硫酸庆大霉素中有效组分检测方案(离子色谱仪)

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瑞士万通应用专辑 离子色谱在药典中的应用 庆大霉素( Gentamicin )是从小单孢菌(Micromonospora purpurea)的发酵液中得到的混合物，主要含庆大霉素 C1、C1a、C2、C2a四个有效组分，它们在结构上是由脱氧链霉胺(Purposamine)和紫素胺，3-甲基-3-去氧-4-甲基戊糖胺缩合成的苷。庆大霉素对革兰氏阴性菌有较强的抑制作用，尤其对结核杆菌引起的感染性疾病等甚为有效。与其他氨基糖苷类抗生素一样，主要存在耳、肾毒副作用，必须严格控制庆大霉素的临床用量。因此，有必要建立庆大霉素灵敏、准确的分析检测方法。临床上使用的庆大霉素主要由 C1、C1a、C2、C2a、C2b五个活性成分组成，各组分的毒性和抗菌能力均有一定的差异，因此对该药中各组分相对含量的测定、有关物质的检查，对指导临床用药剂量、实现临床药物监测、保证药物疗效等方面具有重要的现实意义。 具体色谱条件为： 色谱普： PLRP-S色谱柱； 淋洗液： 60g/LNazSO4+1.75 g/L辛烷钠+1.34g/LNaH2PO4+8 mL/LTHF， 用磷酸调节 pH=3.0. 流速： 1.0mL/min；柱后衍生液：300mM NaOH， 流速：0.4mL/min； 进样体积：20pL； 柱温： 55℃： 检测器：871安培检测器。 gentamicin sulfate gentamicin Mol.formula R1 R2 R3 C1 C21H43N，0， CH CH： H C 1a C19H3gN，O， H H H C2 C20HaNgO， H CH H C 2a C20H41Ns0， H H CH C 2b C20H41N，0， CH H H 图12.硫酸庆大霉素样品的测定 样品处理方法： 准确称取 25mg 样品，用淋洗液定容至50ml，直接过英蓝超滤单元自动进样分析。 “英蓝技术”是瑞士万通开发的专用于离子色谱的前处理技术的总总，包括超滤、渗析、 基体消除、中和、阳离子去除、预浓缩等技术。本实验所采用的是“英蓝超滤技术”。“英蓝超滤技术”的核心是超滤池，超滤池内螺旋形的超滤通道被超滤膜一分为二， 下层流动的为样品原液，上层为超滤后的滤液，双通道蠕动泵为英蓝超滤系统提供动力，一个通道用来输送样品进入英蓝超滤单元螺旋超滤通道的下半层，通过压力差实现样品的超滤，超滤通道内下层样品中小于超滤膜孔径(0.2um)的离子或分子穿过超滤膜进入到上半层，另一个通道的蠕动提供动力将超滤后的滤液转移至离子色谱系统进行分析。整个超滤过程中只有不到20%的原溶液被过滤，其余的样品都流经超滤池后直接流到废液瓶中；样品和超滤后的滤液的流动方向均与超滤膜平行，被超滤膜截留的大颗粒会不断地被冲走，从而避免了膜堵塞，也大大减小了膜污染的风险。手动过滤时，样品流向与过滤膜垂直，过滤膜容易堵塞，，重复使用交叉污染大。 结论与建议： 1)柱温选用55℃，检测池温度为32℃。较低的柱温将会影响分离，使峰形展宽，并且基线不容易达到稳定。 2) RP-S 色谱柱的储存液为乙腈：水7：1。使用前先用乙腈：水1：：1冲洗色谱柱，然后再用淋洗液平衡色谱柱。使用结束后，依次用 乙腈：水 1：1，乙腈：水7：11冲洗色谱柱后保存。 3)样品及标准品的配制需要用淋洗液。