维生素B1中主要成分含量检测方案(液相色谱仪)

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天津市兰博实验仪器设备有限公司Lanbo Instrument Tianjin Co.， Ltd 高效液相色谱柱后衍生法测定维生素B1 维生素B1又称硫胺素，是人体生长和发育所必需的营养物质，在食品和保健品中广泛应用，因此如何快速准确的测定就显得非常重要。维生素B1经氧化后，与铁氰化钾在碱性条件下可以生成有荧光的物质。本方法以此为依据，建立了高效液相色谱-柱后衍生法测定维生素B1。 1材料和方法 1.1试剂 维生素B1标准品，购自 Sigma 公司；无水醋酸钠，冰醋酸，铁氰化钾，氢氧化钾，水为屈臣氏蒸馏水，甲醇为色谱纯。 0.05 mol/L 醋酸钠溶液(pH=4.5)：称取醋酸钠4.10g加水溶解，并用冰乙酸调节pH=4.5，然后稀释至1000 ml； 0.25 g/L 碱性铁氰化钾溶液(吸取10 g/L 铁氰化钾溶液5 ml 用 100 g/L 的氢氧化钾溶液稀释至500ml)。 1.2仪器 分析型高效液相色谱仪(HPLC)， 由 AS3000 自动进样器， Lablliance Series 高压泵，天津兰博第三代 PCR3柱后衍生装置，Varian9075 荧光检测器和 Lablliance 色谱工作站组成，配一支 Kromasil C18 色谱柱(4.6x250 mm， 5 um)； AXM-8Temp.柱温箱 1.3色谱条件 色谱谱： Kromasil C18色谱柱(4.6x250 mm， 5 um)， 天津兰博实验仪器有限公司； 流动相： 0.05 mol/L 醋酸钠溶液(pH=4.5)/甲醇=95/5； 流速：1.0m1/min： 柱温：室温； 进样量：10ul； 衍生剂：0.25g/L碱性铁氰化钾溶液； 流速：0.3 ml/min； 衍生温度：室温； 检测波长：激发波长375 nm， 发射波长435nm。 2试验结果 2.1流动相的选择 根据维生素B1的性质，优化流动相配比，选择0.05 mol/L 醋酸钠溶液 (pH=4.5) /甲醇=95/5为流动相，标准品色谱图1所示。 ( 公司地址：天津市华苑新技术产业园区榕苑路4号天发科技园7号楼1门2层8层 ) 电话：022-23592982 传 真：022-23592987 图1维生素B1标准品的高效液相色谱图 2.2线性关系考察 精确称取 0.0500g的维生素B1标准品，用蒸馏水溶解并定容至100 ml，放于冰箱中备用。测定时将储备液稀释至浓度为 10.0 ug/ml，过 0.45um滤膜，配制标准系列浓度为0.01、0.05、0.10、0.20、1.0、10.0 ug/ml. 结果表明在0.01到10.0 ug/ml浓度范围内，以进样浓度为横坐标，出峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得到线性回归方程Y=7.46×10X， r=0.9998，维生素B1有良好的线性关系。 2.3重现性考察 精密吸取浓度为 0.05 ug/ml 标准品溶液 10 uL， 进高效液相色谱仪测定，重复进样5次，，记录峰面积，计算峰面积标准偏差，得维生素 B1 的RSD=1.8%。 3结论 本方法具有方便、准确、灵敏度高、精密度好等优点，且线性范围宽，重现性好，可以满足日常分析需要。 ( 公司地址：天津市华苑新技术产业园区榕苑路4号天发科技园7号楼1门2层8层 电 话：022-23592982 传 ) ( 真：022-23592987 )