食品中脂肪酸甲酯检测方案(气相色谱仪)

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应用简报食品检测与农业 快速分离脂肪酸甲酯采用 DB-FastFAME Intuvo 气相色谱柱 Yun Zou 安捷伦科技(上海)有限公司 中国上海，邮编200131 脂肪酸甲酯(FAME) 的分析可用于鉴定食品中的脂类组分，是食品分析中最重要的应用之一。本应用简报介绍了采用配备 Agilent J&W DB-FastFAME Intuvo 气相色谱柱的 Agilent Intuvo 9000 气相色谱系统对 FAME 混标实现快速、良好的分离。 对油类、脂肪和含脂食品的分析是政府实验室、质量控制(QC)实验室或合同研究组织 (CRO)实验室的常见任务。测定食品中的总脂肪与反式脂肪含量时，对脂肪酸及其 FAME 衍生物的气相色谱分析是脂肪表征的重要工具12。许多用于食品(如食用油)检测的法规方法中，在测定脂肪酸组成时都要求使用涂覆氰丙基固定相的毛细管柱对特定的顺反脂肪酸异构体进行分离。此外，实现良好的 FAME 分离还需较长的气相色谱柱(100米)和较长的分析时间(超过70分钟)34。然而，这种方法分析效率较低且分析成本较高。 为此，我们专门设计了采用氰丙基固定相的 DB-FastFAME Intuvo 气相色谱柱，可实现 FAME 混合物的快速分离(包括分离一些关键顺反异构体)，且能满足法规方法的要求。本应用简报简述了采用 DB-FastFAME Intuvo 气相色谱柱和 Intuvo 9000 气相色谱系统快速分析FAME 混标。 试剂与标准品 FAME 36 组分混合物((部件号5191-4276)、C4-C24偶数碳饱和FAME 混合物(部件号5191-4278)和菜籽油 FAME混合物(部件号5191-4277)均来自安捷伦科技公司。37组分 FAME混标(部件号 CDAA-252795-MIX-1mL)购自上海安谱科学仪器有限公司。 将 C4-C24偶数碳饱和 FAME 混合物用己烷稀释至500pg/mL。菜籽油 FAME混合物为100 mg 净混合物，用二氯甲烷稀释20倍。 仪器 使用配备火焰离子化检测器(FID)的Intuvo 9000 气相色谱仪进行分析。使用配备5pL进样针(部件号 G4513-80213)和分流/不分流进样口的 Agilent 7693A自动液体进样器进样。 表1.方法1的条件 气相色谱系统 Intuvo 9000 GC/FID 色谱柱 J&W DB-FastFAME， 20 mx0.18 mm， 0.20 pm 色谱柱， Intuvo 模块(部件号 G3909-63005) 载气 氦气， 50 psi， 恒压模式 进样口 分流/不分流，260℃， 分流比100：1 柱温箱 50℃(保持0.3 min)， 以250℃/min 升至175℃， 以20℃/min 升至240℃(保持2min) 芯片式保护柱 200°℃ FID 260℃， 氢气：40mL/min空气： 400 mL/min 尾吹气：25mL/min 进样量 1 pL 表2.方法2的条件 气相色谱系统 Intuvo 9000 GC/FID 色谱柱 J&W DB-FastFAME，20 mx0.18 mm， 0.20 pm 色谱柱， Intuvo模块(部件号 G3909-63005) 载气 氢气，28 psi， 恒压模式 进样口 分流/不分流，260℃，分流比100：1 柱温箱 50C (保持0.3 min)， 以 200°C/min 升至200°℃(保持0.4 min)； 以20°C/min升至240℃(保持1min) 芯片式保护柱 200℃ FID 260℃，氢气： 40mL/min 空气：400mL/min 尾吹气： 25mL/min 进样量 1pL 表3.方法3的条件 气相色谱系统 Intuvo 9000 GC/FID 色谱柱 J&W DB-FastFAME， 20 mx0.18 mm， 0.20 pm 色谱柱， Intuvo 模块(部件号 G3909-63005) 载气 氦气，32 psi， 恒压模式 进样口 分流/不分流，260℃，分流比100：1 柱温箱 50℃(保持0.3min)，以250°C/min 升至175℃， 以10℃/min 升至190℃(保持0.5 min)， 以13℃/min 升至240℃ (保持2min) 芯片式保护柱 200℃ FID 260℃， 氢气： 40 mL/min 空气：400 mL/min 尾吹气：25mL/min 进样量 1pL 结果与讨论 FAME 36 组分混标专门为模拟多种食品样品的脂肪酸组成而设计，可用于鉴定多种食品中的关键 FAME。该混标中包含 C4：0至 C24：1 范围的 FAME， 包括多数重要的饱和、单不饱和及多不饱和 FAME。该混标中不包含二十三烷酸甲酯 (C23：0)，这是以前用作内标的一种 FAME。图1所示为 FAME 36 组分混合物在20m×0.18mm、0.20 um DB-FastFAME Intuvo气相色谱柱上的分离结果。该方法采用氦气作为载气， 可在5分钟内实现所有化合物的分离，包括关键 AOAC 对，R>1.5。 气相色谱系统 Intuvo 9000 GC/FID 色谱柱 J&W DB-FastFAME，20mx0.18 mm，0.20 pm 色谱柱， Intuvo 模块(部件号 G3909-63005) 载气 氢气， 18 psi， 恒压模式 进样口 分流/不分流，260℃， 分流比100：1 柱温箱 50℃(保持0.3min)， 以150℃/min 升至185℃(保持0.5 min)，以15℃/min升至 230℃(保持5 min) 芯片式保护柱 200°C FID 260℃， 氢气：40 mL/min空气：400 mL/min 尾吹气：25mL/min 进样量 1pL 表5.流路备件 样品瓶 棕色，带书写签，经认证，2mL，螺口盖样品瓶套装(部件号5182-0554) 隔垫 不粘连进样口隔垫， BTO(部件号5183-4757) 芯片式保护柱 芯片式保护柱， Intuvo，分流/不分流进样口(部件号G4587-60565) 衬管 带玻璃毛的安捷伦超高惰性进样口分流衬管(部件号5190-2295) min 图1.采用方法1并以氦气作为载气时在20 mx0.18 mm， 0.20 um DB-FastFAME Intuvo 色谱柱(见表1)上得到的 FAME 36组分混合物的 GC/FID 色谱图 图2所示为菜籽油 FAME 混合物的典型GC/FID 色谱图。采用这种方法获得了良好的峰形和分离度，且分析时间为5分钟。 采用氢气作为载气，，可在4分钟内完全分离 C4-C24偶数碳饱和 FAME 混合物和FAME 36组分混合物(图3和图4)。 这表明使用该色谱柱可实现快速样品通量，且分离度不受影响。 时间 (min) 图2.采用方法1并以氦气作为载气时在 20mx0.18 mm， 0.20 pm DB-FastFAME Intuvo 色谱柱(见表1)上得到的菜籽油 GC/FID 色谱图 时间(min) 图3.采用方法2并以氢气作为载气时在20mx0.18 mm，0.20 pm DB-FastFAME Intuvo色谱见(见表2)上得到的 C4-C24偶数炭饱和 FAME 混合物的GC/FID 色谱图 对于使用传统37组分FAME 混标验证其FAME 方法的实验室，图5展示了在 Intuvo9000 气相色谱仪上使用20mx0.18mm、0.20 um DB-FastFAME 色谱柱得到的色谱图。该方法采用氦气作为载气，在8分钟内实现了所有化合物的完全分离。 图4.采用方法2并以氢气作为载气时在20mx0.18 mm， 0.20 um DB-FastFAME Intuvo 色谱柱(见表2)上得到的 FAME 36组分混合物的 GC/FID色谱图 图5.采用方法3并以氦气作为载气时在20 mx0.18 mm， 0.20 um DB-FastFAME Intuvo 气相色谱柱上(见表3)得到的37组分 FAME 混标的 GC/FID色谱图 与预期结果一样，采用氢气作为载气可加快分析速度，而分离度几乎相同。图6所示的结果表明，采用氢气作为载气可在6.5分钟的分析时间内实现37组分FAME混标中所有化合物的完全分离。 DB-FastFAME Intuvo 气相色谱柱可快速、出色地分离 FAME 混合物。本应用简报表明，采用氦气作为载气时， DB-FastFAME Intuvo 气相色谱柱可在5分钟内完全分离 FAME 36 组分混合物中的所有组分，包括关键 AOAC 对和关键顺反脂肪酸异构体。本实验也表明，此方法还能实现菜籽油的快速分析。采用氢气作为载气时，这种高效的 DB-FastFAME Intuvo气相色谱柱将运行时间缩短至4分钟以内，同时实现了所有化合物的基线分离。配备 DB-FastFAME 气相色谱柱的 Intuvo9000气相色谱仪可实现低成本高效率的FAME 分析。 ( 1. A OAC Official Methods of Analysis(2000)， method Ce 2-66 ) ( 2. IUPAC， Standard Methods for the Analysis of Oils， F ats and D e rivatives， Blackwell Scientific P ublications， IUPAC Method 2.301 ) ( 3. National Food Safety Standard，Determination of fatty acids in food (食品中脂肪酸的测定)， GB 5009.168-2016 ) ( 4. F. D avid， P. Sandra， A. K. Vickers. 脂肪酸甲酯分析色谱柱的选择安 捷伦科技公司应用简报，出版号 5989-3760CHCN， 2005 ) 时间(min) 图6.采用方法4并以氢气作为载气时在20 mx0.18 mm， 0.20 um DB-FastFAME Intuvo气相色谱柱(见表4)上得到的37组分 FAME 混标的 GC/FID 色谱图 查找当地的安捷伦客户中心： www.agilent.com/chem/contactus-cn 免费专线： 800-820-3278，400-820-3278(手机用户) www.agilent.com 联系我们： LSCA-China_800@agilent.com 本文中的信息、说明和指标如有变更，恕不另行通知。 在线询价： 脂肪酸甲酯 (FAME) 的分析可用于鉴定食品中的脂类组分，是食品分析中最重要的应用之一。本应用简报介绍了采用配备 Agilent J&W DB-FastFAME Intuvo 气相色谱柱的 Agilent Intuvo 9000 气相色谱系统对 FAME 混标实现快速、良好的分离。