橙汁中多菌灵和其它康唑类杀菌剂检测方案(液相色谱柱)

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引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：4006 165163橙汁中的多菌灵和其它康唑类杀菌剂 简介 本研究对橙汁中康唑类杀菌剂(包括多菌灵)测定的样品制备技术进行了验证。采用QuEChERS (DisQuEM)的样品制备步骤被证明在使用UPLC/MS/MS时适合用于五种10ppb水平的康唑类杀菌剂。经证实，固相萃取(SPE)可以减少干扰物并富集样品，从而便于使用HPLC/UV检测低ppb水平的多菌灵。 样品描述 所研究的杀菌剂包括：多菌灵、噻菌灵、抑霉唑、腈苯唑和苯醚甲环唑。这些分析物的结构如图1所示。这些化合物均为碱性，可以保留在Oasis@MCX混合模式阳离子交换吸附剂上进行SPE纯化。 康唑类杀菌剂的结构。 样品制备 使用QuEChERS进行初步提取。向50 mL离心管中加入15mL橙汁样品。加入15 mL 1%乙酸的乙腈(ACN)溶液，振荡离心管1分钟。加入用于AOACQuEChERS方法的DisQuE试剂袋的内容物，用力振荡1分钟。然后在3000rpm下离心5分钟。对于不使用SPE的UPLC/MS/MS分析，用水将0.5mL上清液稀释至1.0 mL。基本QuEChERS提取方案如图2所示。 QuEChERS提取DisQuE试剂袋 图1.使用专用于AOAC方法的DisQuE产品进行QuEChERS提取。 **2.0mL，用0.01NHCl稀释至8mL以进行SPE SPE净化 采用Oasis MCX固相萃取小柱可以对碱性化合物进行纯化，例如对康唑类杀菌剂。对于LC/UV分析(或者，当UPLC/MS/MS分析也需要进行纯化时)， 从QuEChERS提取物中取2mL上清液，加入6 mL 0.01MHCl水溶液，混合均匀。然后使用3 cc Oasis MCX小柱实施SPE纯化方案，如图3所示。用酸性水溶液稀释QuEChERS提取物，以增强混合模式SPE保留性能，同时水溶液稀释还能增强反相保留。 Oasis MCX 方案 图2.本研究中方案采用3cc规格的Oasis MCX SPE小柱。 用于质谱分析的UPLC条件 系统： ACQUITY UPLC H-Class 色谱柱： ACQUITY UPLC BEHCg 1.7 pum， 2.1 x100 mm 进样体积： 10pL 柱温： 40℃ 流动相A： 0.1%NH，OH水溶液 流动相B： 0.1%NH，OH甲醇溶液 流速： 0.40 mL/min 梯度： 初始条件为10%的流动相B，在4min内以线性梯 用于UV检测的HPLC条件(采用XP色谱柱) 系统： ACQUITY UPLC H-Class 检测条件： 光电二二管阵列(PDA) 色谱柱： XBridge@CgXP， 2.5 pm， 4.6x100 mm 进样体积： 50uL 柱温： 40℃ 流动相A： 20mM磷酸钾水溶液(pH6.8) 流动相B： 乙腈 流速： 1.3 mL/min 梯度： 初始条件为25%的流动相B，保持3.4 min，然后以线性梯度增加，在9.7 min时达到65%，保持至11.0min时，再以线性梯度增加，在11.7 min时达到95%，保持至13.0min时，然后线性返回25%至13.2 min。保持并重新平衡系统至18.3分钟时。 结果 化合物 加标 回收率 抑制 康唑类杀菌剂 浓度(ppb) %(RSD%) % 多菌灵 10 98.7(1.3) 16.1 噻菌灵 100 94.9(2.3) 28.9 抑霉唑利 100 97.3(0.9) 4.0 苯醚甲环唑 100 96.4(0.6) 9.7 腈苯唑 100 97.6(1.6) 8.6 多菌灵 1 94.5(4.2) 11.2 噻菌灵 10 97.8(4.1) 34.0 抑霉唑抑霉唑利 10 104(3.7) 15.2 苯醚甲环唑 10 92.6(6.5) 12.1 腈苯唑 10 95.2(4.9) 5.0 表1.使用专用于AOAC QuEChERS的DisQuE试剂袋得到的康唑类杀菌剂回收率数据总结(n=4)。采用Oasis MCX净化时，离子抑制显著减少(<2%)(未显示数据) 图3.每种杀菌剂以10 ng/g (ppb)(仅多菌灵为1 ppb)加标的橙汁，经DisQuE试剂袋提取物净化后的UPLC/MS/MS色谱图。 图4.经Oasis MCX纯化后按100 ng/g (ppb)加标的橙汁的DisQuE试剂袋提取物在XP色谱柱上获得的LC/UV (220nm)色谱图。 图5.用加入多菌灵的橙汁样品的DisQuE试剂袋提取物得到的LC/UV色谱图(281nm)。上方的色谱图未经SPE纯化，下方的色谱图采用Oasis MCX小柱进行了纯化。 图6.加入多菌灵的市售橙汁的UPLC/MS/MS和LC/UV对比。 订购信息 描述 部件号 ACQUITY UPLC BEH Cg 1.7pm， 2.1 x100 mm 186002352 XbridgeC XP， 2.5 pm， 4.6x100 mm 186006039 专用于AOAC QuEChERS方法的DisQuE试剂袋 186006812 Oasis MCX 3cc小柱 186000253 *.mL，用水按：稀释 系统： ACQUITY UPLC H-Class检测条件： 光电二极管阵列(PDA)色谱柱： XBridge® C18 XP, 2.5 μm, 4.6 x 100 mm进样体积： 50 μL柱温： 40 ˚C流动相A： 20 mM磷酸钾水溶液(pH 6.8)流动相B： 乙腈流速： 1.3 mL/min梯度： 初始条件为25%的流动相B，保持3.4 min，然后以线性梯度增加，在9.7 min时达到65%，保持至11.0 min时，再以线性梯度增加，在11.7 min时达到95%，保持至13.0 min时，然后线性返回25%至13.2 min。保持并重新平衡系统至18.3分钟时。色谱柱： ACQUITY UPLC BEH C18, 1.7 μm, 2.1 x 100 mm进样体积： 10 μL柱温： 40 ˚C流动相A： 0.1% NH4OH水溶液流动相B： 0.1% NH4OH甲醇溶液流速： 0.40 mL/min梯度： 初始条件为10%的流动相B，在4 min内以线性梯度增加至90%，保持5 min，在5.1 min时返回到10%。保持并重新平衡系统至7 min时。