培养基中含二肽（丙氨酰谷氨酰胺）氨基酸的测定

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Hitachi High-TechAS/AAA-007 LC Application Sheet 培养基中含二肽(丙氨酰谷氨酰胺)氨基酸的测定例 细胞培养所必需的L-谷氨酰胺在水溶液中性质不稳定，分解后会生成对细胞有害的氨。已知氨能够抑制细胞的生长及目标物的生成，于是人人始使用L-丙氨酰一L一谷氨酰胺(丙氨氨谷氨酰胺、Ala-GluNH，)来代替L一谷氨酰丙。丙氨谷氨酰胺是L-丙氨酸和L一谷氨酰胺缩合而成的二肽，在水溶液中的稳定性高，不易生成氨，因此可以进行更长时间的培养。 此次将介绍使用L-8900型高速全自动氨基酸分析仪，对包括丙氨醉谷氨酰胺在内的42个氨基酸成分进行测定的例子。采取生理体液分析和高分离度生理体液分析双柱兴式进行了测士。同时，将介绍添加了丙氨酷谷氨酰胺的培养基测定例。 【L-8900型日立高速全自动氨基酸分析仪】 标准样品与培养基的测定例(使用生理体液分析柱) 80 <色谱条件> 分析柱 ： #2622 4.6mm I.D. ×60 mm 脱氨柱 ：#2650L 4.6 mmI.D.× 40 mm 保护柱 ：#26194.0 mm l.D. ×5mm 流动相 ：PF-Buffer Kit 流速 ： 0.35 mL/min 柱温 ：32~70℃ 反应液 ： Ninhydrin coloring solution kit for HITACHI 反应液流速：0.3mL/min 反应温度 ：135℃ 检测波长 ： VIS 440nm、570 nm 进样量 ：20pL min 【氨基酸标准溶液测定例(各2 nmol/20uL(部分成分除外))】(色谱图中标记的Cys表示胱氨酸(半胱氨酸的2聚体)。) <样品前处理> 样品培养基(粉末)940 mg ←纯水100mL ←一加Ala-GluNH， 43.4 mg 提取1mL ←5%的三氯乙酸1mL 离心分离 10000 rpm、10 min 上清液 过滤孔径 0.2 pm 分析样品(进样20pL) ·min 【添加了Ala-GluNH，的培养基的测定例(前处理后进样20pL)】 使用生理体液分析川柱对42个氨基酸成分进行了测定。在标准分析方法中， Ala-GluNH，的出峰位置与Cys重叠，但对梯度程序进行优化后，便可以分离出Ala-GluNH，的峰，从而可以与其他氨基酸一样对该二肽进行定性和定量分析。 Hitachi High-Technologies Corporation ■标准样品与培养基的测定例(高分离度生理体液分析双柱联用) 440 nm dy 570 nm >>O工 斗 Z' 8 zr eH o .N <色谱条件> 分析柱 ：#2622 4.6 mml.D. ×(40+40) mm 脱氨柱 ： #2650L 4.6 mm I.D. ×60mm 保护柱 ：#2619 4.0 mm l.D. ×5 mm 流动相 ：PF-Buffer Kit 流速 ： 0.35 mL/min 柱温 ：32~70℃ 反应液 ： Ninhydrin coloringsolution kit for HITACHI 反应液流速：0.3mL/min 反应温度 ：135℃ 检测波长 ： VIS 440nm、570nm 进样量 ：20pL min 【氨基酸标准溶液测定例(各2 nmol/20 pL(部分成分除外))】(色谱图中标记的Cys表示胱氨酸(半胱氨酸的2聚体)。) 【添加了Ala-GluNH，的培养基的测定例(前处理后进样20pL)】 如果采用高分离度生理体液分析双柱联用，可以进行更高分离度的测定。由于双柱联用可以通过将两根色谱柱串联的结构对压力进行分散，因此能够实现高速、高分离度的分析。这样不仅可以完全分离Val 分Ala-GluNH，，而且还能够改善中间洗脱出的 lle、Leu、Tyr的峰形，实现更高精度的定量分析。 【氨基酸成分名列表】 P-Ser 磷酸丝氨酸 Sar 肌氨酸 Ile 异亮氨酸 Hylys 羟典氨酸 Tau 牛磺酸 0-AAA α-氨基己二酸 Leu 亮氨酸 Orn 鸟氨酸 PEA 磷酸乙醇胺 Pro 脯氨酸 Tyr 酪氨酸 Lys 赖氨酸 Urea 尿素 Gly 甘氨酸 Cysthi 胱硫醚 1Mehis 1-甲基组氨酸 Asp 天门冬氨酸 Ala 丙氨酸 Phe 苯丙氨酸 His 组氨酸 Hypro 羟脯氨酸 Cit 瓜氨酸 B-Ala β-丙氨酸 3Mehis 3-甲基组氨酸 Thr 苏氨酸 0-ABA α-氨基正丁酸 B-AiBA β-氨基异丁酸 Ans 鹅肌肽 Ser 丝氨酸 Val 缬氨酸 GABA y-氨基正丁酸 Car 肌肽 AspNH2 天冬酰胺 Ala-GluNHI 丙氨酰谷氨酰胺 EtOHNH 乙醇胺 Arg 精氨酸 Glu 谷氨酸 Met 蛋氨酸 Trp ：色氨酸 CySH 半胱氨酸 GluNH2i谷氨酰安 Cys 胱氨酸 Page. Page.(Hitachi High-Technologies Corporation