饲料中黄曲霉毒素检测方案(固相萃取)

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Detection of Aflatoxin in food， feeds， Chinese crude drug and other matrix食品、饲料、药材等基质中黄曲霉毒素的检测 Detection of Aflatoxin in food， feeds， Chinese crude drug and other matrix 食品、饲料、药材等基质中黄曲霉毒素的检测 方案一：液相色谱荧光检测法 1.方法简介 黄曲霉毒素是由黄曲霉、寄生曲霉产生的一类高毒性代谢物，它们生长在土壤中并通过直接接触转移到天然产品中。自黄曲霉毒素被认定为是一种强致癌物质起，欧盟就规定了最大限量。本方法是采用Welchrom°免疫亲和柱净化， HPLC-FLD检测黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2， 此法适用于谷物、调味品、坚果、茶叶、咖啡、药材等基质。 2.前处理步骤 2.1均质 所有样品必须完全均质，以确保样品具有代表性(样品均质办法可咨询本公司)。 由于黄曲霉毒素B1和G1本来具有较强的荧光性，但接触水以后，发生荧光的淬灭现象，荧光性基本消失，很难用液相色谱检测出来，采用衍生的方法可使黄曲霉B1和G1的荧光性增强。光化学衍生装置不需要任何化学试剂，直接连接于色谱柱与荧光检测器之间，操作简单，检测结果准确，灵敏度高。 样品加标谱图(1ppb) 方案二：ELISA检测试剂盒法 1.试验原理 本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被黄曲霉毒素抗原，样本中黄曲霉毒素和此抗原竞争黄曲霉毒素的抗体，酶标二抗催化TMB底物显色，样本吸光值与其含有的黄曲霉毒素成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中黄曲霉毒素的含量。 2.适用范围 可定性、定量检测玉米、花生、饲料、食用油等样本中的黄曲霉毒素。 3.样本前处理步骤 可定性、定量检测玉米、花生、饲料、食用油等样本中的黄曲霉毒素。 饲料、玉米处理方法1.取3g粉碎样品，加入15mL样品提取液2；2.剧烈振荡10min；3. 3500r/min离心5min，或用普通 食用油处理方法 1.取5g食用油样品于小烧杯中； 2.用10mL石油醚(或是正己烷) 分次将试样转移至125mL分液 漏斗中； 3. 3500r/min离心5min，或用普通 滤纸过滤； 滤纸过滤； 3.准确加入15mL样品提取液1， 加塞振荡5分钟，静置分层，放 4.用去离子水按1：5比例稀释 出下层甲醇水提取液； (1份滤液+5份去离子水)； 4.上清液或滤液用去离子水按1：6比例稀释(1份滤液+6份去离子水)； 4.用去离子水按1：5比例稀释 5.取稀释后液体待测。 5.取稀释后液体待测。 (1份滤液+5份去离子水)； 5.取稀释后液体待测。 Detection of Aflatoxin in food， feeds， Chinese crude drug and other matrix 食品、饲料、药材等基质中黄曲霉毒素的检测 4.注意事项 5.操作步骤 1. 将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温(20~25℃)平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。 ( 6. 洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作 液 300I/孔，充分洗涤5次，每次间隔30s，用吸水纸拍干(拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破) 。 ) 2. 取出需要数量的微孔板，将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封，保存于2~8℃。不要冷冻。 3. 洗涤工作液在使用前也需回温。 ( 7. 显色：加入底物液A液75I/孔，再加底物液B液75I/孔，轻轻振荡混 匀，用盖板膜盖板后置室温避光环境反应15min~20min。 ) ( 8. 测定：加入终终液50I/孔，轻轻振荡混匀，设定定标仪于450nm处(建议用双波长450/630nm检 测 ，请在5min内读完数据)，测定每孔OD值 。 (若无酶标仪，则不加终止用目测法可进行判定)。 ) 结果判定有两种方法，粗略判定可用第1种方法，而定量判定用第2种方法。注意样本吸光值与其所含黄曲霉毒素成负相关。 1、用样本的平均吸光度值与标准值比较即可得出其浓度范围(ppb) 假设样本1的吸光度值为0.659，样本2的吸光度值为1.525，标准液吸光度值分别是： 0ppb为2.101； 0.1ppb为1.738； 0.3ppb为1.313； 0.9ppb为0.831； 2.7ppb为0.469； 8.1ppb为0.262。则样本1范浓度范围是0.9ppb~2.7ppb；样本2的浓度范围是0.1ppb~0.3ppb再乘以其对应的稀释倍数即可得出样本中黄曲霉毒素的浓度范围。 2、定量分析 (1)百分吸光率的计算 (2)标准曲线的绘制与计算 以标准品百分吸光率率纵坐标，以黄曲霉毒素标准品浓度(ppb) 的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中黄曲霉毒素实际量。 若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样本的准确、快速分析。(欢迎来电索取) 7、检测方法灵敏度、准确度、精密度 试剂盒灵敏度： 0.1ppb 回收率：花生：95±15%；饲料：85±15%；玉米：90±15%；食用油：95±15% 耗材清单 序号 货号 分类 描述 01 00827-116870 标准品 黄曲霉B1B2G1G2标准品 (GB/T5009.23-2006)1ml 02 00827-013938 标准品 黄曲霉B1标准品3mg/L1ml 03 00827-013939 标准品 黄曲霉B2标准品3mg/L1ml 04 00827-013940 标准品 黄曲霉G1标准品3mg/L1ml 05 00827-013941 标准品 黄曲霉G2标准品 3mg/L1ml 06 JY92-II 均质机 新芝超声波细胞粉碎机 07 01140-00032 Welchrom 免疫亲和柱 黄曲霉总量(B1、B2、G1、G2)3ml，15支 08 01140-01032 Welchrom 免疫亲和柱 黄曲霉总量(B1、B2、G1、G2、M1、M2)3ml，15支 09 01140-05032 Welchrom 免疫亲和柱 黄曲霉毒素B1 3ml，15支 10 01140-03032 Welchrom 免疫亲和柱 黄曲霉毒素M1 3ml，15支 11 00824-31001 固相萃取装置 12位方缸SPE装置 12 00824-20005 固相萃取配件 SPE转接头12个/包 13 00824-11105 一次性注射器 可用于大容量上样50支/盒50ml 14 REX-25A 真空泵 无油真空泵 25L/Min， 0.08Mpa 15 T0543-500G 缓冲盐 TCI吐温20500g/瓶 16 00836-00001 衍生装置 光化学反应器 17 00201-31041 HPLC色谱柱 UltimateXB-C18，4.6*150mm，5um 18 00808-01101 保护住卡套 分析柱卡套1pk 19 00201-11012 UHPLC色谱柱 UltimateUHPLC XB-C18， 2.1*100mm，1.8um 20 00808-04001 保护住芯 5um柱芯1pk 21 01140-00196 ELISA试剂盒 黄曲霉毒素总量96T 22 01140-00148 ELISA试剂盒 黄曲霉毒素总量 48T 23 01140-00596 ELISA试剂盒 黄曲霉毒素M1 96T 24 01140-00548 ELISA试剂盒 黄曲霉毒素M148T 25 01140-00448 ELISA试剂盒 黄曲霉毒素B1!96T 26 01140-00424 ELISA试剂盒 黄曲霉毒素B148T 27 01140-09002 酶标仪 RT6000 月旭材料科技(上海)有限公司 welch月旭科技 地址：上海张江高科技园区爱迪生路 号 B室网址： www.welchmat.com电话：真：