疫苗中蛋白质含量检测方案(定氮仪)

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Manon海能仪器民族仪器 品质典范 海能仪器：疫苗中蛋白质含量的测定(凯氏定氮法) 1前言 疫苗是指为了预防、控制传染病的发生、流行，用于人体预防接种的疫苗类预防性生物制品。生物制品，是指用微生物或其毒素、酶，人或动物的血清、细胞等制备的供预防、诊断和治疗用的制剂。预防接种用的生物制品包括疫苗、菌苗和类毒素。其中，由病菌制成的为菌苗；由病毒、立克次体、螺旋体制成的为疫苗，有时也统称为疫苗。不管是哪一种疫苗，里面都会含有大量蛋白质。下面以禽流感疫苗为例，为大家介绍一下疫苗中蛋白质含量测定的方法。 2实验部分 2.1原理 疫苗中的有机态氮在浓硫酸和催化剂的共同作用下，转化为氨态氮。加碱蒸馏后，用硼酸吸收后，再以硫酸标准滴定液进行滴定。 2.2仪器与试剂、器具 2.2.1K1100F 全自动凯氏定仪仪(济南海能仪器股份有限公司)。 2.2.2 SH420F石墨消解仪(济南海能仪器股份有限公司)。 2.2.3硫酸分析纯， c(HCL)=0.1mol/L，标准滴定液。 2.2.4硼酸分析纯，质量分数2%。 2.2.5氢氧化钠分析纯，质量分数40%。 2.2.6溴甲酚绿-甲基红混合指示剂将溴甲酚绿乙醇溶液(1g/L)与甲基红乙醇溶液(1g/L)按5：1体积比临时混合摇匀备用。 2.2.7催化剂片3g硫酸钾和0.2g硫酸铜混合均匀压片 2.2.8850ml量筒 2.2.9称量瓶 2.3实验部分 2.3.1取样：精确量取2ml样品放入消化管中，并用纯水冲洗消化管壁，防止残留，加催化剂片(或者3g硫酸钾、0.2g硫酸铜)，加入8ml浓硫酸。 2.3.2消解：利用石墨消解炉进行消解，将消化管放在石墨炉上，盖上排气罩，，连接废气吸收系统，，消化完毕后，将消化管取下冷却至室温。消化过程采用曲线升温模式，，设置参数如下： 温度 时长 备注 1 200℃ 30min 不盖排废罩，挥去水分 2 420℃ 60min 2.3.3待消化管内溶液冷却至室温后，将消化管放置于定氮仪上。定氮仪设置程序如下： 稀释水：30m1 硼酸：25ml碱：30ml 蒸馏时间： 5min 2.3.4仪器自动滴定并给出计算结果。 3结果与讨论 氮含量 N8 V总蛋白质含量 %=N×6.25 式中：M-标准酸摩尔浓度(mol/L) V总-样品体积(mL) Vo-空白样滴定标准酸消耗量(mL)V-样品滴定标准酸消耗量(mL)，精确到小数点后四位 6.25是蛋白质系数 编号 体积 氮含量 蛋白质含量 平均 3# 1 2.5438ml 197.7351g/L 1235.8444g/L 1230.7271g/L 2 2.5194ml 195.7701g/L 1223.5631g/L 3 2.5377ml 197.2438g/L 1232.7738g/L 注意事项 1.消解过程中要先将水分挥发完全，以防止爆沸，喷溅。 -- --