饲料中氨基酸的测定-柱后衍生法（把液相变成氨基酸分析仪来用）

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一．背景   氨基酸是一类含有碱性氨基和酸性羧基的物质，是羧酸碳原子上的氢原子被氨基取代后形成的化合物。  饲料中氨基酸主要有以下作用：1.促进动物生长2.提高饲料的营养价值3.改善肉质品质4.促进钙的吸收5.抵抗应激症6.提高抗病能力7.防止动物腹泻8.作恶日调味剂等。  目前氨基酸检测方法主要有分光光度法、毛细管电泳法、近红外法、氨基酸分析仪法和液相色谱法等，其中氨基酸分析仪法和液相色谱法灵敏度高且应用范围广泛，但前者仪器成本较高，并不是最佳选择；后者又分为手动衍生和柱后衍生。手动衍生操作复杂，稳定性差。为此，华派科仪特开发出一种简洁高效经济的氨基酸测定方法-柱后衍生法。二 . 原理简介  饲料中的氨基酸经过提取后，采用氨基酸专用色谱柱进行分离，在柱后衍生中完成衍生化反应，紫外检测器检测，外标法定量。三 . 方案详情      1.实验步骤   称取饲料50-100mg（含蛋白质约7.5-25mg，精确至0.1mg）于20mL水解管中，准确加入10mL6mol/L的盐酸溶液。充氮气1min后旋紧管盖。110℃水解22-24h。冷却至室温，混匀，过滤。取适量的滤液于60℃蒸干，3-5mL柠檬酸钠缓冲溶液复溶，过膜，待测定。      2.仪器方法      2.1液相方法泵：四元低压梯度泵  色谱柱：氨基酸专用色谱柱  紫外检测器双波长：570nm和440nm  梯度及柱温条件：请向华派科仪索取  进样体积：10uL     2.2衍生方法  流速：0.3mL/min  衍生梯度方案：请向华派科仪索取     2.3衍生原理简介一级氨基酸和茚三酮反应生成蓝紫色衍生产物，称为罗曼紫，紫外吸收为570nm；二级氨基酸与茚三酮反应生成黄色衍生产物，紫外吸收为440nm 3.方法对比方法毛细管电泳法分光光度法液相色谱法（柱后衍生-紫外法）氨基酸分析仪柱前衍生柱后衍生前处理需要手动衍生不需要手动衍生仪器毛细管电泳仪配紫外检测器分光光度计液相液相+衍生氨基酸分析仪（成本高）结果准确度低准确度低较准确准确准确 4.结果展示图一：一级氨基酸光谱图 图二：甘氨酸色谱图图三：蛋白质水解产生的20种氨基酸谱图四．方案配置1.配置一：仪器产品名称货号型号液相色谱（配紫外检测器）//柱后衍生系统/HP-HS20多管涡旋振荡器（四选一）/HP-M06、HP-M10、HP-M20、HP-M30色谱柱维护系统（选配）H#301031HP-CX10H#302031HP-CX20H#303031HP-CX30智能化全自动配标仪（选配）/HP-YS202. 配置二：耗材产品名称型号氨基酸标准品18种1umol/mL流动相4×500mL氨基酸专用色谱柱4.6mm×（25-30）cm色谱柱再生液500mL氨基酸衍生试剂包500mL清洗液500mL五．注意事项1.氨基酸前处理水解时需要去氧，氮吹需要控制气流2.水解需要110℃22小时，冷却后定容。3.去酸（此步骤很重要）4.液相方法和衍生方法需要搭配使用5.柱后衍生还可用于扩展于抗生素、甲醛、六价铬和生物毒素等多种项目检测   六. 联系方式    单位名称：华派科仪（青岛）仪器有限公司   地址：青岛市崂山区科苑纬一路千山大厦      网址：www.huapaikeyi.com   王经理：18562516443（微信同号）