饲料中黄曲霉毒素检测方案(液相色谱仪)

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华谱科仪(北京)科技有限公司 华谱科仪(北京)科技有限公司 华谱科仪 S6000-FL液相色谱测定饲料中黄曲霉毒素 方案优势 1) 操作简便，分析快速 2) 检测限、定量限低于标准要求 3) 不同浓度加标回收率满足要求 4) 适用于不同基质饲料的检测，普适性好 项目背景 作为真菌毒素重要代表的黄曲霉毒素，是至今为止发现的毒性最大的真菌毒素，是世界公认的3大强致癌物质之一，已被世界卫生组织(WHO)的验证研究机构认定为 IA 级危险物，它对肝脏影响最大，并有致畸、致突变、致癌的风险。动物食用黄曲霉毒素污染的饲料后，在肝、肾、肌肉、血、奶及蛋中可测出极微量的毒素。因此饲料中黄曲霉毒素为必检项，其中黄曲霉毒素B族和G族的分析是饲料领域中的重要分析内容。 O 图1 黄曲霉毒素结构图 实验部分 样品前处理 根据国标GB/T30955-2014《饲料中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定免疫亲和柱净化-高效液相色谱法》的方法进行优化，具体处理结果如下所示。 提取：称取样品饲料50g(精确到0.1g)于250mL具塞锥形瓶中，加入5.0g氯化钠， 准确加入100mL 甲醇水(80%)，均质器告诉搅拌提取2min(也可用涡旋振荡器代替)。静置后，滤纸过滤，转移至10 mL离心管中，取2mL滤液，8mL水稀释，备用。 净化：将免疫亲和柱与 10mL 连接器相连，准确移取 10 mL 样品提取液注入连接器中，调节压力，使溶液以不超过2 mL/min 的流速通过免疫亲和柱，待溶液全部流出后，再以 10 mL纯水清洗柱子2次，弃去全部流出液，准确加入0.5 mL 甲醇2次，洗脱，流速不超过 1 mL/min， 准确加入 0.5 mL水2次，洗脱，收集全部洗脱液于离心管中，过0.22um 滤膜待测。 仪器配置与分析方法 液相条件 仪器配置 Acchrom S6000 组织器 S6110 四元泵 S6210进样器S6310柱温箱 S6440荧光检测器 色谱柱 Tnature C18，4.6×150 mm， 5 um 流动相 A：甲醇； C：水 流速 0.8 mL/min 进样量 20ul 柱温 30°℃ 检测波长 激发波长：265nm发射波长：360 nm 结果与讨论 1.标准品的测定 图2 饲料中黄曲霉毒素的测定色谱图(柱后衍生) 图2为在上述色谱条件下得到的四种黄曲霉毒素标准品色谱图，由图可知黄曲霉毒素在20分钟内出峰，峰形正常，分离度良女。取黄曲霉毒素标准品配制成不同浓度的标准溶液，以待测物峰面积为纵坐标，待测物浓度为横坐标绘制标准曲线，黄曲霉毒素在0.2-10ng/mL范围内线性良好，相关系数≥0.9999。 2.样品测定 图3 某品牌家禽饲料 2.50 图4某品牌家畜饲料 图5 某品牌水产饲料 选取某品牌的家禽饲料、某品牌家畜饲料、某品牌水产饲料样品进行检测，观察该方法是否有杂质干扰，结果如上图所示。由结果可知，对于不同种类的饲料，其基质中并无杂质干扰。 3. 回收率测定 选取低(0.8ppb)、中(1.6ppb)、高(16ppb)三个浓度进行加标回收率测定，每个浓度三次平行验证，检测结果见表1-3。由表可得，检测结果与加标回收含量一致，且RSD 结果在10%以内，说明该液相方法和前处理提取方法可行。 表1 低浓度阴性样品三次加标回收率及 RSD 值 均值) G2 0.2129ng/mL 0.2ng/mL 2.37 106.45 G1 0.1907ng/mL 0.2ng/mL 5.6 95.35 B2 0.2068ng/mL 0.2ng/mL 4.07 103.4 B1 0.2161ng/mL 0.2ng/mL 5.13 108.05 表2中浓度阴性样品三次加标回收率及 RSD 值 标品 测定值(三次平 加标量 RSD 回收率(%) 均值) G2 0.4167ng/mL 0.4ng/mL 4.46 106.45 G1 0.3892ng/mL 0.4ng/mL 6.49 97.30 B2 0.4115ng/mL 0.4ng/mL 4.69 102.88 B1 0.4371ng/mL 0.4ng/mL 4.59 109.28 表33高高浓度阴性样品三次加标回收率及 RSD 值 标品 测定值(三次平 加标量 RSD 回收率(%) 均值) G2 2.0672ng/mL 2ng/mL 0.98 103.36 G1 1.8917ng/mL 2ng/mL 4.09 94.59 B2 2.0952ng/mL 2ng/mL 2.15 104.76 B1 2.1603ng/mL 2ng/mL 4.89 109.28 4.检出限/定量限 取阴性样品加标后进行前处理步骤，测得检出限和定量限均符合标准要求，详见表4。 表4黄曲霉毒素检出限、定量限 检出限 标准检出限 定量限 标准定量限 (ppb) (ppb) (ppb) (ppb) 0.24 0.3 0.8 1 0.08 0.3 0.28 1 B1 0.16 0.2 0.4 B2 0.04 0.2 0.16 结论 使用华谱仪器及 Tnature 色谱柱按照国标方法，即可完成黄曲霉毒素的检测，其中因华谱荧光检测器的高灵敏度，使黄曲霉毒素各种类的检出限定量限均低于国家标准值，满足饲 料企业日常检测需求。 www.acchrom-tech.com ( 华谱科仪(北京)科技有限公司 热线电话：010-8410-9313 ) 邮箱： marketing@acchrom-tech.com 使用华谱科仪S6000-FL液相色谱，可以实现饲料中黄曲霉毒素的检测，黄曲霉毒素在0.2-10 ng/mL范围内线性良好，相关系数＞0.9999，低、中、高三个浓度的加标回收率均在95%-110%范围内，操作简便，适用于不同基质饲料中黄曲霉毒素的分析