火锅底料中罂粟壳检测方案

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2012年12月第33卷第12期 纳诺仪器nano instrument刘敏敏，等：液相色谱-串联质谱法检测火锅底料中罂粟壳-92 液相色谱-串联质谱法检测火锅底料中罂粟壳 刘敏敏，张朝正，李延志，温家欣 (广东省药品检验所，广东广州510180) 摘 要：研究建立火锅底料中非法添加罂粟壳的液相色谱-串联质谱测定法。采用水提取，乙腈和无水醋酸钠萃取罂粟壳中的生物碱分，液质联用进行检测，采用色谱柱 SHISEIDO CAPCELL PAK CR1 ：4 (5um，2.0x150mm)色谱分离，流动相为乙酸铵：乙腈(50：50)，0.5%甲酸为A相，乙腈为流动相B相。该方法的检出限为 1 ng/mL，方法定量下限吗啡为 37 ug/kg，可待因、罂粟碱、蒂巴因和那可丁为1 ug/kg，线性范围为 1 ng/m~40 ng/mL，加标回收率64.2%~101.1%。该方法测定火锅底料罂粟碱中吗啡、可待因、罂粟碱、那可丁、蒂巴因5种生物碱的含量快速、准确，适合于火锅调味料食品中罂粟壳的检测。 关键词：罂粟壳；液质联用；火锅底料 Detection of Papaveris Pericarpium Added in Hot Foods Spice with LC-MS/MS LIU Min-min， ZHANG Chao-zheng， LI Yan-zhi， WEN Jia-xin (Guangdong Institute for Drug Control，Guangzhou 510180， Guangdong， China) Abstract： To establish a detection method (LC-MS/MS) for the determination of papaveris pericarpium addedin hot foods. Samples were prepared by water， and extract by acetonitrile and Sodium acetate ，alkaloidsresidues were detected by LC-MS/MS. Chromatographic separation was carried out on a SHISEIDO CAPCELLPAK CR1：4(5 pm，2.0x150 mm， the mobile phase A was acetonitrile： ammonium acetate (50：50)， included0.1% formic acid water solution ，the mobile phase B was acetonitrile，with gradient elution. the limit ofmorphine's detection was 2.5 ng/mL and the limit of quantitation was 37 pg/kg， the others limit detection were0.1 ng/mL and the limit of quantitation was 1 pg/kg. the linear plots were obtained between 1 ng/mL-40 ng/mL.overall recoveries were between 64.2 %-101.1 %. The method was a simple， sensitive assay for the hot foodsinspection. Key words： papaveris pericarpium；LC-MS/MS； hot foods spice 火锅是我国老百姓比较喜爱的一种饮食，然而，近年来少数食品生产经营者为了招揽顾客，牟取暴利，在火锅及其调味料中添加罂粟壳及其水浸物等违禁原料，使食物味道鲜美。罂粟壳是罂粟科植物采完阿片后的干燥成熟果壳，内含吗啡 (morphine)、可待因(codeine)、罂粟碱 (papverine) 等多种生物碱"。因此添加了罂粟壳的食物易使消费者成瘾，长期食用者会对其产生依赖性。 目前，锅底料中非法添加罂粟壳的检测尚无标准检测方法。文献报道的方法主要有分光光度法、层析法、示波极谱法、高效液相色谱法、毛细管电泳和液- ( 作者简介：刘敏敏(1979 一 )，女(汉)，主管药师，硕士研究生，研究方向：药品、保健食品、食品质量与安全。 ) 质联用法等2-3。本实验采用液相色谱-串联质谱技术，建设了火锅底料中非法添加的罂粟壳中吗啡、可待因、罂粟碱、蒂巴因、那可丁等5种生物碱成分 LC-MS/MS 检测方法，方法灵敏、准确，快速，适用于火锅调味料食品中罂粟壳的检测。 1材料与试药 1.1 仪器 液质联用色谱仪：美国热电公司，型号为 QuantumAccess MAX/600 PUMP；离心机：德国Eppendorf 公司，型号为X1R；超纯水发生器：美国Millipore 公司，型号为QA；电子分析天平：德国 SARTORIUS公司，型号为CP225D。 1.2访试剂与试药 磷酸可待因(批号：171203-201005，含量：99.6%)、吗啡(批号：171201-200822，含量：99.8%)、盐酸罂粟碱((批号：171214-200404)；蒂巴因(批号：171216-200403)；那可丁(批号：171224-200403)：中国药品生物制品检定所提供；乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯。 1.3 样品 火锅底料均为2011年广东省餐饮食品监督抽检样品。 2 方法 2.1 分析条件 2.1.1 色谱条件 色谱柱为 SHISEIDO CAPCELL PAK CR1：4 (5 pum，2.0x150mm) ，50 mmol/L 乙酸铵：乙腈(50：50)，0.5%甲酸为流动相A相，乙腈为流动相B相，流速0.3mL/min；按表1进行梯度洗脱。 表1 分离生物碱的最佳梯度洗脱表 Table 1COptimal elution condition for determination of alkaloidsresidues 时间/min A相/% B相/% 0 100 0 1.5 100 0 1.8 100 0 3.5 10 90 5 10 90 5.1 100 0 8 100 0 2.1.22质谱条件 以三重四极杆质谱仪作为检测器，电化学喷雾离子源，采集模式为正离子模式，质谱条件如下：喷雾电压：5500.0V；鞘气压力：525kPa；辅助气：6L/min；反吹气：0.6L/min。各化合物质谱参数见表2，总离子流见图1. 表2质谱参数表 Table 2 Parameter of Mass spectra of alkaloids residues 名称 去簇电压 定量离子对 碰撞能量 定性离 碰撞能量 (DP)/V (CE) /V 子对 (CE) /V 吗啡 65 286.0/165.3 37 286.0/181.3 37 可待因 60 300.0/152.0 62 300.0/155.0 31 300.0/164.9 36 300.0/214.9 23 蒂巴因 60 312.0/58.3 15 312.0/249.1 15 罂粟碱 65 340.0/202.2 25 340.0/171.1 33 那可丁 60 414.0/220.5 22 414.0/353.3 22 2.2 标准品溶液的制备 2.2.1 空白基质溶液 分别称取与待测样品基质相同的、不含所测成分 试样，按供试品溶液制备方法依法操作，制备空白基质溶液。 A.那可丁；B.罂粟碱；C.蒂巴因；D.可待因；E.吗啡。 图155种生物碱标准品的提取离子流谱图 Fig.1Extraction spectrum of five alkaloids residues 2.2.2 标准储备溶液 分别精密称取吗啡、可待因、罂粟碱、蒂巴因和那可丁标准品适量，用0.5%甲酸的甲醇溶液配制成1 mg/mL 的溶液，作为标准储备液。 2.3 样品的前处理 称取2g试样，于50 mL 聚四氟乙烯具塞离心管中，加入5 mL水，涡旋 1 min，再加入 15 mL 乙腈，涡旋1 min。超声提取 20 min 后，加入1.5g无水醋酸钠，再加入6g无水硫酸镁，涡旋1min，以 4000 r/min 的转速离心1 min，取出后待净化。称取 50 mgPSA，150 mg 无水硫酸镁置于2 mL 聚四氟乙烯具塞离心管中，用1mL微量移液器将上述上清液 1 mL移入此离心管中，涡旋 混合器涡旋 1 min，以5000 r/min 的转速离心1 min，移取上清液 0.5 mL于2mL离心管中，加入20 mmol/L乙酸铵溶液 0.5 mL，混匀，过 0.45 pm 微孔滤膜待测。 3结果 3.1线性范围 分别准确吸取上述标准储备液1.00 mL于 100 mL容量瓶中，用稀释溶剂(取空白基质溶液：20 mmol/L乙酸铵=50：50比例配制成稀释溶剂)定容至刻度。再准确吸取该溶液1.00 mL于200mL 容量瓶中，用稀释溶剂定容至刻度，制成标准使用液。分别准确吸取上述溶液1.00、1.00、1.00、1.00、2.00、4.00 mL于 50、20、10、5、5、5mL容量瓶中，用稀释溶剂稀释至刻度，制成浓度分别为1，2.5，5，10，20，40 ng mL溶液，作标准曲线，结果见表3。结果表明，5种物质在1 ng/mL~40 ng/mL范围内线性良好，相关系数均达 0.999。 表35种生物碱标准曲线 Table 3 the linear of alkaloids residues 名称 回归方程 线性范围/(ng/mI) 相关系数 吗啡 Y=2 676.8+16 134X 2.507 5~40.119 6 r= 0.999 0 可待因 Y = -7 773.5+23839X 1.002 0~40.0800 r= 0.999 9 罂粟碱 Y=65387+272 199X 0.996 0~39.8400 r=0.999 9 蒂巴因 Y=8 438.12+82 633X 1.0080~40.3200 r=1.0000 那可丁 Y=61764+236822X 1.017 0~40.6800 r= 0.998 9 3.2 检测限 以基线3倍噪声值计算方法检测限，测得可待因、罂粟碱、那可丁、蒂巴因的检出限为 0.1 ng/mL，吗啡的检测限为 2.5 ng/mL，按测定方法计算，本方法可待因、罂粟碱、那可丁、蒂巴因的检测限为 1 pg/kg；吗啡的检测限为37 pg/kg。 3.3 精密度试验 取浓度为 5 ng/mL 的基质标准溶液，连续进样6次，记录峰面积，结果表明，吗啡、可待因、罂粟碱、那可丁、蒂巴因6次进样峰面积的 RSD 值在0.8%~2.3%范围内，精密度良好。 3.4 加样回收率试验 取样品2g，分别加入不同浓度水平的标准品适量，照样品处理项下方法依法操作，计算回收率及相应RSD 值，结果见表4。结果表明，本方法回收率试验结果良好。 3.5 方法应用 应用本方法对2011年广东省餐饮食品监督抽检抽得的200批的火锅底料进行检测，共有5批样品检出多种罂粟壳类生物碱成分，添加了罂粟壳的火锅底 表4 回收率实验 (n=6) Table 4 Recovery of alkaloids residues (n=6) 成分 低浓度 高浓度 平均回收率/% RSD/% 平均回收率/% RSD/% 吗啡 59.0 0.1 64.2 1.0 可待因 76.3 1.3 68.1 1.5 罂粟碱 96.9 1.6 94.0 2.3 那可丁 102.8 1.6 101.1 0.8 蒂巴因 60.7 4.0 72.0 4.2 料占2.5%，结果见表5。 表5部分样品检出结果 Table5 Result of some samplesug/kg 序号 吗啡 可待因 罂粟碱 那可丁 蒂巴因 1 160.56 74.38 985.10 271.33 14.78 2 N.D. N.D. 160.54 47.18 N.D. 3 208.77 138.18 592.99 117.50 1.97 4 198.11 N.D. 5 N.D. 12.04 注：N.D.表示未检出。 4 讨论 1)火锅底料中罂粟壳的检测，现在尚无标准，有文献报道，可以参考农残检测的 QuECHERS 法进行提取。实际应用过程中发现该方法回收率低，吗啡的回收率仅为32.5%。生物碱在火锅底料中以盐的形式存在，本方法用水将火锅底料中罂粟壳中的生物碱提取出来，再用乙腈萃取，加无水醋酸钠促进生物碱由水相转移至有机相，最后用无水硫酸镁出去水相。实验表明，本方法大大提高了生物碱尤其是吗啡的回收率，满足了实验所需。 2)吗啡等生物碱为强极性化合物，有文献报道，用Cig柱进行色谱分离。笔者在实验中发现，吗啡等生物碱在 Cis柱上基本不保留，无法进行色谱分离。笔者也曾尝试采用文献报道的 ACQUITY UPLC BEH HILIC色谱柱4，这款正相柱具有重现性差，保留时间飘移严重，难以预平衡等特点，难以在基层实验室推广应用。本方法选择了强阳离子交换与反相 Cis 混合填料，混合比例(1：4)的色谱柱，该柱子克服了原方法的缺点，重现性好，保留时间稳定，容易平衡等特点，能有效分离吗啡等强极性的化合物。 ( 参考文献： ) ( [1]廖文娟，张虹， 任 一平.液相色谱-串联四级杆质谱法测定罂粟壳 主 要成分在止咳药中的含量J.分析化学，2006，34(8)：1175-1178 ) ( [2 ] 汪芳芳，亮，曾爱明，等.食品中罂粟壳残留检测的研究现状[J]. ) β-环糊精增敏动力学光度法测定痕量硒 赵桦萍l，靳凤丹，肖忠峰 (1.齐齐哈尔大学化学与化工学院，黑龙江齐齐哈尔 161006；2.燕山大学环境与化学工程学院，河北秦皇岛066004；3.滨州学院化学与化工系，山东滨州256603) 摘 要：基于在硝酸介质中，β-环糊精对硒催化溴酸钾氧化罗丹明B的褪色反应具有增敏作用，建立了测定硒的催化动力学光度法，灵敏度较不加~环糊精的方法提高了2.5倍。测定硒的线性范围：0~40 u.g/L，检出限为 0.381 u.g/L，加标回收率为98.87%，6次测定的 RSD 小于5%。用于富硒大米中硒的测定，结果令人满意。 关键词：动力学光度法；β-环糊精；硒 Kinetic Spectrophotometric Determination of Trace Selenium with B-Cd as Sensitizer ZHAO Hua-ping'，JIN Feng-dan丫，XIAO Zhong-feng (1.College of Chemistry and Chemical Engineering， Qiqihar University， Qiqihar 161006，Heilongjiang， China；2.College of Environmental and Chemical Engineering，Yanshan University，Qinhuangdao 066004，Hebei，China；3.Department of Chemistry and Chemical Engineering， Binzhou University， Binzhou 256603， Shandong， China) Abstract： A catalytic kinetic photometric method for determination of trace selenium(1V) with β-CD as sensiti-zer has been developed.The method is based on the fact that the color fading reaction of rhodamine B oxidizedby potassium bromate in dilute HNO3 solution is catalyzed by selenium (1V). The addition of β-CD increasesthe sensitivity of selenium by a factor of 2.5.The linear range for determination of selenium is 0-40 pg/L withdetec- tion limit of 0.381 ug/L.The recovery of standard addition is 98.87 % with precision of<5% RSD (n=6).The method has been applied to the determination of trace selenium (1V) in selenium rice with satisfactory re-sults. Key words： Catalytic Photometry；B-CD；selenium 硒是人体必需的微量元素，被称之为人体微量元素中的“防癌之王”。科学研究发现，血硒水平的高低与癌的发生息息相关。由于“硒”具有高抗氧化作用，人体适量补充硒能起到防止器官老化与病变，延缓衰老，增强免疫，抵御疾病，抵抗有毒害重金属的作用。缺硒是克山病、大骨节病的主要病因。“硒”是人体必 ( 作者简介：赵桦萍(1966 一 )，女(汉)，教授，硕士，研究方向：光度分析。 ) ( 现代商贸工业，2009(3)：279-280 ) ( [3] 张靖.食品中罂粟碱、吗啡、可待因含量的液相色谱法研究[].中 国卫生检验杂志，2007，17(1)：72-73 ) ( [4] 王柯，郑荣，简龙海，等.火锅调料中5种生物碱成分的液相色谱- ) 需的，又不能自制，因此世界卫生组织建议每天补充200 ug硒可有效预防多种疾病的高发。 随着科学技术的发展和人类生活水平的提高，人们越来越重视硒与人类生活的关系，硒的分析也引起人们的关注。测定硒的含量有很多种方法，其中催化动力学光度法因具有仪器普及、操作简便、灵敏度高等特点而日益受到关注，这方面的研究工作近年来有较多的文献报道1-3，但以β-环糊精作为增敏剂催化动 ( 串联质谱测定法[J].中国卫生检验杂志，2011，21(2)：363-365 ) ( [5 ] 刘艳琴，王浩，杨红梅，等.液相色谱-质谱联用技术测定食品中罂 粟碱残留[J].食品研究与开发，2010.31(7)：130-132 ) ( 收稿日期：2012-04-14 ) ◎China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http：//www.cnki.net