仿制药中一致性评价检测方案(液相色谱仪)

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[仿制药一致性评价解决方案] [仿制药一致性评价解决方案] L仿制药一致性评价解决方案] 高效合规的 仿制药一致性评价解决方案 Waters 仿制药一致性评价已成为制药行业热点话题，其具体工作的开展和实施对于提升我国制药行业整体水平，保证公众用药安全有效有着深远意义；与此同时，仿制药一致性评价还将推动制药行业供给侧改革，加快产业机构调整，从而增强我国制药企业的国际竞争力。 开展仿制药质量与疗效一致性评价工作，全面提高仿制药质量是《国家药品安全"十二五"规划》的重要任务，根据《国务院办公厅关于开展仿制药质量和疗效一致性评价意见的通知》(国办发〔2016〕8号)的有关要求，国家基本药物目录(2012年版)中2007年10月1日前批准上市的化学药品仿制药口服固体制剂，应在2018年底前完成一致性评价。化学药品新注册分类实施前批准上市的其他仿制药，首家品种通过一致性评价后，其他药品生产企业的相同品种原则上应3年内完成一致性评价，逾期未完成的，不予再注册。 按照国家食品药品监督总局公布的时间表，目前289个仿制药品种，需在2018年底前完成一致性评价，将涉及到1817家国内生产企业、42家进口药品企业。一致性评价对产业格局的影响绝不限于289个品种，将会对正在开展的仿制药研发、创新药研发产生更深层次的影响。医药企业在开展仿制药一致性评价工作中将面临“法规符合性”、“项目时限紧”、‘“任务重”等一系列问题。 沃特世公司作为全球领先的分析实验室技术开发商及制造商，一直以客户为中心，关注用户的需求。我们愿意提供先进的分析技术、符合法规的信息化产品以及更好技术服务与支持，帮助制药更好地开展-致性评价工作。我们坚信一致性评价是制药企业而言是挑战更是机遇。 目录 一-致性评价背景信息 一致性评价政策及指导原则概览 一致性评价方法及工作程序 一致性评价对制药企业的影响及挑战 如何高效且合规地开展一致性评价工作 一致性评价工作中法规依从性解决方案 体外评价分析解决方案 利用现代分析技术及色谱软件提升溶出度分析效率 一致性评价中杂质测定及比对应对策略 一致性评价中辅料解决方案 体内评价分析解决方案 一-致性评价工作中色谱柱及常见耗材推荐 溶出度分析色谱柱推荐 有关物质研究色谱柱推荐 辅料检测色谱柱推荐 生物样本分析色谱柱及样品前处理推荐 常用耗材资料列表 一致性评价政策及指导原则概览 关于一致性评价颁布了哪些政策? 2012.11.22 颁布关于征求《仿制药质量一致性评价工作方案(征求意见稿)》意见的通知，拉开了 关于仿制药质量一致性评价的序幕。2015.08.18 发布“国务院关于改革药品医疗器械审评审批制度的意见”，重新将一致性评价推到了风口浪尖。2015.12.01 国家食品药品监督管理总局关于化学药生物等效性试验实行备案管理的公告(2015 年第257号)。 2016.03.05 国务院办公厅印发关于开展仿制药质量和疗效一一性评价的意见。未来 全面进入仿制药一致性评价时代. 2016年连续发布一系列政策及指导原则 序号 日期 文件发布情况 文件号 1 2016-03-05 国务院办公厅印发《关于开展仿制药质量和疗效一致性评价的意见》 国办发8号 2 2016-03-18 普通口服固体制剂参比制剂选择和确定指导原则 (2016年第61号) 3 2016-03-18 普通口服固体制剂溶出曲线测定与比较指导原则 (2016年第61号) 4 2016-03-18 以药动学参数为终点评价指标的化学药物仿制药人体生物等效性研究技术指导原则 (2016年第61号) 5 2016-04-29 总局关于发布药物溶出度仪机械验证指导原则的通告 (2016年第78号) 6 2016-05-19 总局关于发布人体生物等效性试验豁免指导原则的通告 (2016年第87号) 7 2016-05-19 总局关于发布仿制药质量和疗效一致性评价参比制剂备案与推荐程序的公告 (2016年第99号) 8 2016-05-26 总局关于落实《国务院办公厅关于开展仿制药质量和疗效一致性评价的意见》有关事项的公告 (2016年第106号) 9 2016-05-26 总局关于发布仿制药质量和疗效一致性评价工作程序的公告 (2016年第105号) 10 2016-07-29 总局办公厅关于发布承担首批仿制药质量和疗效一致性评价品种复核检验机构名单的通知 11 2016-08-27 总局关于研制过程中所需研究用对照药品一次性进口有关事宜的公告 (2016年第120号) 12 2016-09-14 推进仿制药一致性评价提升行业发展水平有关政策解读 一仿制药质量和疗效一致性评价 [仿制药一致性评价解决方案] 一致性评价方法及工作程序 一致性评价方法 ■一致性评价工作程序 m -致性评价体外及体内评估工作流程图 一致性评价对制药企业的影响及挑战 挑战 ·参比制剂的遴选与购买。 ·任务量增多一体外溶出涉及大量样品测试及数据处理，二次工艺开发需要进行全套方法学、稳定性试验等试验。 ·时限紧一留足变更工艺、稳定性研究、做BE、补充申请、审评排队时间。 ·关键的质量对比：杂质、辅料、晶型等。 ·临床机构难寻，生物等效性是否一致。 ·申报资料整理、现场核查..mmwm ·通过一致性评价的药品品种，CFDA将向社会公布，同时企业也可在药品说明书和标签上予以标注； 申报品种的上市许可持有人，委托其它企业生产； 医保支付、集中采购，同一品种3家以上通过一致性评价，招标中不予考虑未通过一致性评价的品种； ●可按照相关条件向发展改革、工信和财政等部门申请中央基建投资、产业基金等资金支持； 一致性评价工作中法规依从性解决方案 一致性评价系列工作在开展过程中将对申报资料中声明的研究、实验、生产等活动以及活动产生的相关数据、记录、产品等进行实地确证，并对其真实性、可靠性、一致性、法规符合性等作出科学判断。 关注申报资料中数据的真实性与可靠性，申报数据与原始数据的一致性，原始数据的可追溯性，如是否可归属、是否及时记录、是否清晰可读取、是否准确 保证数据真实、可靠、可追溯所采取的措施与管理方法来访时数据修改、删除、覆盖等如：计算机化系统分级管理与权限设置、审计追踪系统等 Waters NuGenesis 科学数据管理系统(SDMS)+Empower 色谱数据软件(CDS)合二为一的强大功能帮助客户确保研发和生产过程中产生仪器分析数据的完整性和合规性 Waters UNIFI软件系统是目前市 场上法规依从性最严格的液质系 统软件，确保临床试验分析数据 的完整性和合规性 体外评价分析解决方案 利用现代分析技术及色谱软件提升溶出度分析效率 溶出度分析工作在一致性评价中具有非常重要的意义，通过溶出度测试评估可以提高体内评价的成功率，同时可以建立日常监测标准。 溶出度测定的一般流程及难点 就溶出度测定来说，其检测方式一般为紫外可见分光光度法和液相色谱法。现今，越来越多的品种使用液相的方法来检测，因其可以有效消除辅料、非目标成分的干扰，且线性范围较宽。溶出度测试的流程，可主要总结如下。 现在，越来越多的溶出仪采用自动化取样，可以有效的降低人员的工作量。目前比较突出的难点是：样品通量大，分析时间长，大批量数据处理(溶出曲线、样品报告等)。 溶出度分析效率提升的关键：采集样品效率和数据处理效率 沃特世高效先进的液相分析平台，助力仿制药一致性评价，提升采集样品效率 作为全球第一家推出高效液相产品，第一家推出超高效液相产品的公司，沃特世拥有最为全面的液相色谱分析技术平台，满足药物液相色谱分析各种应用需求，与符合法规要求的Empower色谱数据系统完美结合，让您的色谱分析遵循法规要求、自动化、最大化实验室效率并降低成本。 不同分析液相产品匹配合适的色谱柱产品，可有效缩短溶出度样品检测时间，将溶出效率提升5~10倍。 Empower溶出度插件设计用于溶出度测试，提升数据处理效率 沃特世独有的Empower溶出度软件是针对溶出度计算开发的一款Empower内置式计算系统，它使溶出度样品的采集、计算、出报告均在Empower软件内完成，避免了数据转移，导出到Excel表进行计算，使整个流程更自动、更符合法规。 mMicrosoft Excel的合规性缺陷 采用Microsoft Excel进行计算，实验室存在合规性的风险 无登陆 你如何知道是谁执行了计算? 无审计追踪 你如何知道做了什么，为什么做以及它是否是经过了多次重复计算最终得到一个“正确”的结果? ■手动数据转移 你如何知道数据是正确录入? 手动管理版本 你如何能确保用户是使用了一个正确的电子表格版本? [仿制药一致性评价解决方案] Empower溶出度插件应用优势 1 自动计算每个峰的溶出百分比和溶解量，并绘制溶出曲线 2 自动对两个样品组的结果执行f1、f2计算 3 将多个Q因子参比点包含在溶出度报告中 4 针对溶出度的专用报告模板，100%符合法规，人性化可编辑 5 使用样品组编辑向导，编辑大量样品的进样序列简便快速、不易出错 Empower软件中溶出报告模板 Empower软件中综合报告统计功能 Empower软件中综合报告统计功能 Peak Summary with StatisticsName：RRT=0.75 查阅“溶出度插件功能介绍及视频教程” [仿制药一致性评价解决方案] -致性评价中杂质测定及比对有效解决方案 无论是“一致性评价”或是仿制药的研发，杂质鉴定及定量检测、原研药和仿制药中杂质谱的对比，都是申报资料中的重要组成部分。系统且全面的杂质分析更能体现出对仿制药及原研药药学研究的质量。针对杂质分析中关键问题如杂质的分离、杂质的鉴定、杂质的定量检测以及基因毒性杂质，沃特世拥有全面而系统的解决方案。 杂质的分离 在杂质分离方面，国外制药巨头在药物研发阶段早已使用UPLC及小粒径色谱柱来提升分离效率及分离度。USP药典中也陆续发布多个UPLC的方法，应用于杂质分析和含量测定。制药企业通过采用UPLC技术，可在最短时间内获得最佳的杂质分析方法，提高分析效率并提升其在行业中竞争壁垒。 杂质分离的案例 以头孢地尼为例，按照药典的方法，使用UPLC方法转换器，将其平行转移至1.7 pm的色谱柱上，同时将不易挥发的磷酸盐流动相替换成等pH值的乙酸铵流动相体系，其检测谱图如下。采用UPLC技术在不损失分离度的前提下，将检测时间由药典方法的60min转变为13min，分析效率提升4倍以上，并显著降低溶剂成本。UPLC结合小颗粒色谱柱技术将会是未来制药企业杂质分析方法开发的方向，也会是未来制药企业分析实验室发展的趋势。 药典中头孢地尼系统适应性谱图 乙酸铵体系流动相， CSH C (100*2.1mm， 1.7pm)；梯度洗脱 杂质鉴定 在2015版药典附录中明确规定，当药物成分中单个未知杂质的量大于0.1%时，需提供定性方面的资料。随着国家对药品质量的逐渐提升，在未来的申报资料中，对未知杂质的研究要求也会越来越高。对超标杂质峰及降解过程中增长明显的杂质峰进行定性鉴定的研究将会是药企分析部门和审评人员共同关注的问题。 杂质鉴定的难点 杂质的结构鉴定：缺乏有机分析等知识背景，同时需要耗费大量结构剖析时间 配备沃特世公司最先进的Xevo G2-XS QTof四极杆-飞行时间质谱仪结合智能的UNIFI软件进行数据处理，可以轻松应对杂质鉴定中的难点问题。 飞行时间质谱Time of Flight Mass Spectrometer (TOF)的原理离子在加速进入漂移管后，以恒定速度飞向离子接收器，离子质量越大，到达接收器所用时间越长，离子质量越小，到达接收器所用时间越短，根据这一原理，可以把不同质量的离子按m/z值大小进行分离，从而计算出准确的分子量，进而推断分子式及结构式。 Xevo G2-XS QTof采用IntelliStart专利模式自动校正质量轴，同时采用LockSpray 专利技术进行实时校正，保证采集到的数据的准确性，获得质量偏差小于1mDa的准确质量数。采用MS专利采集方式，一针进样同时获得母离子及碎片离子的高分辨、高质量精确数据，其中包括了母离子扫描、子离子扫描和中性丢失扫描的结果，并且避免了杂质信号的丢失，且可以通过软件快速自动确定杂质的相关信息。 智能的UNIFI软件自动化给出与主峰结构相关的大部分杂质，如降解杂质等，在杂质列表中，可通过左侧的工作流程(workflow) 快速筛选出目标杂质。在目标杂质处设上“标签”。以下是UNIFI软件界面，软件中质谱图上均对应有结构式。 化合物的杂质中大部分是由降解生成的，所以大部分杂质均为“与主峰结构相关”杂质。特别是对于发酵得到的化合物，其大部分杂质均为相关杂质。 [仿制药一致性评价解决方案] 工作 insint tnn cetfineH7D-C2HNOS leoudty-1 2290382 1S6| 6800 0.155+H 分已定邦t分 celsine-cheSNDs 要 cefsinie+O-C7HNOScettininH20 CTHINOS 250126 106 -01 2714A 0.061HIE BSF 229.0184 248 -01 6951 0154+16 1140533 25S 04 10887 aH lsovityo 3840129 203 02 37223 0850K 4140135 317 02 45155 1035nHE lrolty 4140514 157 01 36644 0X2141 片 colSnisH20 CLSNSCBK2 fow piceet tthuaj C101N60%2 180 H100 100000 MS cetsnr-H20 IepuitH 4404 663 -06 4509 0.101 SF cefntr+H20S lspulty9 C14415052 495 AM 0.10 elArye nevter lwowrity-10 CL4ISN5C662 3960426 45500 cetdinirwH20cet5wir-1120 lmoutty11 4140533 7.204140512 752 0103 20121 a9K0.452H 14 1000 0J48+H ltoity-14 33602 2.26 1.7QIE cefsnir-h20 lwprite-15 4140533 795 -D4 4202 0.094 +16 celiSne+H20 Imputty 16 CL1SNS0M2 4140517 4013 013HIE EE CIHISNGOIS2 01 117039 2628H ilSne CD+b2 lmoulty19C13-15N50452 5700633 353| 03 LST49 2824H 1700535 1064 01 105571 AKTaH 05 11148 0258 +H 对于跟主峰无关的杂质，可通过使用“Discovery”功能批量导入到在线的chemspider数据库(包含几千万个化合物且实时更新)中进行鉴定，软件同时给出化合物是二级碎片匹配数及化合物索引数，以供参考。同时软件针对精确分子量还可以进行本地数据库，同位素峰匹配，元素组成分析，二级碎片鉴定，反应位点确定，卤素化合物寻找，中性丢失，共同碎片提取等功能。 头孢地尼实际样品分析案例 快速的对原研药和仿制药中的杂质进行对比，UNIFI软件提供了非常好用的对比功能，可直接实现不同样品中杂质谱的对比，快速找出差异组分，并对差异组分进行自动鉴定。下图为总离子流差异比较，其中绿色的线条即为差异组分，多数组分已被自动鉴定。 二维液相色谱杂质分析案例- 注射液头孢唑肟钠中杂质的鉴定 2D二维液相原理：一维使用药典或用户的不挥发性缓冲盐流动相，第二维使用质谱兼容的流动相，将一维感兴趣的峰切入到二维体系中，通过质谱进行检测。 通过软件对一级质谱[M+H]+： 402.0542自动进行元素组成分析，判断最可能的分子式及结构式。 [仿制药一致性评价解决方案] 杂质的定量 杂质的定量，多数情况下采用普通的液相色谱，对极微量或痕量的杂质则需要采用质谱或其他手段进行分析。在杂质的定量分离检测过程中，需要更强大的色谱软件系统进行杂质报告整理。 Empower色谱软件系统中自带针对杂质的处理选项，可将杂质进行不同的分类，如降解杂质、空白本底、辅料中的杂质等等，对于不同的杂质可以进行合并、扣除等计算及报告。同时针对不同的杂质设置不同的杂质限度，如根据ICH标准设置鉴定、报告及定量限度， 并且在报告中显示各个杂质峰是否超超。 国itegnficnSmastingOFut Ms3n ChaeMSLbrarySwarch MS Cerfroicus Expected UassComponerts Iimpurity Pak Raties MssThmconk ek Mstorwah. epuny Gropo Comperartttane E Hm Reebon7ma 6min ypa Amaun"eec] fasa AaestMan Corponert splaaponse CHTrracheir 2479 3.159 207436533 .002 27 3252 0C% 000.284 Pefow Rapcring ThisshelnAbova QuofficatonThraonold 2 4424 0264 3350 2141 3550 0061 061Alxve Reporing Teeshal 4 3287 403 3198 0072 6037Botow Rapceing Tvecksio L078 lE1 0031 2449 0029 4343 1672 2200 Delinwy Riporing Theyshols 51%8 53 2.09 0.0 Aova idert fc asias Thractok1 5853 Learodinpurty 484602 363 50226 3866 WAT1334473 55651 E 7m (onin) ConoorwrTypa VainuImpuncy Ihiocheis Thrsshaic Itachold Trsethold AboyeReportingTrraahold AbeThetheld WAE37168 856 Do5 35 2 3.199 9.72 005 6.15 P 3 3350 00 005 4 1287 1050 005 L0 50 0.05 615 4343 0.50 0.05 0.15 51%8 05 10.05 SB53 Lseard inpurty 09 10105 l6.15 P 55651 基因毒性杂质(或遗传毒性杂质， Genotoxic Impurity， GTI)是指化合物本身直接或间接损伤细胞DNA，产生基因突变或体内诱变，具有致癌可能或者倾向。潜在基因毒性的杂质( Potential Genotoxic Impurity，PGI)指结结构上看类似基因毒性杂质，有警示性，但未经实验证明。基因毒性物质特点是在很低浓度时即可造成人体遗传物质的损伤，进而导致基因突变并可能促使肿瘤发生。因其毒性较强，对用药的安全性产生了强烈的威胁，近年来各国的法规机构如ICH、FDA、EMA等都对基因毒性杂质有了更明确的要求，在药物研发过程中需要关注基因毒性杂质的控制和检测。 相同的化合物，使用UPLC代替HPLC，不仅检测速度增加，灵敏度也会提升好几倍，下图为使用UPLC/UV检测苯磺酸甲酯(MBS)、苯磺酸乙酯(EBS)、对甲苯磺酸甲酯(MTS)和对甲苯磺酸乙酯(ETS)的结果。在基因毒性杂质的检测中，质谱为最常使用的手段。 基因毒性杂质分析案例 使用UPLC/UV检测苯磺酸甲酯(MBS)、苯磺酸乙酯(EBS)、对甲苯磺酸甲酯(MTS)和对甲苯磺酸乙酯(ETS) Waters Xevo TQD检测甲苯磺酸的线性0.1~500ng/mL结果 此外， Waters ACQUITY QDa质谱检测器，亦可用于基因毒性杂质分析检测工作。 Waters ACQUITY QDa实现您长期以来的期待 采ACQUITY QDa用于基因毒性杂质分析的典型案例 UPLC/MS(SIR) ETS 2.577 0.03% ~0.3 ppb ~1 ppb MBS 1.775 0.05% 20ppb 60 ppb EBS 2.175 0.05% 5 ppb 15 ppb 采用ACQUITY QDa检测苯磺酸甲酯，苯磺酸乙酯，对泵磺酸甲酯和对苯磺酸乙酯的检测结果 沃特世质谱分析平台应对制药分析不同要求 定性 定量 特性 药用辅料系指生产药品和调配处方时使用的赋形剂和附加剂；是指除活性成分以外，在安全性方面已进行了合理的评估，且包含在药物制剂中的物质。药用辅料除了赋形、充当载体、提高稳定性外，还具有增溶、助溶、缓控释等重要功能，同药物活性成分一样全程参与体内的吸收、分布，其安全性直直影响药物制剂的安全性。 药用辅料的纯度直接影响药物制剂的质量、稳定性和安全性，有些杂质在使用环境下会产生不确定的药理作用，从而给药品的安全性带来隐患。因此，除关注辅料的物理功能性之外，对辅料的纯度及杂质控制显得尤为重要，而分析仪器作为质量控制的重要工具在药用辅料的安全性评价中起到非常重要的作用。 2015版中国药典为适应药品监督管理的需要，制剂通则中新增了药用辅料总体要求，除此之外共收载药用辅料各论270种，首次将上版药典附录整合为通则，并与药用辅料单独成卷作为《中国药典》四部。，加强药用辅料安全性控制。其中使用液相色谱对其进行质量控制的方法有36中，具体涉及品种列表如下： [仿制药一致性评价解决方案] 药用辅料质量控制的典型案例- 采用液相色谱测定药用吐温80 仪器系统： ACQUITY H-Class Bio System-ELSD 色谱柱： Oasis MAX，2.1x20 mm， 30 um， 流动相： A：2%FA in water， B：2%FA in异丙醇梯度洗脱： Time Flow(mL/min) %A %B %C %D Curve Initial 1.0 90 10 0 0 Initial 1.0 1.0 80 20 0 0 6 3.4 1.0 80 20 0 0 6 3.5 1.0 0 100 0 0 6 4.5 1.0 0 100 0 0 6 4.6 1.0 90 10 0 0 6 6.6 1.0 90 10 0 0 6 药用辅料质量控制典型案例 聚乙二醇(PEG)测定 聚乙二醇(PEG)是感冒糖浆和止咳糖浆等液态制剂中常用的添加剂，该添加剂赋予了这类糖浆制剂独特的质地。FDA要求药物生产商在药物生产过程中对API和NAPI进行监测，但是，由于没有紫外吸收发色团，PEG等成分的分析较为棘手。 借助ACQUITYQDa质谱检测器，可以与光学检测配合使用，显著降低无法检出某种样品成分的可能性，而质谱检测的分析可靠性能帮助您确认痕量成分，提升每次分析的质量和效率，不必再运行各种额外检测或其他耗时技术。 配合使用CORTECS C色谱柱与ACQUITYQDa质谱检测器分析止咳糖浆中的API及PEG， 有助于我们更快速地获取更多信息，从而更迅速、更明智地制定决策。 LC条件 1.对乙酰氨基酚(151.16) 2.PEG-6 (277.50)3.PEG-7 (321.50)4U.PEG-8V @ 280 n(m365.63) 0.20一5.PEG-9对 (409.82乙酰氨基酚USP分析方法)0.00 0 1 2 3 4 5 min 3 2 4 强1x1075 5个提取离子色谱图度 00 2 3 4 5 min LC系统 ACQUITYUPLCH-Class系统 质谱检测条件 ACQUITYQDa检测器 UV检测条件 ACQUITYUPLC PDA检测器(280nm) 色谱柱 CORTECS°C，2.7 pm， 3 x100 mm 色谱柱(部件号186008361) 柱温 30°C 样品温度 室温 进样体积 1pL 流速 0.6 mL/min 药用辅料大多是由一系列结构类似物组成的混合物，或大分子聚合物组成。2015版中国药典中相应品种项下要求对其分子量分布系数进行控制，保证聚合物辅料的物理及化学性能，具体品种如下： 序号 品种 色谱柱 检测器 检测项目 软件 类别 页码 1 乙交酯丙交酯共聚物(5050)(供注射用) 凝胶色谱柱 示差 分子量分布 GPC软件 药用辅料，缓释材料 445 2 乙交酯丙交酯共聚物(7525)(供注射用) 凝胶色谱柱 示差 分子量分布 GPC软件 药用辅料，缓释材料 446 3 乙交酯丙交酯共聚物(8515)(供注射用) 凝胶色谱柱 示差 分子量分布 GPC软件 药用辅料，缓释材料 447 沃特世 ACQUITY APC(Advanced Polymer Chromatography)超高效聚合物色谱系统是基于体积排阻色谱分离基本原理的突破性技术产品，结合小颗粒亚乙基桥杂化颗粒技术，以前所未有的分析速度为您提供更详尽的聚合物分子量信息。提供了无以伦比的分离度及峰值分辨率，这就意味着可以对分子量进行更好的表征，为聚合物分子量范围及批次间重现性的控制提供了更好的分析手段。 PC样品GPC分析和分析的对比谱图。 Empower独有的GPC数据处理选件，可快捷方便地浏览、比较和报告分析数据 AE ACQUITYAPC系统 体内评价分析解决方案 体内生物等效性研究是2015年仿制药一致性评价与以往最大的区别之一。在评价内容上，规定原则上企业应采用体内生物等效性试验的方法进行评价，大大增加了临床试验和生物样品分析的投入。2015年7月22日，国家食品药品监督管理总局(CFDA)发布《关于开展药物临床试验数据自查核查工作的公告》(2015年第117号)，截至目前，90%的品种申请被撤回。然而，这轮自查不单单是1622个品种之内的，对其他已经完成试验，并且提交申报，但没有获批生产的所有品种全部自查，仿制药一致性评价中的临床试验数据也全部需要接收核查。这一举措体现了监管部门对于数据真实性和完整性的高度重视，也对法规依从性生物分析提出了新的挑战。 UNIFI法规依从的生物分析平台满足全球对于创新、重磅炸弹药物及未来DMPK平台趋势的需求。整合业界领先ACQUITY UPLC系统和XevoTQ质谱家族，国际标准的Oasis和Ostro样品处理技术，以及UNIFI科学信息系统，沃特世为您小分子及大分子生物定量分析提供全套解决方案。 沃特世仿制药“生物等效性”实验样本分析平台 仿制药“生物等效性”实验样本分析平台 样品前处理 蛋白沉淀法 (Protein Percipitation) 液液萃取法(Liquid Liquid Extraction) 固相萃取法 (Solid-Phase Extraction) 反相固相萃取(Oasis°PRiMEHLB)： ·简便快速的方案，无需活化和平衡步骤 ·可去除95%以上的常见基质干扰物，降低基质效应 ·对各种分析物都具有高回收率 分离性能优异，提高峰容量，降低基质效应； 稳定性高； 提升质谱检测灵敏度及方法可靠性； 缩短项目周期，降低分析成本。 XEVO TQ系列串联四极杆质谱数据 Xevo系列质谱采用Z-spray"和StepWave专利离子传输技术，在提升灵敏度的同时增加抗污染能力，适用于复杂基质样品分析工作； 快速采样率和独有RADAR技术一针进样获取最全面的信息； 具有广泛的分子量扫描范围(2-2048m/z)，且无明显的高端质量歧视效应； 已合作承担了多个大分子药物的生物定量分析工作，灵敏度和稳定性优异。 临床样品生物分析 UNIFI仪器控制及数据处理系统 采用3D数据采集方式，有效的进行同位素和加合离子的匹配，降低假阳性； 自动解析二级碎片，直观显示化合物碎裂方式，提供工作效率； 自动进行反应位点确认，提高数据解析的准确性； 革新采用母离子、碎片离子、同位素匹配等功能进行元素组成分析，降低假阳性； [仿制药一致性评价解决方案] 一致性评价工作中色谱柱及常见耗材推荐 [体外评价]溶出度分析色谱柱推荐 色谱主 特色 推荐使用情境一 使用情境二 XBridge C8* 色谱柱耐受性最强(pH1-12) 分析条件pH>7，或含三乙胺，或高温>=40oC 固体制剂研发检测通用，耐受性强，允许使用较高柱温有利于辅料及SDS在柱内的溶解与流出 XTerra MS C18* 第一代杂化颗粒，耐受性次于 XBridge的“低价版” 同上 同上。 耐受性显著优于硅胶C柱，性价比高。 CORTECS C8* 高柱效、高分辨率 对分离度有较高要求 希望缩短柱长/分析时间而仍保持相当的分离效果 色谱柱规格【推荐用于溶出】 推荐使用情境 进样2~20pL，运行分析时间3~5分钟(进一步提高分析通量) 3.5/5 pm，4.6x50 mm 短柱有利于脂溶性辅料与SDS在等度条件下流出低柱压有利于过夜运行样品而不必担心样品析出超压时停泵 3.5/5 pm， 4.6x100 mm 进样2~50pL， 当进样体积较大，或者溶出液有紫外吸收时柱载量与使用优势介于50mm柱与150mm柱之间。 5 um， 4.6x150mm 进样50~100pL，需要较高柱载量时。 *以上填料基质也有C。、Phenyl等键合相。 [体外评价]有关物质研究色谱柱推荐 色谱柱 UPLCUHPLC HPLC Prep 应用特色 -实心核硅胶颗粒，柱效高，柱背压较低。 CORTECS：C18' -2.7 um 4.6x150 mm可兼容常规HPLC系统压力限制，提供最高分离性能。 色谱柱规格【推荐用于有关物质分析】 推荐使用情境 5 pm， 4.6x250 mm 经典常用柱规格 3.5 pm， 4.6x150 mm 柱效与5 pm，4.6x250mm相当(略低)，可节约分析时间目前使用主流。 2.5/2.7 pm， 4.6x150 mm 柱效高于5 pm，4.6x250mm， 在节约分析时间的同时进一步提供高分离度，目前主流趋势。注意! 2.5 um 4.6x150 mm规格柱压较高，需配合UHPLC使用。 <1.8 um， 2.1x100 mm UPLC 困难项目推荐使用150mm UPLC柱，以获得最高分离性能。 [体外评价]辅料检测色谱柱推荐 如感受到色谱柱耐用性或方法的局限，可考虑以下的替代方式作为内部SOP方法： 品种 原方法与色谱柱，问题 可考虑的替换方式 是否需要调整流动相体系 蔗糖 硅胶氨基柱：柱寿命差 XBridge Amide，柱耐受性强(pH2-11) 否【可能需要微调比例】 乳糖 硅胶氨基柱：峰塔板数低，柱寿命差 XBridge Amide， 柱耐受性强(pH2-11) 是【添加氨水或三乙胺】 纯硅胶柱：柱寿命差，填料受流动相腐蚀后 大豆磷脂 蛋黄卵磷脂 的碎片流失导致ELSD信号噪音明显增高 XBridge HILIC， 柱耐受性强(pH1-9) 否【可能需要微调比例】 (尖刺峰) 苹果酸 阳离子交换柱：柱寿命差，不稳定 T3柱，硅胶C 柱，操作简单方便且重现 是【磷酸盐水相pH2.7】 富马酸 C柱 T3， 与AQ柱相比键合相抗流失能力更强否 [体内评价]生物样本分析色谱柱及样品前处理推荐 色谱主 特色 使用情境二 XSelect [HSS] T3 特色硅胶C柱，增强对极性分子的反相保留 -目标药物或其代谢物极性较高，需增强其保留，以避免内源 生物样本分析常用色谱柱之一! 性物质干扰时 -实心核硅胶基质色谱柱色：2.7 pm为HPLC提供高柱效， 1.6 pm 需要LC高分离性能时，例如，目标分析物有结构相似内源性 为UPLC提供最高分离度 物质，或者存在同系物或同分异构体需要同时定量 CORTECS 与竞争品牌Kinetex 2.6 pm与Poroshell 2.7 pm壳核柱相比，柱 希望使用更短色谱柱代替原方法中的色谱柱规格，以提高分 背压更低 析通量 -18C18+CgT3， Phenyl等 -CCg+，表面带电技术，对碱性药物与肽药在甲酸体系下提供杰出 通用(C) 峰形 -碱性药物、肽(C) -T3， 选择性类似HSS T3， 结合了高柱效与极性保留的双重优势 -1极性分子(T3) - Phenyl，推荐用于芳香类药物 -芳香类药物如作用精神中枢类药物(Phenyl) - pH1-12，化学耐受性强，通用生高 XBridge [BEH] 允许使用氨水体系获得对碱性药物的更好保留、分离与更高灵 -通用性强 C8敏度 -碱性药物可考虑使用氨水体系获得更好保留与更高灵敏度 -T可耐受高柱温 XBridge BEH300 -300A孔径，适合更大的分子量的分析物 -1化学耐受性强，包括可耐受分析较大分子时通常所需的高柱温 -肽药/小分子蛋白药物 *18C4 条件 XSelect [CSH] - pH1-11，化学耐受性强，且可耐受高柱温 -对于不耐受高pH的碱性药物，在甲酸体系下提供杰出峰形 在甲酸体系下对碱性药物有杰出峰形 与灵敏度 C 允许甲酸/氨水体系切换且柱平衡快 一肽药(甲酸体系下峰形更佳) 中性及酸性强极性分析物首选，如糖/糖甙/糖醇类，核苷酸 XBridge [BEH] -pH2-11，化学耐受性强，且可耐受高柱温 类，有机膦酸类药物 按亲水作用机理，保留强极性分析物 一膦酸化代谢物 Amide -与样品处理流程兼容性更佳，有利于分析通量 -细胞代谢物(包括氨基酸等) -某些肽药亦可尝试 XBridge [BEH] -pH1-9，化学耐受性强，且可耐受高柱温 按亲水作用机理，保留强极性分析物 -碱性强极性分析物首选，如季铵类药物 -可卡因类等碱性药物，与样品处理流程兼容性更强，有利于 HILIC -与样品处理流程兼容性更佳，有利于分析通量 通量 -通常使用2.1x50/100mm规格，需要较大进样体积时选择3mm柱内径。填料根据LC平台与操作习惯， 选择项对应的<2 pm UPLC， 或2.5 pm/2.7 pm UHPLC， 或3.5 pm HPLC(CORTECS仅2.7 pm)。 -有相对应的插入式保护护，使用简便、可靠，且避免连接体体降低柱效与分离度。 [仿制药一致性评价解决方案] 样品前处理 特色 推荐使用情境 -反相吸附剂方法开发的首选 Oasis -去除常见基质干扰物及磷脂，分析数据更稳定(避免基质干扰) -血浆、尿样，需去除基质干扰时，通用性强 PRiME “亲水亲脂平衡”，无惧小柱干涸 -药物项目浓度低、要求检测灵敏度高，如缓释剂等 反相 HLB -特有的无需活化与平衡，更简便快捷 模式 -PH值范围1-10 -保留含有极性混合物的首选 Oasis HLB 具有水润性，可省略活化平衡操作 -血浆、尿液中含有极性化合物时，如：头孢菌素等抗生素 -PH值范围0-14 Oasis MCX 强阳离子反相混合机理，富集洗脱选择性更强 一·有机小分子碱性药物 -“亲水亲脂平衡”，无惧小柱干涸 -肽药* 反相 弱阳离子反相混合机理，富集洗脱选择性更强 -季铵类强碱性药物 Oasis WCX离子 -“亲水亲脂平衡”，无惧小柱干涸 - 肽药* 交换 复合 强阴离子反相混合机理，富集洗脱选择性更强 -有机小分子酸性药物 Oasis MAX 模式 -“亲水亲脂平衡”，无惧小柱干涸 -肽药* 弱阴离子反相混合机理，富集洗脱选择性更强 -有机膦酸/磺酸类强酸性药物 Oasis WAX “亲水亲脂平衡”，无惧小柱干涸 -肽药* -以上产品规格均有小柱(通常推荐1cc/30 mg)和96孔板形式。 -*肽药，需经过Oasis 2x4方法开发选择，并使用uElution 96孔板以避免样品挥干过程。关于肽药生物样本分析 (如奥曲肽、艾塞那肽、戈舍瑞林等等)， -沃特世有大量应用文献，欢迎垂询。 -如实验室同时开展代谢组学分析，推荐可同时沉淀蛋白并去除磷脂的Ostro 96孔去磷脂板(同时另可用于选择性的富集磷脂进行脂质分析)，请垂询沃特世获得相关文献与产品资料 三 Waters液相色谱柱及消耗品简要指南文献编号7120005101ZH 液相分析方法开发指南 SYMMETRY与XTERRA常规适用柱(相关USP品种列表) ACQUITY UPLC色谱柱手册文献编号720001140ZH 色耳 980 UHPLC色谱柱手册文献编号720005428ZH OBD制备色谱主文献编号720002336ZH 生物分析方法开发指南文献南号720004783ZH Ostro样品制备产品文献编号720003695ZH 样品瓶及附件文献编号720001818ZH 凝胶渗透色谱柱(GPC)手册文献编号720004331ZH HPLC色谱柱故障排查指南 Oasis参考卡文献编号720005685ZH 相关耗材产品及应用手册助您一臂之力。 欢迎登录 www.waters.com搜索文献号自行下载或联系我们索取电子版/纸质版： Wler Waters 沃特世色谱柱选择图表www.waters.com/selectivitychart 沃特世针式过滤选择器www.waters.com/filterselector 沃特世96孔选择器www.waters.com/plateselector 沃特世样品瓶选择器www.waters.com/vialsselector 沃特世糖分析方法选择器www.waters.com/amidemethod 沃特世OBD制备柱计算器www.waters.com/prepcalculator 沃特世科技(上海)有限公司 地址：上海市浦东新区金海路1000号 金领之都13栋 邮编：201206 电话：021-61562666 传真：021-61562777 北京分公司 地址：北京市朝阳区铜牛国际大厦 光华路15号院2号楼9层 邮编：100026 电话：010-52093866 传真：010-5293 2298 广州分公司 地址：广州市荔湾区中山七路50号 西门口广场1707-08室 邮编：510170 电话：020-28296555 传真：020-28296556 成都分公司 地址：成都市高新区科园南路88号天府生命科技园孵化楼C1栋411室 邮编：610023 电话：028-67653588 传真：028-67653580 沃特斯中国有限公司 地址：香港新界沙田科学园 科技大道西16号907-908室 扫一扫，关注沃特世微信 电话：852-29641800 传真：852-2549 6802 全国免费售后服务热线： 800(400)820 2676 www.waters.com Waters THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. Waters， The Science of What's Possible是沃特世公司的注册商标。其他所有商标均归各自的拥有者所有。 THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE， 仿制药一致性评价已成为制药行业热点话题，其具体工作的开展和实施对于提升我国制药行业整体水平，保证公众用药安全有效有着深远意义；与此同时，仿制药一致性评价还将推动制药行业供给侧改革，加快产业机构调整，从而增强我国制药企业的国际竞争力。开展仿制药质量与疗效一致性评价工作，全面提高仿制药质量是《国家药品安全“十二五”规划》的重要任务，根据《国务院办公厅关于开展仿制药质量和疗效一致性评价意见的通知》(国办发〔2016〕8号)的有关要求，国家基本药物目录(2012年版)中2007年10月1日前批准上市的化学药品仿制药口服固体制剂，应在2018年底前完成一致性评价。化学药品新注册分类实施前批准上市的其他仿制药，首家品种通过一致性评价后，其他药品生产企业的相同品种原则上应3年内完成一致性评价，逾期未完成的，不予再注册。按照国家食品药品监督总局公布的时间表，目前289个仿制药品种，需在2018年底前完成一致性评价，将涉及到1817家国内生产企业、42家进口药品企业。一致性评价对产业格局的影响绝不限于289个品种，将会对正在开展的仿制药研发、创新药研发产生更深层次的影响。医药企业在开展仿制药一致性评价工作中将面临“法规符合性”、“项目时限紧”、“任务重”等一系列问题。沃特世公司作为全球领先的分析实验室技术开发商及制造商，一直以客户为中心，关注用户的需求。我们愿意提供先进的分析技术、符合法规的信息化产品以及更好技术服务与支持，帮助制药更好地开展一致性评价工作。我们坚信一致性评价是制药企业而言是挑战更是机遇。