使用UPC2MSMS对蛋白沉淀血浆中的极性化合物直接进样

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[技术简报] 使用UPC²/MS/MS对蛋白沉淀血浆中的极性化合物直接进样 Waters Jennifer L. Simeone and Paul D. Rainville AcquityiuPC? 对蛋白沉淀血浆中的强极性化合物直接进样分离，以进行生物分析。 背景 大多数生物分析方法都采用蛋白质沉淀(PPT)提取法，这是因为该技术简单、快速且成本较低。典型的PPT使用3：1的有机溶剂与生物样品，可得到大约75%的有机提取物。传统上，通常会采用反相液相色谱(RPLC)分析样品。 对于强极性化合物而言，由于强溶剂作用产生的色谱峰形较差，最为明显的是出现峰前伸和/或谱峰分叉，因此不能直接将高浓度有机提取物注入RPLC系统。因此，在向色谱系统进样之前需要进行额外的样品处理，包括蒸发和复溶或用水稀释。 图1.在反相模式下运行的UPLC@中，咖啡因PPT提取物通过(a)1uL进样、(b)3pL进样获得的示例色谱图，以及在ACQUITY UPC系统中，相同咖啡因PPT提取物的(C)7uL进样示例色谱图。 Waters UltraPerformance Convergence ChromatographyIM(UPC2@)使用超临界二氧化碳作为主要流动相，其保留机制与RPLC不同，可直接进样高度有机提取物。 在本示例中，通过PPT提取法使用乙腈以3：1的比率从大鼠血浆中提取了四种极性较强的化合物，直接进样至ACQUITY UPC2TM系统中，并使用传统RPLC系统作为对比。UPC?分析在ACQUITYUPC?BEH色谱柱上进行，采用经氢氧化铵改性的甲醇作为共溶剂(流动相B)。RPLC分析在配备ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱的ACQUITY UPLC系统上进行，采用水和经氢氧化铵改性的乙腈作为流动相。 图1将含咖啡因的PPT提取物在ACQUITY UPLC系统中的1pL直接进样和3pL直接进样与在ACQUITYUPC 系统中的7uL进样进行了对比。RPLC中的1pL进样显示出良好的峰形，但在3pL进样体积下峰形发生变形，可以观察到前伸峰和谱峰分叉。而采用UPC进行的7uL进样依然表现出良好的峰形。 以相同方式测试的其它极性分子也观察到类似的结果(表1)。表1还显示了使用RPLC和UPC时，在PPT提取物中测试的所有分析物的最大进样体积。 咖啡因 雷尼替丁 氟康唑 醋胺酚 UPLC 1 pL NA 3uL NA UPC- 7uL 10 uL 5uL 7uL 表1.针对UPLC和UPC²确定的最大进样体积。NA=峰形不足以在1pL下进行积分。 这些数据明确证实了使用ACQUITY UPC系统分析高度有机提取物中极性化合物的优势，并且不必像RPLC系统那样在进样前需要进行额外的样品制备，从而简化了工作流程。 总结 ( 通过从标准RPLC到UPC改变MS入口技术，无需蒸发和复溶等额外样品制备步骤，便可以直接在ACQUITY UPC系统中注入溶于高度有机样品 中的极性化合物。为生物分析实验室增添UPC?可以简化高度有机样品制剂中极性化合物的分析。 ) 沃特世科技(上海)有限公司 北京：010-52093866 上海：021-61562666 广州：020-2829 6555 成都：028-65545999 沃特斯中国有限公司香港：852-2964 1800 免费售后服务热线：800(400)8202676www.waters.com THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. C特世公司中国印刷H TC-PDF