猪肉中喹诺酮类检测方案(固相萃取仪)

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睿科全自动固相萃取仪应用文集文集编号 FD0002 采用睿科 Fotector Plus 全自动固相萃取仪分析猪肉中的7种喹诺酮类药物 摘要 依据《GB/T21312-2007动物源性食品中14种喹诺酮药物残留检测方法液相色谱-串联质谱法》，建立基于 Fotector Plus 固相萃取分析猪肉中喹诺酮白检测方法，试样用Na2EDTA-Mellvaine 缓冲液提取，使用Fotector Plus 自动固相萃取系统和 WatersOasis HLB 固相萃取柱进行固相萃取柱净化后，用液相色谱-质谱/质谱法测定和确证，外标法定量，整体回收率在78~98%之间，RSD(n=4)在 2.9~6.0%之间。 简介 喹诺酮类(4-quinolones)， 又称吡酮酸类或吡啶酮酸类，是一类主要作用于革兰阴性菌的合成抗菌药。食用含喹诺酮药物残留的食品，可能使敏感菌群会受到抑制或杀死，从而使人体内微生物群的动态平衡遭到破坏，损害人类的健康，另外还能危害中枢神经，导致精神症状；还会影响软骨发育，形成尿结晶，导致肝损伤等多种危害。 多个国家对食品中喹诺酮的残留量进行了严格的控制，我国也加大了对喹诺酮残留的检测，睿科作为专业的全自动固相萃取，拥有雄厚的技术能力，利用 Fotector Plus 全自动固相萃取仪，根据《GB/T21312-2007动物源性食品中14种喹诺酮药物残留检测方法液相色谱-串联质谱法》建立喹诺酮类药物分析方法。 仪器与耗材 睿科 Fotector Plus 全自动固相萃取仪，液质联用仪 Agilent 1260+Agilent 6410 ESI， 氮气吹干装置。 Waters Oasis HLB 固相萃取柱(200mg，6mL)，乙酸乙酯、甲醇、乙腈均为 TEDIA 的色谱纯试剂。 Mellvaine 缓冲液：将1000mL0.1moL/L 柠檬酸溶液与625mL0.2moL/L 磷酸氢二钠溶液混合，调节 至 PH=4.0±0.5。 0.1mol/L Na2EDTA-Mellvaine 缓冲液：称取60.5g乙二胺四乙酸二钠放入1625mLMellvaine 缓冲液中。 标准品：纯度≥99%，环丙沙星、诺氟沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、达氟沙星、麻保沙星、沙拉沙星。 实验方法 称取 5g 匀浆好的猪肉样品于 50mL离心管中，加入20mL Na2EDTA-Mellvaine 缓冲液，1000r/min旋涡混合，超声提取10min， 10000r/min 离心 5min(温度低于5℃)，将上清液转移到80mL Fotector上样品中，重复提取二次，合并上清液 将 HLB 固相萃取小柱安装在 Fotector Plus 上，按照图1程序运行，浓缩至近干后用甲醇+三氟乙酸水溶液定容至1mL， 供 LC/MS 检测。 图1 Fotector Plus 固相萃取程序 实验结果与讨论 1. 7种喹诺酮类标准品的 MRM 图谱(图2) 图27种喹诺酮类标准品的 MRM 图谱 (40p g/L) 2. 在 10p g/kg 的加标水平下，样品经过前处理提取后，用 Fotector Plus 净化，整体回收率在78~98.3%之间， RSD (n=4)在2.9~6.0%之间，满足标准对回收率的要求，回收率如表1所示 表1加标回收率(%) 化合物 R1 R2 R3 R4 Avg RSD 伊诺沙星 91.4 86.3 81.5 95.7 85.2 4.1 氧氟沙星 80.2 85.2 91.0 87.5 86.0 4.5 培氟沙星 84.5 86.8 91.0 85.4 86.9 2.9 环丙沙星 85.1 94.9 98.3 88.4 91.7 洛美沙星 90.0 95.8 95.7 89.2 92.7 单诺沙星 86.4 92.8 88.7 90.0 89.4 恩诺沙星 78.0 79.8 78.0 84.1 92.5 5.5 3. 在用缓冲液提取，转移上清液时，应该避免将凝固的脂肪转移到上样瓶中。 4. Fotector-06C 能够自动的完成整个固相萃取流 程，从活化到上样，清洗样品瓶，洗脱，浓缩一步到位，省时省事； 5. Fotector-06C 采用全自动操作，固相萃取过程中可以排除操作带来的误差，能够获得手动固相萃取无法达到的 RSD 水平。 结论 利用睿科 Fotector Plus 全自动固相萃取系统能够很好的重现《GB/T 21312-2007动物源性食品中14种喹诺酮药物残留检测方法液相色谱-串联质谱法》，回收率在78~98%之间，RSD(n=4)在2.9~6.0%之间，符合GB/T21312-2007 中对分析结果的质量控制的要求。