果蔬中除害剂检测方案(气质联用仪)

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方法包简介 三.化合物简介 香港《食物内除害剂残余规例》的整体解决方案以及方法包介绍 100% 赛默飞世尔科技 三重四极杆串接气质 目录 一.方法包简介 4 二.仪仪器简介 5 三.化合物简介 6 儿.m相关政策及法规 11 五.样样品前处理方法 12 六.仪器和设备 13 七.方法包使用简介 14 八.应用文章 18 方法包是赛默飞世尔科技色谱质谱部应用部门针对客户需求提出的简易仪器使用流程，方法包内所涉及的化合物均为常见的能在 GC/MS 上检测的化合物，如农药残留、多环芳烃、多氯联苯、多溴联苯和多溴联苯醚、邻苯二甲酸酯等。方法包的作用就是能使客户更快更简便得使用仪器，尽快上手。 方法包包括进样方法，数据处理方法(TraceFinder 方法文件夹)，相关应用文章，相关标准，色谱柱信息，前处理方法，数据文件等，客户可以直接调用进样方法和数据处理方法完成化合物的定性定量分析。 由于 Thermo ScientificM TSQ 8000 Evo 采用 T-SRM 进样方法而不是分时间段的扫描方法，原来的进样的方法可以直接调用，即使保留时间会有微小的偏差，也不会影响最终的结果。另外， TraceFinder 软件自带的数据库可以直接编辑数据处理方法，数据库里包括化合物的名称、离子对、碰撞能量、定量离子、定性离子、CAS号等信息。同时， TraceFinder 软件可以根据数据处理方法自动关联生成 TSQ 8000 Evo 的方法文件。这样应用 TraceFinder 就可以直接生成数据处理方法和部分进样方法。整个过程都是自动化的，几乎不需要操作者手动输入任何操作信息。 方法包(Method Kit) 二.仪器简介 TSQ18000 Evo 三重四极杆串接气质联用仪 秉承着在气相色谱三重四极杆质谱中技术的一贯领先优势， Thermo Fisher Scientific 在推出 TSQ 8000 之后再次创新，推出了更新的一款气相串接质谱仪 TSQ 8000 Evo， 该款高效的 GC/MS/MS 提供了永不停机的生产率，其出色的灵敏度，超快的扫描速度，简便的 MSMS功能，满足最苛刻的定量定性分析要求，为食品安全、环境分析、法医和制药应用分析提供基础。 TSQ 8000 Evo 主要特点： ·AutoSRM 功能自动优化二级离子对信息； ·定时保留时间 SRM 功能 (T-SRM)和定时保留时间 SIM 功能(T-SIM)使高通量检测成为可能，并且优化方法设置参数，无需分配时间段； 。最新的 TraceFinder 软件，提供最新的技术平台，界面友好的色谱分析软件，可以直接调用数据库信息自动建立数据处理方法及进样方法； ·高达800 MRM/s 的扫描速度，即使在极限高速扫描条件下仍不会过多损失灵敏度； ·在质谱不泄真空的情况下，更换整个离子源，，节省常规系统维护时间，简化操作； ·双灯丝设计，并且灯丝在同一侧； ·离子源上具有双加热区，有效去除基质对离子源的污染，节省维护时间； ·弯曲的预四极杆，有效去除中性噪音，减少背景并提高灵敏度。 香港《食物内除害剂残余》规例(Hong Kong Pesticide Residues in Food Regulation ) 包含360种除害剂以及超过7000个“除害剂-食物”组合的最高残留限量/最高再残留限量标准。除害剂，又称农药，一般用于杀死或控制有害昆虫、植物、真菌或其他有害生物的物质，也包括一些生长调节剂等。食物中由于使用了除害剂，或者在饲料中混有除害剂，又或者本身环境中存在的除害剂都有可能迁移到食物中，从而需要对这些有害的物质进行检测。 香港规例中所包含的除害剂，用 GC/MS/MS 和 LC/MS/MS可以检测其中95%以上的化合物，而赛默世世尔科技已经可以提供一个综合GC/MS/MS 和LC/MS/MS 的整体解决方案。 下图是在 GC/MS/MS 上完成的化合物信息列表。 序号 英文名 中文名 CAS号 分子式 1 Acephate 乙酰甲胺磷 30560-19-1 CAH10NO，PS 2 Acibenzolar-S-methyl 甲噻活素 135158-54-2 CgH，NOS， 3 Alachlor 甲草胺 15972-60-8 C4HCINO， 4 Aldrin 艾氏剂 309-00-2 C2HgC6 5 Amitraz 双甲眯 33089-61-1 C9H23N： 6 Azoxystrobin 嘧菌酯 131860-33-8 C22H7N，05 7 Benalaxyl 苯霜灵 71626-11-4 C20H23NO3 8 Benfluralin 氟草胺 1861-40-1 C13H16FN，O 9 BHC， Alpha α-六六六 319-84-6 C6H6C6 10 BHC， Beta 3-六六六 319-85-7 C6HeC6 11 BHC， delta 8-六六六 319-86-8 CeHCI。 12 BHC， gamma y-六六六 58-89-9 CHeCle 13 Bifenthrin 毕芬宁 82657-04-3 C23HCIF，0， 14 Boscalid (Nicobifen) 啶酰菌胺 188425-85-6 C18H12CI2N20 15 Bromopropylate 溴螨酯 18181-80-1 C7H1eBr，Os 16 Bromoxynil 辛酰溴苯腈 1689-84-5 C-H，Br，NO 17 Butachlor 丁草胺 23184-66-9 C.H，CINO， 18 Butylate (Sutan) 丁草特 2008-41-5 CHNOS 19 Captan 克菌丹 133-06-2 CgHgC，NO，S 20 Chlordane 氯丹 57-74-9 CH，CI： 21 Chlorethoxyfos 氯氧磷 54593-83-8 C6HCI403PS 22 Chlorfenapyr 虫螨腈 122453-73-0 C15HBrCIF，N，O 23 Chlorothalonil 百菌清 1897-45-6 CgCIN2 24 Chlorpropham 氯苯胺灵 101-21-3 CHCINO， 25 Chlorpyrifos-ethyl 毒死蜱 2921-88-2 C，HCINO，PS 26 Chlorpyrifos-methyl 甲基毒死蜱 5598-13-0 CH-CINO，PS 27 Chlorthal-dimethyl (Dacthal) 氯酞酸甲酯(DCPA) 1861-32-1 CH，CIO4 28 Coumaphos 蝇毒磷 56-72-4 C4H1eCIO，PS 序号 英文名 中文名 CAS号 分子式 149 Tribuphos 脱叶磷 78-48-8 C2H27OPS， 150 Trichlorfon 敌百虫 52-68-6 CHgCI，OP 151 Trifloxystrobin 肟菌酯 141517-21-7 C20H19FN2O4 152 Triflumizole 氟菌唑 68694-11-1 C15H15CIF，N，O 153 Trifluralin 氟乐灵 1582-09-8 C13H16F3N，04 154 Uniconazole 烯效唑 83657-22-1 C5HCIN，O 155 Vinclozolin 乙烯菌核利 50471-44-8 C12H，CI，NO： 156 Zoxamide 苯酰草胺 156052-68-5 C4H16CINO， 备注： 标样购买： Sigma-Aldrich 公司、百灵威、泉岛、振翔、安谱等均有标样提供。 四.相关法规及政策 香港立法会已于2012年6月完成审议《食物内除害剂残余规例》(第132CM章)(《规例》)的程序。有关规例于2014年8月1日起实施(1)。《食物内除害剂残余规例》列明容许某些食物含有除害剂残余的最高限量以及一些的释义条文，是供港蔬菜项目必须遵循的法规以及政策。规例所检测的化合物以及限量标准主要以内地和向香港出口食物的其他国家当时可用的相关标准作为补充，同时考虑了在2011年7-9月针对公众咨询所收集的意见，并且这些标准已经通过了风险评估。 ( 参考： ) 1. http：//www.cfs.gov.hk/sc_chi/whatsnew/whatsnew_fstr/whatsnew_fstr_21_Pesticide.html EL 五.样品前处理 当前的检测方法针对的农药种类越来越多，所涉及的基质类型也是多种多样，所以QuEChERS ( Quick， Easy， Cheap，Effective， Ruggedand Safe ) 这种比较普遍且有效的前处理方法便应运而生。QuEchERS 方法对大量极性及挥发性的农药回收率高，分析准确度高，并且操作简便，污染小，因而在供港蔬菜项目这种大规模的样品处理检测中也被广泛使用。QuEchERS 的方法简单概括为提取，净化和萃取的过程，具体过程如下图所示(参考 EN 15662方法)： 六.仪器和设备 仪器： Thermo Scientific M TSQ 8000 Evo气相色谱三重四极杆串接质谱仪。 设备：涡旋混合器，离心机，旋转蒸发仪，氮吹仪等。 色谱柱： TR-PesticideⅡ (30 m*0.25 mm*0.25 pm，带5m预柱)毛细管色谱柱(Thermo Fisher Scientific)。C10保留时间为18.90 min。 七.方法包的使用 Hong Kong nequlation 1.进样方法使用：直接使用方法包中 meth 结尾的文件 ，进行进样分析。 不同仪器配置可能稍有不同，可以参考以下方法截图。 X 2.数据处理方法建立：直接拷贝方法包中的文件夹 Hong Kong Regulation到 C：\TFraceFinderDaile fta\32\olderMethods 中，方法就可以直接在 TraceFinder 软件中打开，这个方法包括数据处理方法和进样方法。 将步骤1中的进样方法拷贝粘贴到C：TraceFinderData\ InstrumentMethods 中，在 Instrument Methods中选择这个文件，然后保存这个 TraceFinder 的 Master Method。 Method Development 3.将按照步骤1进样完成的数据文件与 TraceFinder 方法相关联，得到完整的数据处理方法。按需要更改保留时间等参数进一步对数据处理方法进行优化，得到准确的数据处理方法。整个过程无需输入化合物信息，离子对信息，挑选离子对信息找到化合物，所有的步骤均是自动完成，小一点即可，极大得提高分析效率，简化方法流程。 八.应用文章 关键词：食物内除害剂残余规例；QuEChERS；农药残留； TSQ 8000 Evo 三重四极杆气质联用 1.前言 早在2012年6月，香港立法会就已完成审议《食物内除害剂残余规例》(第132CM章)(《规例》)的程序。有关规例于2014年8月1日起正式实施。 《食物内除害剂残余规例》列明容许某些食物含有除害剂残余的最高限量以及一些释义条文，是供港蔬菜项目必须遵循的法规以及政策。香港《食物内除害剂残余》规例(Hong Kong Pesticide Residues in FoodRegulation) 包含360种除害剂以及超过7000个“除害剂-食物”组合的最高残留限量/最高再残留限量标准。香港规例中所包含的除害剂，用 GC/MS/MS 和 LC/MS/MS 可以检测其中95%以上的化合物。 本实验用 Thermo ScientificM TSQ 8000 Evo 结合赛默飞世尔科技农残分析色谱柱(TR-Pesticide II 30 m*0.25 mm*0.25 um)分析香港规例中的101种农药残留，得到了非常出色的结果。各种农药的最低检测限在0.07-2.69 pg/L 之间，在5-200 pg/L的范围有良好的线性，且用10 pg/L 样品连续6针进样，得到RSD在1.51-9.3%之间，表明此方法具有良好的重现性。 2.1仪器和试剂 质谱仪器： Thermo ScientificM TSQ 8000 Evo质谱仪(赛默飞世尔科技，美国)； 应用 TSQ 8000 Evo 快速检测香港《食物内除害剂残余规例》中的多种除害剂残留 气相色谱仪： Thermo ScientificM Trace 1310 GC 配 AI I310自动进样器(赛默飞世尔科技，美国)； 色谱柱： TR-Pesticide II 30m*0.25mm*0.25 um 毛细管色谱柱； 试剂：丙酮、乙腈：色谱纯； 2.2仪器方法 气相方法： 柱温箱：40C保持 1.5 min， 以25°C/min 升至90℃，保持 1.5 min， 再以 25℃/min 升至180℃， 以5C/min升至 280℃，最后以10℃ /min 升温到300℃，保持5min。进样口：不分流进样，不分流时间：1.5 min；进样口温度：270℃；载气：恒流，1.2 mL/min；传输线：300℃质谱方法：离子源温度为300℃， 采用 Acquisition-Timed方法， SRM 扫描，具体检测离子对如表1所示： 表1：检测化合物列表及 SRM 离子对信息 2.3样品前处理 1)样品制备：取适量的蔬菜样品于均质器中，将蔬菜样品打碎，均质混匀。 2)样品提取：称取10g样品到 50mL QuEChERS 萃取管中，加入10 mL乙腈震荡混匀，加入4g MgSO4、1 g NaCl、1g 无水柠檬酸三钠和0.5g柠檬酸二钠，在涡旋振荡器上振荡2分钟，放置于平行摇床上摇30分钟，然后在5000rpm 转速下离心5 min。 3)样品净化：取上清液，转移到15 mL QuEChERS 净化管，净化管中包括 1200mg MgSO4、400 mg PSA 和 400mgC18。旋涡震荡样品1 min， 然后在 5000 rpm 转速下离心5 min。取上清液1mL于进样瓶中，直接 GC-MS/MS分析。 2.4样品基质溶液 按照2.3的程序处理白菜样品，得到空白样品的基质溶液。 2.5标准溶液的配置 1)标准储备液：在十万分之一分析天平上称取每种农药单标化合物 10mg， 加入 10 mL 相应的溶剂(根据不同的化合物加入丙酮、甲苯或者乙腈)溶解，配制成浓度为约1000mg/L 的溶液。每种单个标准储备液的浓度根据称样量和加入溶剂的体积计算得到。所有单标储备液在-20℃冰箱中冷冻保存。单标储备液的有效期为6个月。 2)混合标准中间液：移取适量的单标储备液，用乙腈稀释。中间标准储备液的浓度为10.0 mg/mL。中间标准储备液在-20℃冰箱中冷冻保存。中间储备液的有效期为3个月。 ( 3)工作标准溶液：取适量的混合标准中间液，以空白样品基 质液(2.4)依次稀释成浓度为5.0、10.0、20.0、50.0、 100.0和200.0 pg/L 工作标准溶液。 ) 3.结果分析 3.1色谱分离结果 每个化合物 SRM质谱条件(母离子-子离子-碰撞能量)从 TraceFinder 的 CDB中导出(见表1)，在该条件下运行样品可得到目标物的 SRM 色谱质谱图见图1。 图1：标准溶液色谱图(200 pg/L) 3.2方法的最低检测限 以 S/N=3 为计算最低检测限，结果见表2。图2列出来部分 1 ug/L 的除害剂的色谱图。可以看出，农残的检出限基本上低于 1.0 ug/L，足以满足现行国标以及国际上除害剂检测方法的要求，可保证样品中除害剂的定性与定量检测。 图2：1pg/L部分农残的色谱图 3.3标准曲线线性、检出限及精密度 配置混合标准溶液，各浓度分别为：5.0、10.0、20.0、50.0、100.0和200.0 pg/L采用上述方法分别进样分析，考察各组分的线性。实验结果表明101种农药组分在5.0-200.0 pg/L线性关系良好，线性相关系数均大于0.99(见表2)，对同一样品连续进样6针，RSD 在1.51-9.3%之间，重复性良好。按照 IUPAC 方法规定计算各组分检出限，各组分检出限在 0.07-2.69 pg/L 之间(见表2)，基本上满足现行方法对于农残分析(检出限10 pg/L) 的要求。 表2：保留时间、线性及 RSD%数据统计 序号 英文名 中文名 线性范围 线性方程 相关系数 (R) 检出限 (ug/L) RSD(%) (n=6) 1 2-phenylphenol 2-邻苯基苯酚 5.0~200.0 Y=1.361e4X-5.994e4 0.9976 0.32 2.76 2 Acephate 乙酰甲胺磷 5.0~200.0 Y=7.063e4X-8.141e4 0.9987 0.35 2.23 3 Acibenzolar-S-methyl 甲噻活素 5.0~200.0 Y=9.513e3X-2.861e4 0.9991 0.90 4.75 4 Amitraz 双甲眯 5.0~200.0 Y=1.946e4X-8.476e4 0.9968 0.31 4.99 5 Benfluralin 氟草胺 5.0~200.0 Y=2.551e3X-8.951e3 0.9981 0.11 6.17 6 BHC， Alpha α-六六六 5.0~200.0 Y=3.841e4X-1.468e4 0.9991 0.11 3.22 7 BHC， Beta β-六六六 5.0~200.0 Y=7.36e3X-1.994e4 0.9978 0.81 4.83 8 BHC， delta 8-六六六 5.0~200.0 Y=1.86e4X-5.324e4 0.9989 0.09 3.61 9 BHC，gama(Lindan) y-六六六 5.0~200.0 Y=6.818e3X-1.529e4 0.9987 0.67 3.46 10 Bifenthrin 毕芬宁 5.0~200.0 Y=3.841e4X-1.468e4 0.9984 0.11 4.6 11 Boscalid (Nicobifen) 啶酰菌胺 5.0~200.0 Y=3.883e4X-3.087e5 0.9982 0.24 5.19 12 Bromopropylate 溴螨酯 5.0~200.0 Y=1.181e4X-3.97e4 0.9983 1.01 5.44 13 Bromoxynil 辛酰溴苯腈 5.0~200.0 Y=5.539e4X-2.705e4 0.9975 0.15 8.95 14 Butylate (Sutan) 丁草特 5.0~200.0 Y=1.56e4X-4.965e4 0.9951 0.95 2.85 15 Captan 克菌丹 5.0~200.0 Y=1.282e3X-1.678e4 0.9906 2.39 9.3 16 Chlorfenapyr 虫螨腈 5.0~200.0 Y=1.6e3X-2.543e3 0.997 0.48 4.09 17 Chlorothalonil 百菌清 5.0~200.0 Y=2.098e3X-1.641e4 0.9938 2.35 5.21 18 Chlorpropham 氯苯胺灵 5.0~200.0 Y=5.898e3X-3.514e4 0.9952 1.79 3.82 19 Chlorpyrifos-ethyl 毒死蜱 5.0~200.0 Y=4.783e3X-1.116e4 0.9992 0.70 2.91 20 Chlorpyrifos-methyl 甲基毒死蜱 5.0~200.0 Y=6.302e3X-1.517e4 0.9977 0.72 5.76 21 Cyfluthrin 氟氯氰菊酯 5.0~200.0 Y=8.081e3X-7.253e4 0.9954 2.69 5.32 22 Cyhalothrin 氟氯氰菊酯 5.0~200.0 Y=1.672e4X-1.166e5 0.9912 2.09 3.86 23 Cypermethrin 氯氰菊酯 5.0~200.0 Y=8.325e3X-6.421e4 0.9923 2.31 5.64 24 Deltamethrin 溴氰菊酯 5.0~200.0 Y=2.676e3X-1.523e4 0.9901 1.71 5.1 序号 英文名 中文名 线性范围 线性方程 相关系数 (R) 检出限 (ug/L) RSD(%) (n=6) 85 Quinoxyfen 快诺芬 5.0~200.0 Y=1.12e4X-3.877e4 0.9986 0.81 4.84 86 Quintozene 五氯硝基苯 5.0~200.0 Y=1.793e3X-9.67e3 0.9964 0.62 5.21 87 Quizalofop-ethyl 乙基喹禾灵 5.0~200.0 Y=2.141e3X-1.978e4 0.9916 0.77 6.41 88 semiamitraz 单甲脒 5.0~200.0 Y=8.76e3X-6.876e3 0.9996 0.24 5.01 89 Simazine 西玛津 5.0~200.0 Y=2.299e3X-9.476e3 0.9989 1.24 8.39 90 Spirodiclofen 螺螨酯 5.0~200.0 Y=8.253e3X-3.505e3 0.9978 0.13 5.84 91 spirotetramat 螺虫乙酯 20~200.0 Y=2.372e1X-2.986e2 0.9973 1.75 8.62 92 TCMTB 苯噻硫氰 20~200.0 Y=4.462e1X-1.386e2 0.9958 0.93 7.93 93 Tecnazene 四氯硝基苯 5.0~200.0 Y=1.061e3X-1.692e3 0.9995 0.48 4.03 94 Tefluthrin 七氟菊酯 5.0~200.0 Y=2.432e4X-1.018e5 0.9968 1.26 4.21 95 Terbufos 特丁硫磷 5.0~200.0 Y=7.477e3X-3.3e4 0.9974 1.32 4.11 96 Tolclofos-methyl 甲基立枯磷 5.0~200.0 Y=7.964e3X-2.726e4 0.998 1.03 3.76 97 Triazophos 三唑磷 5.0~200.0 Y=5.498e3X-3.227e4 0.997 1.76 6.2 98 Tribuphos 脱叶磷 5.0~200.0 Y=4.331e3X-2.273e4 0.9976 1.57 3.86 99 Triflumizole 氟菌唑 5.0~200.0 Y=2.915e3X-6.498e3 0.9994 0.67 8.19 100 Trifluralin 氟乐灵 5.0~200.0 Y=2.991e3X-1.174e4 0.9967 1.18 4.69 101 Uniconazole 烯效唑 5.0~200.0 Y=2.212e3X-8.379e3 0.9992 1.14 7.81 4.结论 本文采用 QuEChERS 前处理-气相串联质谱法(QuEChERS-GC-MS/MS) 测定蔬菜基质中的101项农残，样品前处理只需要60 min 即可完成，无须经过繁琐的人工前处理过程。以快速的 QuEChERS 前处理结合 Thermo Fisher 的 TSQ 8000 Evo 三重四极杆仪器，为农残分析带来灵敏度高、准确性好、方便易用的解决方案。总而言之，由赛默飞世尔科技提供的完整工作流程解决方案连同最新开发的 TSQ 8000 GC-MS/MS 系统为多农残的分析和准确定量带来了良好的系统性能。 ( 致谢 ) 特别感谢深圳市出入境检验检疫局提供检测样品及化合物混标，共同完成此篇应用文章。 更清洁 关于赛默飞世尔科技 赛默飞世尔科技(纽约证交所代码： TMO)是科学服务领域的世界领导者。公司年销售额170亿美元，在50个国家拥有约50，000名员工。我们的使命是帮助客户使世界更健康、更清洁、更安全。我们的产品和服务帮助客户加速生生科学领域的研究、解决在分析领域所遇到的复杂问题与挑战，促进医疗诊断发展、提高实验室生产力。借助于首要品牌 Thermo Scientific、AppliedBiosystems、Invitrogen、Fisher Scientific 和 Unity Lab Services，我们将创新技术、便捷采购方案和实验室运营管理的整体解决方案相结合，为客户、股东和员工创造价值。欲了解更多信息，请浏览公司网站： www.thermofisher.com 赛默飞世尔科技中国 赛默飞世尔科技进入中国发展已有30多年，在中国的总部设于上海，并在北京、广州、香港、台湾、成都、沈阳、西安、南京、武汉等地设立了分公司，员工人数约3700名。我们的产品主要包括分析仪器、实验室设备、试剂、耗材和软件等，提供实验室综合解决方案，为各行各业的客户服务。为了满足中国市场的需求，现有8家工厂分别在上海、北京和苏州运营。我们在全国共设立了6个应用开发中心，将世界级的前沿技术和产品带给国内客户，并提供应用开发与培训等多项服务；位于上海的中国创新中心结合国内市场的需求和国外先进技术，研发适合中国的技术和产品；我们拥有遍布全国的维修服务网点和特别成立的中国技术培训团队，在全国有超过2000名专业人员直接为客户提供服务。我们致力于帮助客户使世界更健康、更清洁、更安全。欲了解更多信息，请登录网站 www.thermofisher.cn 赛默飞世尔科技(中国)有限公司 Thermo 全国服务热线：8008105118400650 5118(支持手机用户) 赛默飞推出针对香港《食物内除害剂残余规例》的基于TSQ 8000 evo串接气质的整体解决方案及方法包应用，通过采用先进的Thermo Scientific™ TSQ 8000 Evo三重四级杆串接气质，帮助客户尽快得建立简便的操作流程，进一步加快实验室分析效率。