饲料中氨基酸检测方案(蒸发光检测器)

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上海通微分析技术有限公司Unimicro (Shanghai) Technologies Co.，Ltd.地址：上海市浦东新区张江高科技园区松涛路489号C01座邮编：201203电话：021-3895358850801569(技术服务专线)传专：021-38953636邮箱： info@unimicrotech.com.cn网址： www.unimicrotech.com.cn 区带毛细管电泳-紫外检测法分离检测13种氨基酸 1.背景介绍 α-氨基酸不仅是组成蛋白质的基本单位，其代谢产物在生物体内也具有重要的生理功能。α-氨基酸也是食品、饲料等的检测指标之一。本实验参考了农业部标准《NY/T 3001-2016饲料中氨基酸的测定――毛细管电泳法》，采用柱前衍生法对待测样品进行衍生化，建立了区带毛细管电泳-紫外检测法实现了精氨酸、赖氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、脯氨酸、苏氨酸、丝氨酸、丙氨酸和甘氨酸共13种氨基酸的分离检测。本法如无特殊注明溶剂均为二次蒸馏水。 2.样品制备 单一氨基酸标准储备液：分别称取精氨酸、赖氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、脯氨酸、苏氨酸、丝氨酸、丙氨酸和甘氨酸各 0.0200 g，分别置于10 mL离心管中，准确加入10 mL 水溶解，分别得到浓度为 2.0 mg/mL 的13种氨基酸的单一氨基酸标准储备液。如有必要，，可在水浴锅中缓慢加热至60~70℃充分溶解。苯丙氨酸和酪氨酸标准储备液可保存2个月，其他氨基酸标准储备液可保存4个月。 氨基酸混合标准溶液：准确移取13种单一氨基酸标准储备液各 0.500 mL，混合，稀释定容到10 mL， 得到每种氨基酸的浓度均为 0.1 mg/mL 的氨基酸混合标准溶液。混合标准溶液可保存2周。 衍生化样品：准确移取氨基酸混合标准溶液 0.6mL于5mL离心管中，准确加入0.1 molL碳酸钠溶液 0.9 mL，准确加入1.6%(v/v)异硫氰酸苯酯(PITC)异丙酮溶液1.8mL，振荡，盖上盖子，室温静置反应 30 min， 用氮吹仪吹干，用3.3 mL 水溶解残留物，5000 r/min 离心5 min， 将上清液用 0.22 p.m滤膜过滤，得到氨基酸浓度为0.02 mg/mL 的衍生化样品。 3.测试条件 仪器 CE-1000 毛细管电泳仪 毛细管 熔融石英毛细管(内径75 um)， 55 cm (全长75 cm) 缓冲液 种类 磷酸氢二钠-磷酸二氢钠 β-环糊精 浓度 30mmolL 4 mmolL pH值 7.75 分离电压 -25kV 检测波长 254 nm 柱温箱温度 30.0℃ 进样压力 30 mbar 进样时间 5s 4.测试结果 4.1标准电泳图 图113种氨基酸标准电泳图 4.2线性范围 氨基酸 三字母缩写 单字母缩写 线性范围(%，w/w) 精氨酸 Arg R 0.5~10.0 赖氨酸 Lys K 0.25~10.0 酪氨酸 Tyr Y 0.25~10.0 苯丙氨酸 Pre F 0.25~10.0 组氨酸 His H 0.5~10.0 亮氨酸+异亮氨酸 Leu+Ile L+I 0.25~10.0 缬氨酸 Val V 0.5~10.0 脯氨酸 Pro P 0.25~10.0 苏氨酸 Thr T 0.25~10.0 丝氨酸 Ser S 0.25~10.0 丙氨酸 Ala A 0.25~10.0 甘氨酸 Gly G 0.25~10.0 5.结论 本实验参照国标条件，建立了区带毛细管电泳-紫外检测法，实现了分离检测精氨酸等13种氨基酸，方法可靠有效，快速方便，线性范围较宽，可以应用到日常检测当中。 6.配置列表 仪器配置 CE-1000 毛细管电泳仪(包括主模块、柱温箱和高压电源) Unimicro 色谱工作站 ●ciinu 融液 13 种氨基酸标准电泳图 线性范围：