10 种化合物中超快速分离检测方案(液相色谱仪)

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利用 Agilent InfinityLab Poroshell120 EC-C18， 1.9 pm 色谱柱实现超快速分离 应用简报 农业、食品检测、·小分子药物 作者 摘要 Anne Mack 安捷伦科技公司 使用 2.1×50 mm， 1.9 pm Agilent InfinityLab Poroshell 120 色谱柱在0.3分钟内即可实现十种化合物的基勿分离，最低分离度达2.2。相比在 Agilent ZORBAXEclipse Plus C18， 4.6 ×250 mm， 5 pm 色谱柱上进行的相同分析， InfinityLabPoroshell 色谱柱能够使分析速度提高120倍，并节省98%的流动相。两种色谱柱具有相似的选择性，可轻松实现方法转移。 Agilent Technologies 表面多孔颗粒填料液相色谱柱是液相色谱领域常用的工具。相比全多孔颗粒填料色谱柱，表面多孔颗粒填料色谱柱能够在较低的压力下产生高柱效[1]。这主要是由于该色谱柱的传质距离更短并且填料颗粒的粒径分布明显更窄[2]。表面多孔颗粒填料的当前发展趋势是减小粒径以进一步提高柱效。更高的柱效能够加快分析速度并改善分析结果，分离度和灵敏度均有明显提高。 安捷伦进行了大量的工作提升优化液相色谱柱，确保轻松实现色谱柱的方法转换和扩展。全多孔颗粒填料Agilent ZORBAX 和表面多孔颗粒填料 Agilent InfinityLabPoroshell 色谱柱的固定相化学性质非常接近，因此无需进一步方法开发就能轻松更新方法[3]。 本研究表明相比于传统的5pm 分析柱， Poroshell 小颗粒填料柱能够改善烷基苯酮的分离度。证明了使用InfinityLab Poroshell 色谱柱可显著节省时间、溶剂和成本。 实验部分 本实验采用 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统。系统的标准配置经过改进，来减小系统体积和扩散。表1显示了配置的详细信息，并列出了本实验中所用的两种安捷伦液相色谱柱。 表2显示了用于所有分析的液相色谱方法参数。除快速1.9 um分析以外，所有方法均根据色谱柱体积进行了成比例缩放，以保持色谱柱与色谱柱之间的色谱分离效果。 ( 本研究中对十种化合物进行了分析。九种烷基苯酮标准溶液购自安捷伦。将购自 Sigma-Aldrich 的硫脲加入标 准品中作为死体积标记物。乙腈购自 Honeywell (Burdickand Jackson)。 水经 Milli-Q系统 ( M illipore ) 0 . 2 pm滤膜过 滤，电阻率18 MQ。 ) 35 pL溶剂混合器： Jet Weaver， 35 pL/100 pL (G4220-60006) 超低扩散针座组件，用于 Agilent 1290 Infinity 自动进样器 (G4226-87030) 自动进样器至加热器连接件：不锈钢毛细管， 0.075×220 mm， SV/SLV (5067-4784) 螺口盖棕色样品瓶，带书写签，经过认证，2mL， 100/包(5182-0716) 蓝色螺口盖，带 PTFE/红色硅橡胶隔垫，100/包 (5182-0717) 样品瓶内插管，250uL，带聚合物支脚的玻璃内插管，100/包 (5181-1270) ( 低扩散双热交换器， 1.6 p L (G1316-60005)加热器至色谱柱连接件： InfinityLab Quick Connect 快速连接接头，105mm， 0.075 mm (5067-5961) 色谱柱至流通池连接件：不锈钢毛细 管 ，0.075×220 m m， SV/SLV (5067-4784) ) 超低扩散最大光强卡套式流通池， 10 mm (G4212-60038) G4220A： B.06.53[0013] ( G4226A：A.06.50[0031 ) G1316C： A.06.53 [002] G4212A：B.06.53[00131 ( Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18， 4.6×250 mm， 5 pm ( 959990-902) Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C18， 2.1 × 50 mm， 1.9 pm (699675-902) ) 色谱柱 流动相 流速 (mL/min) 梯度 进样量 (pL) 样品 柱温箱(℃) 二极管阵列检测器 Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18， A)水 1.0 36分钟内 20 部件号5188-6529 25 254 nm， 80 Hz 4.6×250 mm， 5 pm B)乙腈 35-95%B (约1mL) +0.1 mL Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C18， 0.5 3分钟内 的1mg/mL硫脲 254 nm， 80 Hz 2.1×50 mm，1.9 pm 35%-95%B Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C18， 2.3 0.3分钟内 60 254 nm， 160 Hz 2.1×50 mm， 1.9 pm(快速) 50%-100%B 结果与讨论 最初对10种化合物的分离采用全多孔颗粒填料 AgilentZORBAX Eclipse Plus C18， 4.6×250 mm， 5 pm 色谱柱。该分离在36分钟内完成，最小分离度为6.1，分析结果如图1所示，还显示了相同的液相色谱方法转移到表面多孔填料颗粒 Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C18， 2.1×50nm， 1.9 pm 色谱柱后得到的结果。 ZORBAX Eclipse Plus C18 和 InfinityLab Poroshell 120 EC-C18 的键合相非常类似，总体选择性高度相关，因此无需改变方法。然而，由于色谱柱尺寸不同，因此对于体积较小的色谱柱，对梯度、流速和进样量进行了成比例缩放。对于InfinityLab Poroshell 1.9 pm 色谱柱，提高流速以匹配该小颗粒填料色谱柱的最佳流速。得到色谱图的时间仅需此前的1/12，使用的流动相减少了96%，样品量减少了95%，并且最小分离度仍为 5.5。 图1.将采用Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18， 4.6×250 mm， 5 pm色谱柱分析烷基苯酮的方法转移至高性能Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C18，2.1×50 mm， 1.9pm 色谱柱，可显著改善分析结果，节省大量的时间、样品、溶剂和成本 使用较小的表面多孔颗粒填料的优势在于，它们可提供非常高的柱效和分离度。这一高性能使得分析人员可以运行超快速分析方法，只要液相色谱系统的压力上限允许。图2显示出 InfinityLab Poroshell 1.9 pm色谱柱的性能达到极限。通过提高温度来降低流动相粘度，使得流速可以提高至2.3 mL/min， 产生 1150 bar 的反压。相比于之前的方法，梯度略有调整，以确保该色谱柱对包含 10种组分的样品实现速度最快的分离。结果显示，10种化合物均在0.3分钟内实现分离，最小分离度达到2.2。相比于 Eclipse Plus 250 mm， 5 pm 方法，该分析速度提高了120倍，所用流动相减少了98%，同时最小分离度不变。 表3显示了所有色谱结果的总结和比较。 mAU： 图2.通过在接近压力上限的条件下运行高性能 Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C18， 2.1×50 mm， 1.9 pm 色谱柱能够节省额外的时间、溶剂和成本，且不影响方法性能 表3.采用不同液相色谱柱对烷基苯酮进行分析的结果比较 最小 条件峰容量 色谱柱 压力 (bar) 分离度 (nC) 分析时间(min) 流动相消耗量(mL) Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18， 181 6.1 134 36 原始采用5 pm 柱分析 36 原始采用 5 pm 柱分析 4.6×250 mm， 5.0 pm Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C18， 420 5.5 91 3.0 分析速度比原始5 pm柱 1.5 使用的流动相比原始5 pm 柱 2.1×50 mm，1.9 pm 提高了12倍 减少了96% Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C18， 1150 2.2 43 0.3 分析速度比原始5pm柱 提高了120倍 0.69 使用的流动相比原始5 um柱 减少了 98% 结论 高效的 Agilent InfinityLab Poroshell 120， 1.9 pm 色谱柱可用于改善采用传统色谱柱(例如 Agilent ZORBAX Eclipse PlusC18， 5 pm 色谱柱)的现有方法分析结果。 InfinityLabPoroshell 和ZORBAX 系列产品具有相似的键合相化学性质，因此可轻松转移方法，通常无需进行额外的方法开发。在液相色谱系统压力上限允许的情况下， InfinityLabPoroshell 1.9 pm 色谱柱可以达到极致实现超快速分离，与传统液相色谱柱相比，能够节省大量的时间、溶剂、样品和成本。 ( 参考文献 ) 1. A. Gratzfield-Hugsen， E. Naegele。 使用 Agilent InfinityLabPoroshell 120 色谱柱最大限度地提高柱效。安捷伦科技公司应用简报，出版号5990-5602CHCN， 2016 2. V.R. Meyer. Practical High Performance LiquidChromatography. Fourth Edition， p. 34. Wiley (2004) 3. Poroshell 120 EC-C18 色谱柱和 ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱间的方法转移。安捷伦科技公司应用简报，出版号5990-6588CHCN， 2011 更多信息 这些数据仅代表典型的结果。有关我们的产品与服务的详细信息，请访问我们的网站 www.agilent.com. 查找当地的安捷伦客户中心：www.agilent.com/chem/contactus-cn 免费专线： 800-820-3278，400-820-3278(手机用户) 联系我们： LSCA-China_800@agilent.com 在线询价： www.agilent.com/chem/erfq-cn www.agilent.com 安捷伦对本资料可能存在的错误或由于提供、展示或使用本资料所造成的间接损失不承担任何责任。 本文中的信息、说明和技术指标如有变更，恕不另行通知。 @安捷伦科技(中国)有限公司，2016 2016年11月2日，中国出版 5991-7540CHCN 摘要使用 2.1 × 50 mm, 1.9 μm Agilent InfinityLab Poroshell 120 色谱柱在 0.3 分钟内即可实现十种化合物的基线分离，最低分离度达 2.2。相比在 Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18，4.6 × 250 mm，5 μm 色谱柱上进行的相同分析，InfinityLab Poroshell 色谱柱能够使分析速度提高 120 倍，并节省 98% 的流动相。两种色谱柱具有相似的选择性，可轻松实现方法转移。前言表面多孔颗粒填料液相色谱柱是液相色谱领域常用的工具。相比全多孔颗粒填料色谱柱，表面多孔颗粒填料色谱柱能够在较低的压力下产生高柱效。这主要是由于该色谱柱的传质距离更短并且填料颗粒的粒径分布明显更窄。表面多孔颗粒填料的当前发展趋势是减小粒径以进一步提高柱效。更高的柱效能够加快分析速度并改善分析结果，分离度和灵敏度均有明显提高。安捷伦进行了大量的工作提升优化液相色谱柱，确保轻松实现色谱柱的方法转换和扩展。全多孔颗粒填料 Agilent ZORBAX 和表面多孔颗粒填料 Agilent InfinityLab Poroshell 色谱柱的固定相化学性质非常接近，因此无需进一步方法开发就能轻松更新方法。本研究表明相比于传统的 5 μm 分析柱，Poroshell 小颗粒填料柱能够改善烷基苯酮的分离度。证明了使用 InfinityLab Poroshell 色谱柱可显著节省时间、溶剂和成本。结论高效的 Agilent InfinityLab Poroshell 120，1.9 μm 色谱柱可用于改善采用传统色谱柱（例如 Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18，5 μm 色谱柱）的现有方法分析结果。InfinityLab Poroshell 和 ZORBAX 系列产品具有相似的键合相化学性质，因此可轻松转移方法，通常无需进行额外的方法开发。在液相色谱系统压力上限允许的情况下，InfinityLab Poroshell 1.9 μm 色谱柱可以达到极致实现超快速分离，与传统液相色谱柱相比，能够节省大量的时间、溶剂、样品和成本。