动物性食品中五氯酚钠检测方案(气质联用仪)

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2 结论AN_C_GCMS-46 气相色谱-质谱法结合大体积不分流技术灵敏快速检测动物源性食品中的五氯酚钠含量 吕建霞余种天赛默飞世尔科技(中国)有限公司 目标 建立高效的气相色谱质谱检测方法，灵敏、快速测定动物源性食品中的五氯酚钠的含量 样品中的五氯酚钠经硫酸酸化后，正己烷提取，衍生后气质联用仪大体积进样技术进行分析 引言 五氯苯酚 (Pentachlorophenol，PCP)是一种有毒农药，常用于木材防腐、杀真菌、杀虫等。我国曾大量将五氯酚钠 (Sodium Pentachlorophenate， PCP-Na) 用于杀灭钉螺。PCP-Na 在酸性条件下转化为 PCP， PCP 为环境荷尔蒙，微量即对人体有毒，可导致中枢神经系统、血液、肝、肾损伤及内分泌紊乱。美国环境保护署已经将 PCP 列为可疑致癌物质，并限制其使用。我国农业部规定在水生动物食品生产中禁用五氯酚钠，因此建立先进可靠的检测方法，有助于杜绝五氯酚钠在动物养殖中的非法使用。 大体积进样技术可以通过提高样品的进样量来提高检测的灵敏度。同时溶剂浓缩进样技术 (CSR)是赛默飞的一项专利技术，，可以在普通的分流不分流进样口就可以实现大体积进样，该技术通过预柱来承载大体积进样的所有溶剂及目标物，然后缓慢蒸发溶剂通过色谱柱到达检测器并放空，比溶剂沸点略高的目标物在溶剂之后达到检测器并被检测，从而保证了所有沸程的目标组分均由色谱柱分离到达检测器，因此可以保证较高的检测灵敏度13-4) 目前国内外对动物组织中五氯酚钠残留的检测方法研究较少，我国从2014年开始实施的强制性国家标准《GB 29708-2013动物性食品中五氯酚钠残留量的测定气相色谱-质谱法》中规定了动物源性食品中五氯酚钠残留量的测定方法，样品中的五氯酚钠，用三氯乙酸沉淀蛋白，酸性条件下用环己烷-乙酸乙酯混合溶剂提取，乙酸·吡啶溶液衍生后测定。本方法建立了硫酸酸化，正己烷萃取，乙酸酐衍生后采用大体积进样技术结合气相色谱质谱仪检测的方法。 仪器 Trace1310-ISQ气相色谱质谱联用仪，配E源 (ThermoScientific) ； Triplus RSH 三合一自动进样器 (ThermoScientific)；大体积不分流套件(内含5mx 0.32 mm 预柱、玻璃两通以及大体积不分流计算软件) (Thermo scientificP/N：19050725) ( 数据处理系统： Chromeleon7.2 ) 恒温干燥箱、离心机、天平、漩涡混合器、氮吹仪(ThermoScientific) 耗材 色谱柱： TG-5MS (30 mx0.25 mm×0.25um)(Thermo Scientific，26098-1420) 试剂与标准品 五氯酚钠标准溶液：100mg/L(国家标准物质中心)；正己烷、甲醇、吡啶、乙酸酐：色谱纯(Thermofisher)硫酸、碳酸钾：分析纯(国药集团) 标准溶液的制备 标准工作溶液：准确移取100mg/L的五氯酚钠标准溶液1ml，用甲醇稀释定容至10mL， 得浓度为10mg/L 的标准中间液。准确移取 10mg/L的五氯酚钠标准溶液1mL，用甲醇稀释定容至10mL，得浓度为1mg/L的标准工作溶液。 样品前处理 准确称取 1.00g混合均匀的动物性食品的样品于50mL具塞离心管中，加入8mL1：1的硫酸溶液，匀浆机分散均匀，80℃水浴30min， 加入10mL正己烷，振荡提取 3min，12000r/min 离心10min， 吸取 5mL正己烷于另一具塞离心 管中于50℃氮气吹干。 残余物中加正己烷1.0mL，加乙酸骏-吡啶溶液100uL，密封，于60℃反应15min，冷却，加碳酸钾溶液0.5mL， 充分混匀，静置分层，取有机相，供气相色谱质谱测定。 实验条件 色谱柱： TG-5MS (30 mx0.25mmx0.25pm)； 柱温：60℃(5min)， 15℃ /min 到280℃ (10 min)； 进样模式：不分流进样；不分流时间：1min； 进样量：10pL；进样口温度：280℃；载气：氦气(99.999%)，恒流模式，1 mL/min； 质谱离子源温度：300℃，传输线温度：300℃； 扫描模式：选择离子监测模式，266*，264，268 结果与讨论 色谱图：PCP具有较强的极性，其沸点高，难以气化，直接进样色谱峰拖尾严重，大峰中包含小峰，PCP衍生为低极性低沸点的 PCP-0Ac 后，峰型尖锐、对称(图1)。 图1.五氯酚钠酸化衍生后色谱图 衍生化产物的定性：将1mg/L的标样衍生后进GCMS 分析，质谱图如图2，经谱库检索该物质为 PCP-0Ac。 线性关系及测定低限：准确移取适量五氯酚钠标准中间液，分别用水稀释配制得到浓度为0.5、1、2、5、10 pg/L的标准工作液，各取1.0mL 加入 8mL1：1 的硫酸溶液，混合均匀，80℃水浴 30min， 加入10mL正己烷，振荡提取 3min， 12000r/min 离心 10min，吸取5mL正己烷于另一具塞离心管中于50℃氮气吹 干。残余物中加正己烷1.0mL，加乙酸酐-吡啶溶液100pL，密封，， 于60℃反应15min，冷却，加碳酸钾溶液0.5mL，充分匀匀，静置分层，取有机相，供气相色谱质谱测定。 以测定峰面积为纵坐标，对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线如图3.方法检出限以3倍信噪比计算得到，本方法鸡肉中五氯酚钠的测定低限为0.2 pg/kg。 图2.PCP-0Ac 的质谱图 图 3.PCP-0Ac 的线性情况 回收率及精密度实验：用标准添加法，在鸡肉样品中，添加五氯酚钠标准溶液，做加标回收实验，按上述方法进行提取、净化、衍生和测定，鸡肉样品添加浓度为1.0ng/kg 和5.0 pg/kg 两个水平，各做3个平行，样品、添加 谱图见图4，由图4可见，样品净化效果良好，对目标物的定量没有干扰。本方法在肌肉组织中加标浓度为1.0 pg/kg 时，回收率为89.6%，重复性 RSD 为 5.8%；加标浓度为5.0 ug/kg时，回收率为93.1%，重复性 RSD 为 7.2%。 图4.样品空白和样品加标谱图(自下而上依次为标准溶液、样品加标、样品) 肌肉组织中的五氯酚钠经酸化后，采用正己烷提取，衍生后采用赛默飞世尔新型的气相色谱质谱仪检测和确证，外标法定量。结果表明，本方法五氯酚钠的平均回收率为89.6-93.1%，3次平行测定的 RSD 值≤7.2%，方法测定低限为0.2 ng/g。此法灵敏度高，能够满足动物源性食品中五氯酚钠的残留分析要求。 ( [1] Agency for Toxic Substances a n d Disease Registry (ATSDR). ToxFAQs f or pentachlorophenol [EB/OL]. h ttp：//www.atsdr.cdc.gov/ tfacts51.html， 2004-05-25. ) ( [2]张兵，郑明辉，刘帆岩等.五氯酚在洞庭湖环境介质中 的分布[J].中国环境科学，2001，21(2)：165-167 ) ( [3] M.Biedermann，A. Fiscalini，K. G r ob.Large vo l ume spl i tlessinjection with concurrent solvent recondensation： K eeping thesample i n place in the hot vaporiz i ng c h amber， J. Se p . Sci. 20 0 4， 27，1157-1165 ) ( [4] P.Magni ， T .Porzano，Concurrent solvent recondensation large sample volume splitless injection， J.Sep.Science (2003) 26，1491- 1 4 98. ) 赛默飞世尔科技(中国)有限公司 免费服务热线：8008105118400 6505118(支持手机用户) 五氯苯酚（Pentachlorophenol, PCP）是一种有毒农药，常 用于木材防腐、杀真菌、杀虫等 [1]。我国曾大量将五氯 酚钠（Sodium Pentachlorophenate, PCP-Na）用于杀灭钉螺 [2]。 PCP-Na 在酸性条件下转化为 PCP，PCP 为环境荷尔蒙，微 量即对人体有毒，可导致中枢神经系统、血液、肝、肾 损伤及内分泌紊乱。美国环境保护署已经将 PCP 列为可 疑致癌物质，并限制其使用。我国农业部规定在水生动 物食品生产中禁用五氯酚钠，因此建立先进可靠的检测 方法，有助于杜绝五氯酚钠在动物养殖中的非法使用。大体积进样技术可以通过提高样品的进样量来提高检测 的灵敏度。同时溶剂浓缩进样技术（CSR）是赛默飞的 一项专利技术，可以在普通的分流不分流进样口就可以 实现大体积进样，该技术通过预柱来承载大体积进样的 所有溶剂及目标物，然后缓慢蒸发溶剂通过色谱柱到达 检测器并放空，比溶剂沸点略高的目标物在溶剂之后达 到检测器并被检测，从而保证了所有沸程的目标组分均 由色谱柱分离到达检测器，因此可以保证较高的检测灵 敏度 [3-4]。