肉制品中农兽药残留检测方案

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2标准溶液的制备 4 气相色谱-质谱法测定动物源性食品中的氯羟吡啶残留 吕建霞余翀天赛默飞世尔科技(中国)有限公司 关键词 单四级杆质谱仪；兽药；碱性氧化铝小柱； TG-5MS色谱柱 目标 建立高效的气相色谱质谱检测方法，灵敏、快速测定动物源性食品中的氯羟吡啶的残留量样品中的氯羟吡啶用乙腈提取，经碱性氧化铝小柱净化，衍生后气质联用仪分析方法检出限远远低于食品安全国家标准中规定的氯羟吡啶最大残留限量10ug/kg 引言 氯羟吡啶(3，5-二氯-2，6-二甲基-4-羟基吡啶)，其商品名为克球粉(coyden)，是一种预防鸡球虫病的饲料药物添加剂，氯羟吡啶对9种鸡艾美耳球虫的防治均有良好效果且价格便宜，因此在畜禽生产中应用广泛，但长期使用或不按照规定使用将会造成氯羟吡啶在动物性食品中残留。有研究显示氯羟吡啶具有一定的致畸性和胚胎毒副作用“，现在，欧盟已全面禁止氯羟吡啶在动物性食品生产中使用，日本也禁止氯羟吡啶用于家禽。我国规定氯羟吡啶在鸡肉中的残留限量为 10ug/kg2，牛奶中为 20pg/kg。 目前，有关动物组织中氯羟吡啶残留的检测方法报道较多，主要有气相色谱法4、高效液相色谱法15-8、气相色谱质谱法19-10)、液相色谱串联质谱法"'等。本研究建立了一种简单、灵敏、可靠的检测动物源性食品中氯羟吡啶残留量的方法。方法检出限为 5pg/kg， 远远低于我国对鸡肉和牛奶中氯羟吡啶的限量要求。 储备液：准确称取10.0mg 氯羟吡啶标准品，用甲醇溶解稀释并定容至 100mL， 得到 100mg/L标准储备液，储存在冰箱中备用。 标准中间液：准确移取氯羟吡啶储备液1mL，用甲醇稀释定容至10mL， 得浓度为10mg/L的标准中间液。 样品前处理 鸡肉样品：称取2.0g于50mL离心管中，加入乙腈10mL，于漩涡混匀器上振荡1 min，再加入氯化钠1.0g，继续振荡1 min。于10000 rpm离心10 min， 取上清液2.5mL待净化。碱性氧化铝小柱(2g，6mL)上层填入1.0g无水硫酸钠，先用5mL甲醇、5mL乙腈活化，然后加入待净化的样品，再用10mL甲醇洗脱，用试管接收甲醇洗脱液，将洗脱液在55℃下氮气吹干。待衍生。 牛奶样品：称取样品 1.0g于 50mL离心管中，加入乙腈5mL，于漩涡混匀器上振荡1 min， 再加入氯化钠1.0g，继续振荡1 min。于10000rpm 离心10 min， 取上清液2.5mL待净化。碱性氧化铝小柱(2g，6mL)上层填入1.0g无水硫酸钠，先用5mL甲醇、5mL乙腈活化，然后加入待净化的样品，再用10mL乙腈淋洗小柱，待自然流下近干后用 10mL 甲醇洗脱，用试管接收甲醇洗脱液，将洗脱液在55℃下氮气吹干。待衍生。 衍生：在上述试管中加入100pL甲苯溶解残渣，再加入100pL衍生试剂，密封后于80℃衍生60min， 冷却后加入800pL甲苯，混匀后过 0.22pm 滤膜， 待 GCMS分析。 ( 色谱柱： T G -5MS(30mx0.25 mmx0.25pm)； ) ( 柱温：90℃(1min)， 3 0℃ /min 到200℃， 5 ℃ /min到 205℃ (1min) ， 30℃ /min 到 280 ℃ (10min)； ) 进样模式：不分流进样，不分流时间为1min；进样量：2pL； 进样口温度：250℃； 载气：氦气(99.999%)，恒流模式， 1 mL/min； 质谱离子源温度：300℃，传输线温度：300℃； 扫描模式：选择离子监测模式， m/z=248，263，212，214，定量离子为248 前处理条件的优化：采用乙腈为提取溶剂，提取效率较高，加入氯化钠使乙腈与水分层，避免水对后续分析的影响。用碱性氧化铝小柱净化时，用甲醇洗脱氯羟吡啶，，可得到满意的回收率。 仪器分析方法优化：以全扫描的方式对氯羟吡啶三甲基硅醚衍生物进行测定，得到其质谱图(图1)。根据其全扫描质谱图和保留时间，选择氯羟吡啶衍生物的定性和定量的特征目标监测离子。测定时，可根据标准物和待测物的定量离子流图中的峰面积，外标法定量。确证时，可根据碎片离子及其丰度比作为其阳性判别的依据。在选定的色谱条件下，标准品衍生后得到产物的色谱图见图2。 线性关系及测定低限：准确移取氯羟吡啶标准溶液适量，氮气吹干后按上述所述步骤进行衍生，得到浓度为0、2.5、5、10、20、50 ug/L的一系列标准工作液，供气相色谱质 谱测定。以测定峰面积为纵坐标，对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线如图3。方法检出限以3倍信噪比计算得到，本方法的测定低限为5ug/kg。 图3.氯羟吡啶三甲基硅醚的线性情况 回收率及精密度实验：用标准添加法，在空白样品中，添加氯羟吡啶标准溶液，做加标回收实验，按规定方法进行提取、净化和测定，添加浓度为 5pg/kg、20pg/kg 和 100ug/kg三个水平，各做3个平行，空白样品、添加谱图见图4，结果见表1。 图4a.牛奶样品空白和样品加标谱图(黑色为标准溶液衍生产物谱图，蓝色为样品空白，紫色为样品加标) 4.8e6 图4b.鸡肉样品空白和样品加标谱图(黑色为标准溶液衍生产物谱图，蓝色为样品空白，紫色为样品加标) 表1a.空白牛奶样品添加实验回收率和精密度 添加水平 (pg/kg) 5.0 20.0 100.0 1 2.8 17.58 72.1 2 3.2 18.46 74.4 3 3.6 15.79 73.2 4 3.1 17.54 74.6 5 2.7 17.14 72.6 平均值 3.08 17.30 73.38 RSD(%) 11.57 5.62 1.49 平均回收率(%) 61.60 86.51 73.38 表1b.空白鸡肉样品添加实验回收率和精密度 添加水平(ug/kg) 5.0 20.0 100.0 1 4.22 19.18 99.34 2 4.56 21.14 97.45 3 4.37 20.65 102.21 平均值 4.38 20.32 99.67 RSD(%) 3.89 5.02 2.40 平均回收率(%) 87.67 101.62 99.67 动物源性样品中的氯羟吡啶用乙腈提取后，碱性氧化铝小柱净化后，经过衍生，采用赛默飞世尔新型的气相色谱质谱仪检测和确证，外标法定量。结果表明，方法的平均回收率为61.60-101.62%，3次平行测定的RSD 值≤11.57%，方法测定低限为 5pg/kg。此法操作简单，科学准确，灵敏度高，能够满足动物源性食品中氯羟吡啶的残留分析要求。 ( [1]姜中其，包鸿俊，史晓丽.氯羟吡啶的特殊毒性-致畸 作用.中国兽医学报，1999，19(4)： 390-392 ) ( [2]庄天忌.各国食品和饲料中农药兽药残留限量大全.北 京：中国对外经济贸易出版社，1995：983 ) ( [3] 农业部畜牧兽医局.农业部发布动物性食品中兽药最高残留限量：续.中国兽药杂志，2003，37(3)：5-11 ) ( [4] Suzuki E， Matsuda M， Momose A， et al. Improved method for gas ) ( chromatographic determination of clopidol i n chicken t i ssues. JAssoc of Anal Chem， 1980，63： 1 211-1214 ) ( [5]王惠，甘一茹.液相色谱-库伦阵列电化学法检测鸡肝 中氯羟吡啶残留.安徽农业科学，2007，35(15)： 4410-4411 ) ( [6]应永飞，皮雄娥，林仙军.高效液相色谱法测定兔肉中 氯羟吡啶.理化检验-化学分册，2007，43(2)：741-742 ) ( [7]沈建忠，肖喜龙，朱蓓蕾，等.氯羟吡啶在鸡组织中的 残留研究.畜牧兽医学报，1997，28(3)：238-244 ) ( [8]皮雄娥，应永飞，费迪波，等.鸡肉中氯羟吡啶的高效 液相色谱法测定.浙江农业学报，2005，17(4)：200-202 ) ( [9]张睿，段红安.禽肉中氯羟吡啶残留量的 GC/MS测定法 中国兽药杂志，2002，38：39-41 ) ( [10]刘祥国，苏怡娟，方炳虎等.气相色谱质谱法测定鸡肉 组织中残留的氯羟吡啶.色谱，2009，27(1)：86-90 ) ( [11]Macneil JD. Committee on drugs an d related topics-drug residues i n animal t issues. Journal of AOAC International， 2003， 8 6(1)： 116-127 ) S CIENTIFIC 免费服务热线：支持手机用户)AN_C_GCMS-