三七中皂苷检测方案(液相色谱仪)

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应用简报 Agilent小分子药物Trusted Answers 使用 C18化学键合相的表面多孔填料色谱柱对三七进行分析 Rongjie Fu 使用 C18键合相的表面多孔颗粒液相色谱柱，通过 UHPLC 分析三七中的总皂苷提安捷伦科技有限公司取物。按照中国药典 (CHP) 规定的方法，将三七提取物中的总皂苷转移到 AgilentInfinityLab Poroshell 120， 3.0×100 mm， 2.7 pm 色谱柱中进行分析。 InfinityLabPoroshell HPH-C18 色谱柱在包括 SB-C18、EC-C18 和 HPH-C18 在内的三种不同 C18固定相中表现出最佳分离度。与采用 InfinityLab Poroshell HPH-C18， 4.6×250 mm， 4 um 色谱柱的原始方法相比，使用 InfinityLab Poroshell HPH-C18， 3.0×100 mm， 2.7 pm 色谱柱的新方法分析时间缩短了70%，而分析效果几乎相同。 三七是一种中草药，从19世纪末开始在中国广泛使用。由于三七和人参同属人参属，因此它们有许多相似的成分。三七中的重要成分有皂苷、多糖和氨基酸。三七中人参皂苷 Rb1、Rd 和 Rg1 的含量较高。中国药典 (CHP)规定用 HPLC 方法测定三七皂苷R1以及人参皂苷 Rg1、Re、Rb1和Rd(图1)，分析时间超过60分钟。 本文中， CHP 原始方法首先在 AgilentInfinityLab Poroshell HPH-C18， 4 pm 表面多孔填料色谱柱上运行，无需进行任何方法调整。为节约时间和溶剂用量，之后将方法转移到短色谱柱上。 ( 试剂与化学品 ) ( 所有试剂均为 HPLC 级或更高等级。HPLC 级乙腈购自J. T . Baker (CenterValley ， PA， U.S.A.)。水经由 E LGAPURELAB Chorus 系统 (High Wycombe，UK)纯化。三七皂苷R1以及人参皂苷Rg1、Re、Rb1和Rd来自中国食品药品检定研究究 (NIFDC，中国北京)。三七 总皂苷由中国当地供应商提供。供试品溶 液的配制方法是取25 mg 三七总皂苷置 于10mL容量瓶中，用70%甲醇溶解至 刻度，摇匀即得。 ) HO' HO HO HO OH 人参皂苷 Rb1 图1.本应用简报研究的皂苷结构 ( 仪器和材料 ) ( Agilent InfinityLab 接头 ) ( · 色 谱柱进样口： Agil e nt InfinityLabQuick Connect 快速连接接 头 (部 件号5067-5965) ) ( ·色谱柱出口： Agilent In f inityLab Quick Turn 接头：((部件号5067- 5966) ) ( Agilent Captiva 经济型过滤器， P TFE膜，直径13mm，孔径0.2 um (部 件号5190-5265) ) ( 安捷伦样品瓶，螺口，棕色，带书写 签，已认证，2mL，100/包(部件 号5182-0716) ) ( 安捷伦固定螺口盖，带 PTFE/红色硅胶隔垫(部件号5190-7024) ) ( Agilent InfinityLab 溶剂瓶，棕色， 1000mL ( 部件号9301-6526) ) ( Agilent InfinityLab Stay Safe 溶剂瓶 安全盖， GL45， 3 口， 1个放空阀(部件号5043-1219) ) ( Eppendorf 移液器和连续分液器 ) 人参皂苷Rd ( Agilent 1290 Infinity l l 高速泵 (G7120A) ) ( Agilent 1 290 I n finity I l Multisampler (G7167B) ) ( Agilent 1290 Infinity II MCT (G7116B) ) ( Agilent 1290 I nfinity II DA D (G7117B) ) ( Agilent Open L ab CDS， 版本 C.01.07 SR3 [465] ) 原始 CHP 方法是在 Agilent InfinityLabPoroshell HPH-C18， 4 um， 4.6×250 mm色谱柱上运行。该方法能够充分分离五种化合物，但运行时间过长，超过80分钟。为了节约时间和溶剂用量，将方法转移到柱长更短且填料粒径较小的 InfinityLabPoroshell HPH-C18， 2.7 pm， 3.0×100 mm色谱柱上。结果(图2) 显示出与 PoroshellHPH-C18， 4.6×250 mm， 4 um 色谱柱相近的分离效果。然而，分析运行时间缩短了70%，溶剂用量也减少了80%以上。 mAU 图2.三七总皂苷在 InfinityLab Poroshell HPH-C18， 4.6×250 mm， 4 pm 和3.0×100 mm， 2.7 m 色谱柱上分析得到的叠加色谱图 为了优化所有目标化合物的分离度，对 包括 InfinityLab Poroshell HPH-C18、InfinityLab Poroshell 120 EC-C18 和InfinityLab Poroshell 120 SB-C18 在内的三种不同C18色谱柱进行比较，比较结果如图3所示。HPH-C18对皂苷的保留较弱，但分离良好。几个小峰在 HPH-C18上得到了充分分离，而它们在SB-C18和EC-C18色谱柱上发生了共洗脱。 InfinityLab Poroshell HPH-C18，4 pm色谱柱成功分离了三七总皂苷中的皂苷，InfinityLab Poroshell HPH-C18， 2.7 pm色谱柱大大节约了时间和溶剂用量，并达到了与原始CHP 方法相近的分离效果。 InfinityLab Poroshell HPH-C18与Poroshell 120 SB-C18 和 Poroshell 120EC-C18 的选择性不同，前者在本应用中对三七皂苷实现了更出色的分离。 ( 1. T otal Notoginseng Saponins， ChinaPharmacopoeia2015，514 ) 图3.使用 InfinityLab Poroshell HPH-C18、120 EC-C18 和120 SB-C18 不同 C18固定相色谱柱的选择性比较 www.agilent.com 本文中的信息、说明和指标如有变更，恕不另行通知。 ( @安捷伦科技(中国)有限公司，2018 ) ( 2018年3月27日， 中国出版 ) ( 5991-9190ZHCN ) 摘要使用 C18 键合相的表面多孔颗粒液相色谱柱，通过 UHPLC 分析三七中的总皂苷提取物。按照中国药典 (CHP) 规定的方法，将三七提取物中的总皂苷转移到 Agilent InfinityLab Poroshell 120, 3.0 × 100 mm，2.7 μm 色谱柱中进行分析。InfinityLab Poroshell HPH-C18 色谱柱在包括 SB-C18、EC-C18 和 HPH-C18 在内的三种不同 C18 固定相中表现出最佳分离度。与采用 InfinityLab Poroshell HPH-C18, 4.6 × 250 mm, 4 μm 色谱柱的原始方法相比，使用 InfinityLab Poroshell HPH-C18, 3.0 ×100 mm, 2.7 μm 色谱柱的新方法分析时间缩短了 70%，而分析效果几乎相同。前言三七是一种中草药，从 19 世纪末开始在中国广泛使用。由于三七和人参同属人参属，因此它们有许多相似的成分。三七中的重要成分有皂苷、多糖和氨基酸。三七中人参皂苷 Rb1、Rd 和 Rg1 的含量较高。中国药典 (CHP) 规定用 HPLC 方法测定三七皂苷 R1 以及人参皂苷 Rg1、Re、Rb1 和 Rd，分析时间超过60 分钟。本文中，CHP 原始方法首先在 Agilent InfinityLab Poroshell HPH-C18, 4 μm 表面多孔填料色谱柱上运行，无需进行任何方法调整。为节约时间和溶剂用量，之后将方法转移到短色谱柱上。结论InfinityLab Poroshell HPH-C18, 4 μm 色谱柱成功分离了三七总皂苷中的皂苷，InfinityLab Poroshell HPH-C18, 2.7 μm 色谱柱大大节约了时间和溶剂用量，并达到了与原始 CHP 方法相近的分离效果。InfinityLab Poroshell HPH-C18 与 Poroshell 120 SB-C18 和 Poroshell 120 EC-C18 的选择性不同，前者在本应用中对三七皂苷实现了更出色的分离。