因素方差分析，**** p<0.0001，** p<0.005。对大鼠原代神经元中质粒-脂质纳米粒摄取的流式细胞分析。在DIV 7用含有质粒DNA的脂质纳米粒和荧光染料DiD对细胞进行处理。质粒剂量为0.6 μg/mL时，超过95%的神经元表现出脂质纳米粒摄取；在该剂量的十分之一(0.06 μg/mL) 下，摄取率超过85%。在有1 μg/mL ApoE的情况下处理48 小时后，进行流式细胞分析。附加表征未观察到脂质纳米颗粒存在细胞毒性Spark和Benchtop的包封率接近 100%脂质纳米颗粒粒径大小不受质粒长度影响由于样品切换的缘故，在Benchtop上制备的质粒脂质纳米颗粒粒径较小。基于微流控的NanoAssemblr技术能够以可重复的方式制备质粒-脂质纳米粒，这些颗粒可在体内外有效介导原代神经元中的基因表达，表明在NanoAssemblr?平台上制备的质粒-脂质纳米粒是神经科学应用领域的有效输送工具。在NanoAssemblr 平台上制备质粒-脂质纳米颗粒关于锘海锘海生命科学是一家创新型的科技公司，拥有自主研发及独立生产能力。锘海生命科学致力于生命科学领域，为高校、科研院所、医院及企业提供实验仪器、试剂耗材、CRO/CMO技术服务等一站式整体解决方案，满足产业中的研发和生产需求。地址：上海市松江区顺庆路650号1幢102、202室电话：86-21-37827858邮件：info@nuohailifescience.com网址：www.nuohailifescience.com