核苷中保留与分离检测方案(液相色谱柱)

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LC Cafe espresso No.2017001 ADME色谱柱特性~对核苷进行分析的新评价方法~ Keywords ： ADME色谱柱、核苷、杂化型ODS色谱柱、高极性ODS色谱柱、羟基 键合金刚烷基的ADME色谱柱，对于极性化合物的保留与分离具有良好表现，因此适合于代谢产物的分析。目前为止，对于ADME色谱柱的特性，一直都是基于对10种标准物质的测定结果进行评价的(参照LC Cafe espresso No.2016005)。而本次，我们采用全新的评价体系，将核苷类化合物作为样品，分别使用CAPCELL PAK ADME、CAPCELL PAK C18 AQ、CAPCELL PAK C18 MGII、2款他社杂化型ODS色谱柱及1款他社高极性ODS色谱柱(粒径均为5 um)进行分析，考察各款色谱柱的溶出行为并进行比较。 HO、 立体选择性 图1 测定所用样品 测定结果请见下一页图2。分析条件如下。 (HPLC conditions】 Column size ：2.0 or 2.1 mm i.d.x150 mm Mobile phase ： 10 mmol/L HCOONH4 /CH3OH=95/5 Flow rate ： 0.2mL/min Temperature ：40C Detection ： UV 254 nm Inj. vol. ：1pL Sample dissolved in ：H0 (各100 ppm) 图2 各色谱柱分析所得色谱图 如图2，键合金刚烷基的CAPCELL PAK ADME色谱柱的保留能力最强。根据所得结果计算得到的参数见表1。将各款色谱柱对应的尿嘧啶核苷(峰1)、2'-脱氧尿苷(峰2)、鸟嘌呤核苷(峰3)与2'-脱氧鸟苷(峰5)的分配系数比进行比较，可知与其他C1g色谱柱相比， CAPCELL PAK ADME对应参数值最大，说明其对羟基具有优秀的识别能力；同时，将尿嘧啶核苷(峰1)与5-甲基尿苷(峰4)的分离系数比进行比较，可知ADME色谱柱对于甲基也具有适度的识别能力，因此对于疏水性化合物来说，具有与C1g色谱柱同等的保留与分离能力。 进一步， CAPCELL PAK ADME对于阿糖腺苷(峰6)与腺嘌呤核苷(峰7)的分离系数比也是最大的，说明其具有优越的立体选择性，对于非对映异构体等立体异构体的分离具有优势。 表1 各色谱柱所得参数 评价项目 羟基选择性 甲基选择性| 立体选择性 保留能力 a(2'-dU/U) a(2'-dG/G) a(5-MU/U) a(A/V) RT(A) 他社杂化型 ODS色谱柱A 5um 1.61 1.32 2.84 1.38 8.8 他社杂化型 ODS色谱柱B 5pm 1.61 1.36 2.73 1.32 15.6 他社杂化型 ODS色谱柱C 5um 1.63 1.36 2.77 1.33 18.8 CAPCELL PAK C18 MGII S5 1.60 1.33 2.73 1.34 14.6 CAPCELL PAK C18 AQ S5 1.62 1.37 2.75 1.33 15.0 CAPCELL PAK ADME S5 1.75 1.64 2.72 1.40 24.0 综上所述，与常规C18色谱柱相比，键合金刚烷基的ADME色谱柱更适合对高极性化合物进行保留与分离，因此可将其作为C18之外的第二选择色谱柱。 ADME色谱柱特性　～对核苷进行分析的新评价方法～Keywords : ADME色谱柱、核苷、杂化型ODS色谱柱、高极性ODS色谱柱、羟基键合金刚烷基的ADME色谱柱，对于极性化合物的保留与分离具有良好表现，因此适合于代谢产物的分析。目前为止，对于ADME色谱柱的特性，一直都是基于对10种标准物质的测定结果进行评价的（参照LC Café espresso No.2016005）。而本次，我们采用全新的评价体系，将核苷类化合物作为样品，分别使用CAPCELL PAK ADME、CAPCELL PAK C18 AQ、CAPCELL PAK C18 MGII、2款他社杂化型ODS色谱柱及1款他社高极性ODS色谱柱（粒径均为5 μm）进行分析，考察各款色谱柱的溶出行为并进行比较。如图2，键合金刚烷基的CAPCELL PAK ADME色谱柱的保留能力最强。根据所得结果计算得到的参数见表1。将各款色谱柱对应的尿嘧啶核苷（峰1）、2’-脱氧尿苷（峰2 ）、鸟嘌呤核苷（峰3）与2’-脱氧鸟苷（峰5）的分配系数比进行比较，可知与其他C18色谱柱相比，CAPCELL PAK ADME对应参数值最大，说明其对羟基具有优秀的识别能力；同时，将尿嘧啶核苷（峰1）与5-甲基尿苷（峰4）的分离系数比进行比较，可知ADME色谱柱对于甲基也具有适度的识别能力，因此对于疏水性化合物来说，具有与C18色谱柱同等的保留与分离能力。进一步，CAPCELLPAK ADME对于阿糖腺苷（峰6）与腺嘌呤核苷（峰7）的分离系数比也是最大的，说明其具有优越的立体选择性，对于非对映异构体等立体异构体的分离具有优势。综上所述，与常规C18色谱柱相比，键合金刚烷基的ADME色谱柱更适合对高极性化合物进行保留与分离，因此可将其作为C18之外的第二选择色谱柱。