乙酰半胱氨酸系统适用性溶液中分离度检测方案(制备液相色谱)

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Agela Technologies博纳艾杰尔产品应用案例 乙酰半胱氨酸系统适用性溶液分析报告 AP10062 应用及技术服务部 摘要：本实验采用高效液相色谱 (HPLC) 法结合紫外检测器，按照客户提供方法，并选择Innoval ASB C18 (5 um， 100 A； 4.6×250 mm)色谱柱对乙酰半胱氨酸系统适用性溶液进行了测定。结果表明：在波长为205 nm， 流动相为0.5%硫酸铵缓冲溶液：甲醇=90∶10(v\v)，主峰峰形良好，各杂质间分离度符合检测要求。 关键词：高效液相色谱法；紫外检测器；；乙酰半胱氨酸； Innoval ASB C18色谱柱 前言 乙酰半胱氨酸是一种止咳化痰药物，主要用于术后咯痰困难，急、慢性支气管炎，支气管扩张，肺炎，肺结核，肺气肿等引起痰液粘稠和咯痰困难者。 表1.乙酰半胱氨酸有关物质信息 样品名称 英文名 结构式 分子式 分子量 CAS编号 乙酰半胱氨酸 N-Acetyl-L-cysteine HO C5H9NO3S 163.2 616-91-1 HS HN- L-胱氨酸(杂质A) L-Cystine HO. NH OH 1 C6H12N2O4S2 240.29 56-89-3 NH2 L-半胱氨酸(杂质B) L-Cysteine HS' OH C3H7NO2S 121.16 52-90-4 ( Email： s e r vi c e@ag e l a .co m. cn 网址： w w w .ag e la.co m . c n 客服：400-606-8099 ) 实验部分 仪器、试剂与材料 主要仪器设备 高效液相色谱仪，紫外检测器； 试剂材料 屈臣氏水；；甲醇为色谱纯；硫酸铵、庚烷磺酸钠、盐酸为分析纯； 乙酰半胱氨酸、胱氨酸(杂质A)、半胱氨酸(杂质B)、N，N'-二乙酰-L-胱氨酸(杂质C，样品为少量粘稠液体)、N，S-二乙酰-L-胱氨酸(杂质 D)、空白辅料：由某制药公司提供； 高效液相色谱柱： Innoval ASB C18； 5 um， 100 A； 4.6×250 mm。 样品制备 系统适用性溶液的配置：分别取乙酰半胱氨酸、胱氨酸(杂质A)、、斗半胱氨酸(杂质B)、N，N'-乙乙酰-L-胱氨酸(杂质 C)、N，S-二乙酰-L-胱氨酸(杂质D)适量，精密称定，用流动相溶解稀释配置成 0.5 mg/mL 的储备液(除杂质C)；取上述乙酰半胱氨酸、杂质A、杂质B、杂质D 储备液0.5 mL，杂质C储备液1.0mL， 至同一50 mL 容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀即得，系统适用性溶液。 辅料空白溶液：取适量空白辅料，精密称定，用流动相溶解稀释至 1.0 mg/mL溶液。 色谱条件 色谱柱： InnovalASB C18； 5 um， 100 A； 4.6×250mm； 流动相：0.5%硫酸铵缓冲溶液(取硫酸铵 5.0 g、庚烷磺酸钠 4.04 g， 加水稀释至1000 ( Email： s e r vi c e@ag e l a .co m. cn 网址： w w w .ag e la.co m . c n 客服：400-606-8099 ) mL， 7 mol/L 的盐酸溶液调节pH至1.4)：甲醇=9∶1； 流 ：11.0 mL/min： 波：205nm； 柱 温：30C： 进样量：：20uL。 结果与讨论 本实验采用 Innoval ASB C18 色谱柱对乙酰半胱氨酸系统适用性溶液进行了测定，由表2及图1、图2可知，在上述色谱条件下，待测物峰形良好，目标物与杂质、各杂质间分离度均符合实验要求。 表2.乙酰半胱氨酸系统适用性溶液测试结果 样品名称 化合物名称 保留时间(min) 理论塔板数 拖尾因子 分离度 备注 乙酰半胱氨酸 5.407 14600 0.99 乙酰半胱氨酸系统 杂质B 8.069 17078 1.08 12.48 杂质C 8.719 11530 0.98 2.27 图1、2 适用性溶液 杂质D 10.047 15311 0.96 4.08 空白辅料 杂质A 14.792 16627 0.91 12.09 图3 未知辅料1 5.394 14169 0.99 未知辅料2 14.648 18523 0.92 30.20 DAD1 A， Sig=205，4 Ref=360，100 (YY乙酰半胱氨酸0508 2015-05-08 17-24-07\006-0602.D) 图1.乙酰半胱氨酸系统适用性溶液高效液相色谱 图2.乙酰半胱氨酸系统适用性溶液高效液相色谱(纵坐标局部放大) 图3.乙酰半胱氨酸空白辅料高效液相色谱图 结论 本实验按照客户提供方法，采用 Innoval ASB C18色谱柱(5 um，100 A，4.6×250 mm)对乙酰半胱氨酸系统适用性溶液、空白辅料进行了测定。结果表明目标峰峰形良好，与各杂质间分离度均大于1.5，均可符合实验要求。 附：相关产品 产品名称 规格描述 包装数量 订货号 Innoval ASB C18 5 um， 100A； 4.6×250 mm 1支 IS952505-0 1.5mL样品瓶 短螺纹透明带书写处32×11.6mm 100/PK 1109-0519 1.5 mL样品瓶盖 9 mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色 PTFE 隔垫45°Shore A； 1.0 mm 100/PK 0915-1819 散孔滤膜 单膜，13 mm， 0.45 um 100个/包 AS021345-T 一次性注射器 2 mL无针头 100支/包 LZSQ-2ML 甲醇 4L/瓶，色谱纯 4x4L/箱 AH230-4 ( Email： s e r vi c e@ag e l a .co m. cn 网址： w w w .ag e la.co m . c n 客服：400-606-8099 ) 地址：天津经济开发区西区南大街 邮编：话： 传真：