抗菌药品中无菌检查有关冲洗量的探讨检测方案(集菌仪)

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江苏药学与临床研究 2005年第13卷第3期 常见抗菌药品无菌检查中有关冲洗量的探讨 钱文静①)张 玫 江苏省药品检验所 (南京 210008) 关键词：抗菌药品；无菌检查；薄膜过滤；冲洗量 中图分类号 R953 文献标识码 A 文章编号 1007-306(2005)03-63-03 在抗菌药品的无菌检查中，为了提高阳性检出率，确保人民的用药安全性，同时更好地与国际药典接轨，《中国药典》2000年版二部附录规定，对于药品监督部门的检验量为6瓶(支)或原料6份各0.5克，比1995年版《中国药典》所规定的2瓶(支)增加了3倍的检验量。由于这些抗菌药品具有大量的抗(抑)性性，在无菌检查中所采用的薄膜过滤法的检验过程中，究竟用多少毫升的冲洗液来冲洗才能完全灭活该类药品的抗(抑)菌活性，使阳性对照菌能够正常生长，既保证药品检验的准确可靠，又提高工作效率，已成为药品微生物检验人员所探讨的一个问题。我们对常见的38个抗菌药物进行了多次的实验，发现喹诺酮类抗菌药所需冲洗量最多，抗真菌药所需冲洗量最少，其它品种居中。 1 实验材料 1.1 仪 器 HTY全封闭无菌检测系统，HTY-2000A 型集菌仪，一次性使用全封闭集菌培养器是KDGB-330 型(用于粉剂)、KSF-330 型(用于针剂)，均为杭州高得泰林医疗器械厂生产。 1.2 菌 种 金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]、生包梭菌[CMCC(B)64941]、白色念珠菌[CMCC(F)98001]均由中国药品生物制品检定所提供。临用前取金黄色葡萄球菌营养琼脂斜面新鲜培养物、生孢梭菌的需气菌、厌气菌培养基的新鲜培养物、白色念珠菌的真菌琼脂斜面培养基的新鲜培养物各一白金耳，分别接种至营养肉汤、同种培养基与真菌培养基内，经相应的温度和时间培养后，用0.9%无菌氯化钠溶液作10倍系列稀释，制成每毫升含10~100菌落形成 单位数(CFU)的菌悬液。 1.3 培养基 硫乙醇酸盐流体培养基、营养琼脂培养基、肉汤培养基、真菌培养基、真菌琼脂培养基，均由中国药品生物制品检定所提供。 1.4 稀释液、冲洗液 0.9%无菌氯化钠溶液(或0.1%蛋白胨溶液)。 2 实验部分 2.1 对照用菌液的制备 取金黄色葡萄球菌营养琼脂斜面新鲜培养物、生孢梭菌的需气菌、厌气菌培养基的新鲜培养物、白色念珠菌的真菌琼脂斜面培养基的新鲜培养物各白金耳，分别接种至营养肉汤、同种培养基与真菌培养基内，经相应的温度和时间培养后，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释成每毫升含10~100菌落形成单位数(CFU)的菌悬液。 2.2 供试液的制备 取供试品6瓶(支)加入0.9%无菌氯化钠溶液100ml中使溶。如供试品是大输液可直接作为供试液。 2.3 实验方法 薄膜过滤法。将规定量的供试品全部过滤于抗菌药物专用的三联式集菌培养器中，用0.9%无菌氯化钠溶液(或0.1%蛋白胨水溶液)少量多次地冲洗滤筒滤膜，冲洗量根据具体品种而定。每次冲洗都应用力振摇滤器，以尽可能减少抗生素在滤膜上的吸附，使冲洗完全。抽干滤膜，将硫乙醇酸盐流体培养基和真菌培养基及阳性对照培养基分别加入集菌培养器中，按规定温度和时间培养。阳性对照应根据供试品特性不同加入不同的对照用菌10~100 CFU ，并观察记录24~48h(真菌24~72h)阳性菌生长情况，同时做阴性对照。 2.4 实验结果 对38个品种进行了多次实验，结果见表1。 表1 常见抗菌药物无菌检查所需冲洗液用量一览表 该类抗生素如用β内酰胺酶和薄膜过滤法联合应用只需450ml的冲洗量。 3 讨 论 3.1 喹诺酮类药物属于高效、速效、广谱的抗菌药，对包括厌氧菌在内的G阳性菌和G阴性菌都有很强的广谱抗菌能力，并对衣原体也有良好的抗菌作用。由于其抗菌谱广，抗菌作用强，故在无菌检查过程中往往需1000ml以上的冲洗液进行少量多次反复冲洗，才能完全灭活其抗菌活性。 3.2 β内酰胺类抗生素抗菌作用强，在无菌检查薄 膜过滤过程中必须用1500 ml左右的冲洗液冲洗阳性对照菌才能正常生长。大量的冲洗，不仅影响滤膜的孔径，使截留在膜上的细菌滤过，并且还使污染的细菌受到损伤，从而降低阳性检出率。2005年版《中国药典》拟规定，对该类药物可以采用β内酰胺酶与薄膜过滤联合应用的方法来进行无菌检查。我们做了大量的实验，用此方法只需要450ml无菌氯化钠溶液或450ml 0.1%的蛋白胨溶液冲洗，阳性对照即呈阳性，特别是用0.1%的蛋白胨溶液冲洗效 果较好，明显提高了工作效率和阳性检出率。 3.3 虽然氨基糖苷类抗生素的抗菌谱广，抗菌作用比较强，对G阳性菌和G阴性菌都有抗菌作用，但在无菌检查过程中对该类药物仅需750ml冲洗液来冲洗，阳性对照菌即可生长。 3.4 林可霉素类和大环内脂类抗生素由于对G阳性菌有很强的抗菌作用，在无菌检查过程中必须用1000ml的冲洗液冲洗才能完全灭活其抗菌活性，在各类抗生素无菌检查过程中，属于需多冲洗量的品种之一。 3.5 其他类的抗菌药，如抗厌氧菌药和醌类抗生素需750ml的冲洗液，抗真菌药需要500ml的冲洗液冲洗，阳性对照菌在规定的时间内即可生长。 3.6 同一品种不同剂型和不同规格所需冲洗量也各不相同，大规格的粉针剂比规格小的粉针剂和针剂所需冲洗量多。 3.7 在检查抗厌氧菌药物的过程中，计数生孢梭菌必须在厌氧的条件下进行，一般用硫乙醇酸盐流体培养基进行计数。培养时间尤为关键，一般培养15~18h，该菌呈米粒状悬浮在液体培养基中，便于点计。如果培养时间过长，菌落扩散就难以计数。 3.8 抗菌药品进行无菌检查时，应选择抗菌药品专用的培养器，如 KSF330、KDGB330、KAPY330 和NKF330，并在实验前用0.9%无菌氯化钠溶液或其它适宜的冲洗液少许、于三联式全封闭集菌培养器中，轻轻摇动培养器并保留片刻，使完全浸湿滤筒和滤膜，以减少抗菌成份在滤膜上的吸附，减低冲洗量。 4 小 结 从实验结果看出，不同品种的抗菌药物，由于其物理和化学性质的差异，所以在无菌检查过程中所需的冲洗量也有所不同。一般喹诺酮类和β-内酰胺类需1000~1500ml左右，但如果β酰酰胺类抗生素的冲洗液中加入β内酰酰酶则仅需要450ml的冲洗量；而抗真菌药所需冲洗量最少为500 ml；其它类抗菌药需750~1000ml的冲洗量。 ( 参考文献 ) ( 1 国家药典委员会会.中华人民共和国药典[S].二部，北京化学工 业出版社，2000：附录XIH无菌检查法. ) ( 2 国家药典委员会编.中华人民共和国药典[S].二部，2005：附录XH无菌检查法. ) ( (收稿日期：2005-01-18) ) 氧麻地喷鼻液的制备和临床应用 石壬伟① 张福康 常州市戚墅堰区人民医院 (常州 213011) 关键词：氧氟沙星；盐酸麻黄碱；地塞米松磷酸钠；鼻炎；喷鼻液 中图分类号 R942 文献标识码 A 文章编号 1007-306(2005)03-65-03 鼻炎是常见病之一，临床上治疗鼻炎的药物较少，且抗菌作用也不明显。氧氟沙星为喹诺酮类抗菌药，具有抗菌谱广、抗菌活性强、毒性低的特点。根据临床需要，我们研制了氧麻地喷鼻液，该制剂能有效地治疗鼻炎引起的各种症状，具有消炎、收缩血管、抗过敏的作用，用于治疗慢性鼻炎、过敏性鼻炎、鼻窦炎、副鼻窦炎，疗效较为显著，未见不良反应发生。为确保制剂质量，我们按《中国药典》(2000年版)相关标准进行质量控制。 1 处方的组成 氧氟沙星3g；盐酸麻黄碱10g；地塞米松磷酸钠1g；氯化钠5.5 g；羟苯乙酯0.3g；蒸馏水加至1000ml. 2 制备方法 称取氧氟沙星细粉加蒸馏水约200ml，同时滴加醋酸搅拌使恰溶解。另取羟苯乙酯加适量的热蒸 ·Tsinghua Tongfang Optical Disc Co.， Ltd. All rights reserved.