核糖核酸酶A、细胞色素C、溶菌酶、牛血清白蛋白等样品中蛋白质含量检测方案(专用色谱柱)

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LC Cafe espresso No.2017002 1. Ribonuclease A Proteonavi S5的溶出行为~与他社色谱柱的比较~ Keywords ： Proteonavi、蛋白质、白蛋白、卵清蛋白、0.1vol% TFA Proteonavi S5是一款以孔径为30 nm的硅胶作为基材、键合C4基团的蛋白质·肽类化合物分析色谱柱。本次，以6种蛋白质(核糖核酸酶A、细胞色素C、溶菌酶、牛血清白蛋白、肌血球素、卵清蛋白)作为分析目标，将Proteonavi S5与键合C8基团的CAPCELL PAK Cg SG300 S5以及两款他社色谱柱一-键合联苯基色谱柱(孔径45nm， 粒径3.5um)和大孔径核壳型C18色谱柱(粒径3.6um) 进行对比，对这4款色谱柱的溶出行为进行了考察。 表1列出了实验所用的样品。 表1实验所用样品 Protein M.W.(kDa) pl Ribonuclease A (from bovine pancreas) 13.7 9.6 Cytochrome C (from equine heart) 12.4 10.1 Lysozyme (from chicken egg white) 14.3 11.4 Albumin (from bovine serum) 66.3 4.7 Myoglobin (from equine heart) 17.0 6.8 Ovalbumin (from chicken egg white) 42.7 4.5 实验所得色谱图请见下一页图1，液相条件如下。 流动相中添加了0.1 vol% TFA， 在水-乙腈系统下进行梯度洗脱，将各款色谱柱的溶出行为与Proteonavi S5进行对比。 (HPLC Conditions】 Column size ： 2.0 or 2.1 mm i.d. x 150 mm Mobile phase ： A) 0.1 vol% TFA， H2O B) 0.1 vol% TFA， CH3CN B20% (0 min)→70 % (25 min) Gradient Flow rate ： 0.2 mL/min Temperature ：40°C Detection ： UV 220 nm Inj. vol. ： 1 pL Sample dissolved in：H，O(1~3 and5： 1000 ug/mL each，4：2000 ug/mL， 6：3000 ug/mL) 图1 各款色谱柱所得结果 由图1可知，键合C4官能团的Proteonavi S5的保留能力与键合联苯基、C8及C18基团的色谱柱几乎相同，而键合联苯基的色谱柱对于酸性蛋白质白蛋白(pl=4.7)、核壳型大孔径C18色谱柱对酸性蛋白质卵清蛋白(pl=4.5)的回收率均较低，基本没有溶出。 另外，一般情况下，官能团烷基链越短，蛋白质的回收率越高，因此，与CAPCELL PAK C心SG300 S5相比，， FProteonavi S5所得色谱峰略高。同时，， CAPCELL PAK C。 SG300 S5和Proteonavi S5对于酸性蛋白质白蛋白和卵清蛋白均能得到良好溶出。 综上所述，键合C4基团的Proteonavi S5，对于酸性、中性、碱性蛋白质能取得与C18、C8色谱柱同等能力的保留与分离，同时能得到更高的回收率。 Proteonavi S5的溶出行为　～与他社色谱柱的比较～ 1Keywords : Proteonavi、蛋白质、白蛋白、卵清蛋白、0.1 vol% TFAProteonavi S5是一款以孔径为30 nm的硅胶作为基材、键合C4基团的蛋白质?肽类化合物分析色谱柱。本次，以6种蛋白质（核糖核酸酶A、细胞色素C、溶菌酶、牛血清白蛋白、肌血球素、卵清蛋白）作为分析目标，将ProteonaviS5与键合C8基团的CAPCELL PAK C8 SG300 S5以及两款他社色谱柱——键合联苯基色谱柱（孔径45nm，粒径3.5 μm）和大孔径核壳型C18色谱柱（粒径3.6μm）进行对比，对这4款色谱柱的溶出行为进行了考察。表1列出了实验所用的样品。实验所得色谱图如图1。流动相中添加了0.1 vol% TFA，在水-乙腈系统下进行梯度洗脱，将各款色谱柱的溶出行为与Proteonavi S5进行对比。由图1可知，键合C4官能团的Proteonavi S5的保留能力与键合联苯基、C8及C18基团的色谱柱几乎相同，而键合联苯基的色谱柱对于酸性蛋白质白蛋白（pI= 4.7）、核壳型大孔径C18色谱柱对酸性蛋白质卵清蛋白（pI= 4.5）的回收率均较低，基本没有溶出。另外，一般情况下，官能团烷基链越短，蛋白质的回收率越高，因此，与CAPCELL PAK C8SG300 S5相比， Proteonavi S5所得色谱峰略高。同时， CAPCELL PAK C8 SG300 S5和Proteonavi S5对于酸性蛋白质白蛋白和卵清蛋白均能得到良好溶出。综上所述，键合C4基团的Proteonavi S5 ，对于酸性、中性、碱性蛋白质能取得与C18、C8色谱柱同等能力的保留与分离，同时能得到更高的回收率。