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第27卷增刊2008年5月Vol.27. Suppl.2008- 5分析试验室Chinese Journal of Analysis Laboratory 分析试验室Chinese Journal of Analysis Laboratory第27卷增刊2008年5月Vol.27. Suppl.Sur2008-5 HPLC 法测定氯化血红素片剂的含量 霍仕霞,闫目 明日*2.,黄 毅,张兰兰,刘晓东 (1.新疆石河子大学药学院,石河子832000;2.新疆维吾尔医药研究所,乌鲁木齐830049;3.新疆维吾尔自治区药物研究所,乌鲁木齐830002) 摘 要:建立高效液相色谱法测定氯化血红素片中的氯化血红素含量。采用Shimadzu VP-Ci8 (150 mm X4.6 mm, 5 um);流动相为V(甲醇、乙腈、水、醋酸):V(吡啶)=40.040.0:19.0:1.0:0.6流速:1mL/min;柱温:355℃:检测波长:399 nm。氯化血红素在0.2034~2.034 ug/mL 范围内呈良好的线性关系, r=0.9998,平均回收率为96.83%, RSD=1.24%。本方法可用于该制剂的质量控制。 关键词:氯化血红素;高效液相色谱法;二极管阵列检测器;含量测定 氯化血红素,又名氯高铁血红素,氯化铁卟啉,氯高铁原卟啉IX, 高铁原卟啉,高铁血红素等。从牛血、羊血及猪血中提取,分子式为 C34H2ClFeN404,其结构是一个铁螯合物,性质较稳定,结构见图1. 氯化血红素是一种生物铁,作为缺铁性贫血的天然补品及药物原料,它能被人体很好的吸收,无毒副作用,是现代医学公认的防治缺铁性贫血、吸收率高、效果好的生物铁源,无铁腥味,不刺激胃肠,具有较好应用开发前景。 图1 目前国内文献报道氯化血红素的含量测定的方法,大多采用紫外分光光度法,本文采用 HPLC/DAD 法测定氯化血红素片剂中氯化血红素的含量,取得了满意的结果。 实验部分 1.1 仪器与试剂 Shimadzu LC10 Avp 高效液相色谱仪,CTO-10Avp检测器,Class-VP色谱工作站, BP211D 电子天平(Sartorius), PB-10pH计(sartorius)。 甲醇、乙腈为色谱纯,醋酸、吡啶均为分析纯,水为重蒸水。 氯化血红素(Hematin Chloride)对照品由 Fluka公司提供,含量>98%;氯化血红素片(规格30mg/片,批号:020706,020707,020708)由新疆华丰源技术开发公司提供;辅料:微晶纤维素、硬脂酸镁、甘露醇等。 1.2 色谱条件及测定方法 Shimadzu VP-Ci8 (150 mm X4.6 mm),流动相:V(甲醇:(乙腈):V(水):V(醋酸):V(吡啶)=40.0:40.0:9.0:1.0:0.6;流速1mL/min;柱温:35℃;检测波长399nm;进样量:20匹L。 2 溶液的制备 2.1 供试品溶液的制备 取供试品0.250g(约相当于氯化血红素10mg),精密称定,置500 mL容量瓶中,用0.1 mol/L ( * 基金项目:国家中小企业创新基金(03C26216500444)项目资助 ) ( 作者简介:霍仕霞(1983-) , 女,研究生; E-mail: yanming21cn @sohu. com、huoshixia1983 @163. com ) 的 NaOH溶解并稀释至刻度,精密量取对照品的5mL置100mL容量瓶中,甲醇稀释至刻度。 2.2 对照品溶液的制备 取对照品10mg,精密称定,置500 mL 容量瓶中,用0.1 mol/L 的 NaOH溶解并稀释至刻度,精密量取对照品的5mL 置100mL 容量瓶中,甲醇稀释至刻度。 3 标准曲线和线性范围* 取对照品10 mg,精密称定,置500mL容量瓶中,用0.1 ml/L NaOH溶解至刻度,分别取此对照品的碱液1、3、5、7、10mL 置100mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,进样20uL,以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,用最小二乘法进行线性回归,得线性方程为y=179857x+21101=0.9998;表明氯化血红素的浓度在0.2034~2.034 ug/mL范围内线性关系良好。 4 检出限和定量限 在选定色谱条件下,按S/N为3时,对最低检测限进行测定,得氯化血红素的检测检为72 ng/mL; S/N为10时,对最低检出限进行测定,得氯化血红素的定量限为164 ng/mL 。 5 精密度试验(重复性、中间精密度) 5.1 重复性 在相同操作条件下同一人在短时间内测定结果的精密度。配制3个不同浓度的供试品溶液,每个浓度下取3份供试品,进行含量测定,结果RSD为0.22%。 5.2 中间精密度(重复性、中间精密度、重现性) 分别不同日期、不同的操作人员、不同的设备下测定氯化血红素片剂的含量,结果 RSD 分别为1.56%、0.44%、0.28%。 6 稳定性试验 取“2.1”项下氯化血红素的对照品溶液,在配制当天每隔0、1、2、4、8、10h进样1次,考察日内差异, RSD为1.59%(n=6);并于配制后连续3天进样,考察日间差异, RSD 为1.79%(n=4)。 7 回收率实验 取同一批号已测含量的样品(批号020707),按供试品制备项下制备供试品,称样量减半,在线性范围内选取高、中、低浓度分别为3、5、7mg3个浓度,按供试品制备项下操作,进样量20uL, 结果平均回收率为96.83%, RSD=1.24%(n=6). 8 空白对照实验 阴性对照溶液的制备精密移取0.1ml/L的NaOH溶液5mL 置100mL容量瓶中,甲醇稀释至刻度,作为阴性对照溶液,在相同的色谱条件下,进样20匹L,得色谱图见图2. 图2 对照品(a)、供试品(b)、阴性对照(c)色谱图 9 氯化血红素片剂含量测定 精密量取供试品和对照品,按溶液制备项下分别供试品溶液和对照品溶液。分别吸取供试品溶液和对照品溶液20uL,注入色谱仪,记录色谱图,按外标法以峰面积计算,即得,结果见表1。 表1 样品含量测定结果((n=3) 批号 含量测定(标示量/%) 020706 98.67 020707 98.86 020708 98.42 10 讨论 10.1 检测方法的选择 目前国内文献报道氯化血红素的含量测定方法,大多采用紫外分光光度法,本实验中采用HPLC/DAD 法易于监测氯化血红素中的有关物质,为质量标准的制定提供依据,故采用 HPLC法。 10.2 溶剂的选择 因氯化血红素溶于碱,通过稳定性考察,在碱性条件下,氯化血红素有降解产物生成,对不同浓度 NaOH进行考察,结果0.1 mol/L的 NaOH作为溶剂最佳,又考虑到氯化血红素在碱中的稳定性差,故样品配制时,先用0.1 mol/L 的NaOH溶解,再用甲醇稀释至所需浓度进行测定. 10.3 色谱柱的选择 试验中曾选用 YMC-pack ODS-Ci8 150 mmX6.05 um; ShimadzuVP-C: 150 mm ×4. 65 um 和 YMC-pack ODS-Ci: 150 mm X4.6 5um 进行分离试验。结果 Shimadzu VP-Ci: 150 mm ×4.65 {m分离效果最佳。 10.4 流动相的选择 氯化血红素是一个含有两个羧基的酸性化合物,因此流动相的选择对分离测定具有非常大的影响。比较了V(甲醇):V(乙腈):V(水):V(醋酸):V(吡啶)的比例分别为40.040.0:19.0:1.00.4) (40.040.0:19.0:1.010.5)((40.0:40.0:19.0:1.0:0.6)的3种系统,证实第3种作为流动相分离效果最好,所以确定以V(甲醇):V(乙腈):V(水):V(醋酸):V(吡啶)=40.040.0:19.01.01.6为本法的流动相。 ( 参考文献 ) ( 李兴春.中国生化药物杂志,1993,4: 59 ) ( 2] 于茂泉,宫爱君.上海预防医学杂志,2004,16(9): 424 ) ( 袁 曦,洪 清,陈 樱,中国药房,1994,5(6):36 ) ( 中国药典(二部).2005. . Ⅱ : Appendix(附录)VID ) —China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net
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继续免费阅读全文上海禾工科学仪器有限公司为您提供《氯化血红素片剂中氯化血红素检测方案(液相色谱仪)》,该方案主要用于化药制剂中含量测定检测,参考标准《暂无》,《氯化血红素片剂中氯化血红素检测方案(液相色谱仪)》用到的仪器有高效液相色谱仪、VERTEX VI500高效液相色谱仪。
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