尿液中磷酸性结石抑制物-焦磷酸和植酸含量检测方案(离子色谱仪)

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2 张婷婷赛默飞世尔科技(中国)有限公司 人体的尿液中含有一定量的焦磷酸和植酸，研究发现其在尿液中的含量可作为一些疾病的预测指示，如结石患者尿液中这两种物质的含量就偏低，因此能准确测定尿液中焦磷酸和植酸的含量在临床的检验中具有一定的参考价值。本文采用离子色谱的方法对尿液中的这两种磷酸性结石抑制物进行测定12-3。 测试条件 仪器： ICS 2100系统(EG淋洗液发生装置)； 分析柱： lonPac AS16， 250×4mm； 保护柱： lonPac AG16， 50×4mm； 柱温：30℃； 淋洗液：氢氧化钾(KOH)梯度淋洗；30mmol/LKOH， 0-7min； 65mmol/L， 25-32min； 流速：1.00mL/min； 定量环：25pL 抑制器： ASRS-3004mm， 自循环电抑制，电流为161mA 检测方式：抑制型电导检测器 样品前处理 精密量取尿液5.0mL， 在其中加入100uL的50%的NaOH，沉淀后取上清液4mL，用超纯水稀释2倍，将样品溶液过0.22um的滤膜和经过活化的On Guard RP固相萃取小柱后待测。 结果和讨论 离子色谱条件的选择 比较了文献中提到的测定植酸的离子色谱方法，一种是在特殊阴离子交换色谱柱上，采用在线柱后衍生紫外检 测的方法进行测定，装置繁琐；另一种采用KOH梯度洗脱的方法进行植酸的测定，植酸结构中含有六个磷酸根，在KOH梯度条件下保留时间较长，受到杂质干扰的因素较少，因此选择后一种KOH梯度洗脱的方法。 KOH梯度分离条件的优化 植酸的六磷酸结构使其在阴离子交换色谱柱上有较强的保留，因此选择柱容量较低、亲水性很强的lonPacAS16作为分析柱，在此色谱柱上优化了KOH的梯度变化条件，当KOH浓度变化条件如表1所示时，焦磷酸、植酸和其它磷酸类物质以及样品中的杂质进行很好分离，不影响两种物质的定量分析(图1)。 表1时间和淋洗液浓度 时间/min KOH/mmol/L 0 30 7 30 25 65 32 65 32.1 30 36 30 图1焦磷酸和植酸的色谱图 方法的检出限、定量限和线性范围 按照色谱条件进行测定，以待测物的平均色谱峰面积对其在溶液中的含量进行线性回归，焦磷酸和植酸在测定范围内具有良好的线性，相关系数为0.9998。焦磷酸和植酸的检出限均为0.003mg/L(信噪比S/N=3时)，定量限均为0.010mg/L。 样品测定 对尿液样品进行前处理，按照色谱条件进行测定，外标法定量，重复进样11次，其中尿液样品中焦磷酸和植酸的加标回收率和相对标准偏差见表2。 结论 本文采用离子色谱法测定了尿液中焦磷酸和植酸的含量，方法简单，测定结果满足要求。 ( [1]. Jose A. Munoz， Montserrat Lopez-Mesas，Manuel Valiente. Minimum handling m ethod f or the analysis of phosphorous in h ibitors o f urolithiasis (pyrophosphate and phytic acid)in urine by SPE-ICP techniques[J]. A nalyticaChimica Acta， 2010， 38(4)：204-208 ) ( [2].张嘉捷，朱岩.柱后衍生离子色谱法分析米粉 中植酸[J].浙江大学学报(理学版)， 2005， 32(2)：201-203 ) ( [3]. Joseph M. Chiera1， John J. Fi n er， E li zabethA. Grabau. Ec topic expression of a soybeanphytase i n developing seeds of Glycine maxto improve phosphorus availability[J]. PlantMolecular Biology， 2004， 5 6： 895-904 ) 表2尿液样品中焦磷酸和植酸的加标回收率及其相对标准偏差(n=11) Compound Original/(mg/L) Added/(mg/L) Found/(mg/L) Recovery/% RSD/% Pyrophosphate 0.983 0.5 1.483±0.021 101.8 0.87 1.0 1.985±0.048 100.7 0.81 2.0 2.981±0.039 99.3 0.74 Phytic acid 0.385 0.2 0.581±0.044 98.8 0.75 0.5 0.885±0.032 100.4 0.36 1.0 1.381±0.057 100.1 0.41 www.thermoScientific.com C2013 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. ISO is a trademark of the International StandardsOrganization. All other trademarks are the property of Thermo Fisher Scientific Inc. and its subsidiaries. Thisinformation is presented as an example of the capabilities of Thermo Fisher Scientific Inc. products. It is notintended to encourage use of these products in any manners that might infringe the intellectual property rightsof others.Specifications， terms and pricing are subject to change. Not all products are available in all countries.Please consult your local sales representative for details. CE 服务热线 8008105118 400 650 5118 AN_C_IC-45 ThermoFisherSCIENTIFIC Thermo FisherScientific， Austin， TXUSA is ISO Certified.ThermoFisherSCIENTIFIC