化学药中主要物质含量检测方案

智能文字提取功能测试中

「应用纪要THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. 「应用纪要] Waters 应用ACQUITY UPLC /Xevo G2-S QTof系统测定盐酸美金刚片中N-(二甲基金刚烷)甘氨酸(DMAG)的含量 王志英 应用优势 ■使用亚2um的色谱柱，分析时间由30 min缩短至5 min，提高分析效率。 ■Xevo@ G2-S QTof可用来定量测定，其灵敏度高，柱上样量1 pg也可被定量检测；重现性好，三针重现性%RSD=0.47%；线性好，浓度在1~5000ng/mL浓度范围内，线性方程系数R=0.9994。 MassLynx@/TargetLynxM软件应用简便，自动计算线性及样品中含量。 沃特世解决方案 ACQUITY UPLCBXevo G2-S QTof质谱仪 MassLynx、 TargetLynx软件 BEHC，(100x2.1 mm，1.7 pm)色谱柱 关键词 UPLC、QTof、杂质鉴定、MassLynx、 TargetLynx、 盐酸美金刚、Memantine hydrochloride、 N-(二甲基金刚烷)甘氨酸、DMAG 前言 盐酸美金刚(Memantine hydrochloride)为抗老年痴呆药物，是第一个对老年痴呆症有显著疗效的N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)拮抗药，它可以改善记忆过程所需谷氨酸的传递，并具有较好的耐受性。它是美国联邦食品和药品管理局(FDA)批准治疗中度与重度老年痴呆症的第一种药物。 N-(二甲基金刚烷)甘氨酸(DMAG)是盐酸美金刚片中已知的杂质之一，在国家局发布的进口药品注册标准(JX20120025)中规定其含量不得到过0.5%。 DMAG本身无紫外吸收，进口药品注册标准中采用加内标的质谱方法检测，检测时间需30 min， 本应用纪要直接采用外标法进行N-(二甲基金刚烷)甘氨酸的检测。 Xevo G2-S QTof可得到最准确的分子量，具有卓越的定性性能，同时它也有优良的定量能力。本方案应用Xevo G2-SQTof的定量能力来检测盐酸美金刚片中N-(二甲基金刚烷)甘氨酸的含量。利于Xevo G2-S QTof的定量方式为：对样品进行全扫描(full scan)， 再从得到的数据中提取关注的分子量进行处理计算。这种定量检测方式有几个好处，一是全扫描的数据可得到样品最全面的信息，让我们对样品更了解；二是更有利于开发方法，很方便就看出是否有共流出干扰，保证方法的稳定性和可靠性；三是一次可以对无数个化合物进行定量检测；四是若事后出现事故调查时，可从已有数据中得到更多信息。 实验条件 LC/UPLC条件 LC系统： ACQUITY UPLC 色谱柱： BEHC，100x2.1 mm， 1.7 pm (Part No.： 186002352) 柱温： 40C 进样量： 3pL 流速： 0.3mL/min 流动相A： 0.1%FA in H，0 流动相B： 0.1%FA in MeOH 梯度： Time Flow %A %B Curve 0 0.300 70.0 30.0 6 1.04 0.300 40.0 60.0 6 1.55 0.300 40.0 60.0 6 2.00 0.300 20.0 80.0 6 3.30 0.300 20.0 80.0 6 5.00 0.300 70.0 30.0 1 MS条件 MS系统： Xevo G2-SQTof 离子化模式： ESI+ 毛细管电压： 1.0 KV 源温度： 80℃ 雾化气温度： 250C 雾化气流速： 500L/h 锥孔气流速： 50L/h 采集模式： Scan PDA检测器 紫外检测波长：293nm 软件MassLynx、TargetLynx 样品制备：取盐酸美金刚片1片，精密加甲醇-水(50：50)1mL，涡漩2次，每次5秒，两次间隔1 min， 确保样品完全崩解后，经0.22 um微孔滤膜滤过，精密量取续滤液10uL， 置1.5mL进并瓶中，精密加入甲醇-水(50：50)990uL，混匀，即得。对照溶液的配制：分别配置包含相同浓度的盐酸美金刚和N-(二甲基金刚烷)甘氨酸对照品混合溶液，稀释剂为甲醇-水(50：50)，1到10号对照品溶液浓度如表1。 表1.1~10号对照品溶液中含有盐酸美金刚和N-(二甲基金刚烷)甘氨酸的浓度 对照品 溶液 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 编号 浓度ng/mL 5000 2500 1000 500 250 100 50 25 10 1 结果与讨论 进口药品注册标准中采集的方法时间较长，为30 min一针，改用1.7um的BEHC。100x2.1 mm色谱柱，应用HPLC到UPLC的方法转换器将方法进行同步转换，采集时间可缩短至5 min。并且将流动相中的三氟乙酸改为甲酸的溶液。DMAG和盐酸美金刚分离度良好，如图1。 图1.对照品溶液3的质谱总离子流图、DMAG的提取离子流图、美金刚的提取离子流图。 灵敏度测试：对照品10号溶液，即DMAG的含量为1 ng/mL， 进3uL时， S/N(PtP)=41.7；当进样量改为1uL时， S/N(PtP)=10.9，此时柱上样量为1 pg， 此浓度可作为定量限，如图2。 图2.DMAG的提取离子流图：对照品10号溶液进3u、对照品10号溶液进1uL。 重现性：进9号对照品溶液，即DMAG浓度为10 ng/mL，重复进样三次， %RSD=0.47。TargetLynx可自动进行质量数提取、峰面积积分并计算，如图3。 图3.TargetLynx软件对9号对照品溶液连续进三针所得DMAG自动计算%RSD。 线性：采用进口注册标准中y=ax²+bx+c方式做回归曲线。所得结果如图4.应用软件自动计算线性，得到的线性方程为y=-0.000919094X2+15.9004X-1.93231； r=0.9994； TargetLynx界面简洁，可从结果列表中快速读取线性方程信息及供试品中DMAG的含量。供试品盐酸美金刚中含有6.1 ng/mL的N-(二甲基金刚烷)甘氨酸。 图4. TargetLynx软件自动线归回归，自动计算出样品中含量。 结论 本实验将常规HPLC色谱柱检测方法平行转化为亚2um的UPLC色谱柱检测，分析时间由30min缩短短5 min， 大大提高分析效率。Xevo G2-S QTof一方面可得到最准确的分子量化于化合物的定性，同时在定量方面也表表突出。具有较高的灵敏度， N-(二甲基金刚烷)甘氨酸柱上样量1pg可被定量检测；具有良好的重现性，三针重现性%RSD=0.47%(10ng/mL)；较宽的线性范围，浓度在1~5000 ng/mL浓度范围内，线性方程系数R=0.9994。软件MassLynx/TargetLynx应用简便，自动进行线性回归并计算样品中含量。所以说ACQUITY UPLC/Xevo G2-SQTof系统在定性和定量方面都表现出色，完全可以满足药物研发、分析过程中需求。 Waters THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. Waters， Xevo， MassLynx， ACQUITY UPLC， UPLC和The Science of What’s Possible是沃特世公司的注册商标。 成都：028-65784990 TargetLynx是沃特世公司的商标。其它所有商标均归各自的拥有者所有。 香港：852-29641800 免费售后服务热线：800(400)8202676WWW.Waters.com 酸美金刚片中N-(甲基金刚烷)甘氨酸 (DMAG)的测定 酸美金刚片中N-(甲基金刚烷)甘氨酸(DMAG)的测定