丝氨醇标准品中丝氨醇含量检测方案(气相色谱仪)

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丝氨醇毛细管气相色谱法的研究 郝文明 杨天祝 山东省化工研究院，济南：250014 摘要：用毛细管气相色谱法FID检测器，外标法定量对丝氨醇及其酯化产物的纯度进行了分析。用乙酸酐和吡啶对其进行衍生化，酯化率大于99.6%，生成的酯化产物用毛细管色谱法分析，其分离效率高，重现性好，检测结果准确，变异系数0.85%，在产品检测中取得满意的结果。 关键词：气相色谱法；丝氨醇；酯化反应 前言 丝氨醇(化学名称：2-氨基-1，3-丙二醇)是一种医药中间体，用来合成碘帕醇(医药名称碘必乐)的主要原料。碘帕醇是一种非离子造影剂，作为血液系统、淋巴系统、泌尿系统、神经系统诊断试剂，是一种新型的医药产品，在国外发达国家得到广泛应用。目前我国所用碘帕醇完全依赖进口，至此引起国内医药界专家学者的高度重视和极大的关注，其产品的国产化迫在眉睫。丝氨醇是碘帕醇的主要原料，在国际上只有印度一家公司在生产，国内尚未有生产厂家，其市场前景好，产品供不应求，价格较高。由山东省化工研究院精细化工研究中心研制开发的丝氨醇生产技术，属国际领先水平，产品质量能与国外媲美，但其质量控制问题目前我国无标准方法亦未见文献报道，经多次试验探索，建立了该产品的气相色谱分析法，该方法简捷、准确、是一种控制丝氨醇质量的有效方法。 试验 2.1.仪器与试剂 仪器：岛津 GC-14C 气相色谱仪带 FID 检测器，浙江大学N-2000 色谱数据工作站。 试剂：丝氨醇标准品含量≥99.5%(美国Sigma公司提供)，乙酸酐分析纯(山东省化工研究院提供)，吡啶分析纯(山东省化工研究院提供)，二氯甲烷分析纯(山东省化工研究院提供)。 2.2.色谱条件 毛细管柱：30m × 0.32mm(I.D)× 0.25umDB-17毛细管柱(J&W公司提供)，柱室温度：1：150℃.恒温 2min，以12℃/ min升至230℃，保持5min；检测器温度：260℃，汽化室温度：250℃；载气(N2)柱前压：120kpa，空气流量：450mL/min，氢气流量：50mL/min，分流比：1：50，尾吹：35mL/min，进样量：0.4ocL。 2.3.化化方法 准确称量丝氨醇样品1g左右(右确至±0.0002g)，于50mL以干燥好的分液漏斗中，量取5mL吡比和5mL乙酸酐倒入分液漏斗，在90℃恒温水浴上回流1小时，冷却后准确移取5mL二氯甲烷倒入分液漏斗，振摇，水洗3次弃掉水相，油状物供色谱分析。 2.4.丝氨醇标准曲线的配制 准确称量丝氨醇标准品0.0、0.3、0.5、1.0、1.5、2.0g(准确至±0.0002g)，分别至于 50mL以干燥好的分液漏斗中(同2.3所述的酯化方法)按上述色谱条件平行进样三次，以峰面积(Y)和质量浓度(X)进行线性回归，其相关系数r>99.8%。 3.结果与讨论 3.1.色谱柱的选择 丝氨醇的结构特性不适于用一般的色谱柱进行分离，曾选用3%OV-17ChromosorbW.AW.DMCS(60-80目)2m×3mm不锈钢柱，5%SE-30 ChromosorbW.AW.DMCS(60-80目)2m×3mm不锈钢柱对丝氨醇样品按2.3酯化方法进行处理后进样分析，在3%OV-17柱上丝氨醇峰与其后的杂质峰分不开，影响其定量的准确性。在5%SE-30柱上其丝氨醇峰形托尾严重，将其后的一杂质覆盖，又选用30mx0.53mm(I.D)×0.5umDB-1毛细管柱对丝氨醇样品按2.3酯化方法进行处理后进样分析，丝氨醇主峰托尾杂质峰分离效果差(见谱图1)。后选用30m ×0.32mm(I.D)×0.25umDB-17毛细管柱进行分析，其分离效果好，峰形对称(见谱图2)。 谱图1丝氨醇在30m×0.53mm(I.D)×0.5umDB-1毛细管柱上的峰形 eLin 谱图2丝氨醇在30m×0.32mm(I.D)×0.25umDB-17毛细管柱上的峰形 3.2.酯化条件的选择 丝氨醇的结构中含两个羟基和-一个氨基，极性较大，不适于直接色谱分析，故选用将其样品酯化的方法，先后比较了乙酰酐、丁酰酐、氯乙酰氯、吡啶等酯化试剂，选择不同的酯化时间0.25h、0.5h、1h、1.5h、2h和不同的温度50℃、60℃、80℃、90℃进行试验，在90℃恒温1h乙酰酐和吡啶对丝氨醇的酯 化效果最好，，丁酰酐也可以，但丁酰酐和吡啶酯化后的杂质较多。水浴温度低，酯化反应速度明显慢，结果不成线性。综合考虑，本试验选择乙酰酐和吡啶作为酯化试剂，在90℃恒温水浴上回流1h丝氨醇酯化完全。并按2.3所述的酯化方法进行了空白试验，其结果较为理想(见谱图3)。 谱图3丝氨醇在毛细管柱上的空白试验 3.3.标准曲线和线性范围 取丝氨醇0.0、0.5、1.5、5.0、10.0、30.0mg/mL的标准溶液，样品处理同2.3所述酯化条件，按2.2所述色谱条件进样分析，每次进样0.4oL，平行进样3次以峰面积(Y)和质量浓度(X)进行线性回归，丝氨醇的线性范围在0.8-26mg/mL 之间，相关性良好，其相关系数 r > 99.8%。 3.4.精密度试验 准确称取样品5份，样品处理同2.3所述酯化条件，按2.2所述色谱条件，根据峰面积外标法计算含量，丝氨醇含量的相对标准偏差(RSD)为0.85%，将测定完的样品密闭保存室温放置24小时和1个星期后再次测定其含量，丝氨醇含量的相对标准偏差(RSD)分别为1.41%和1.06%，说明本方法的精密度较好。 3.5.酯化方法的准确度试验 准确称取5份样品，准确加入 0.5mg/mL、5.0mg/mL、10.0mg/mL的丝氨醇标准品，样品处理同2.3所述酯化条件，按2.2所述色谱条件，根据峰面积外标法计算含量，丝氨醇的回收率在 81.2-97.3%之间，相对标准偏差 (RSD)为1.02-3.51%之间，说明本方法准确可靠。 3.6.样品的测定 取三批不同批次的丝氨醇样品其处理同2.3所述酯化条件，按2.2所述色谱条件，每批进样三次测得峰面积，根据标准曲线按外标法计算丝氨醇的含量，结果见表1 表1样品的测定 样品号 测定值% 测定平均% 变异系数% 1 99.6999.6399.62 96.68 0.061 2 97.2097.2697.12 97.19 0.25 3 94.34 94.2594.19 94.25 0.070 4.结论 采用将样品酯化的方法通过毛细管柱进行分离，外标法定量来计算丝氨醇的含量，并对其准确度和精密性进行了考察。本方法分离效果好，准确度高，精密性理想，取得了令人满意的结果。 - _